ClC-3在人胶质瘤中的表达及分布

目的探讨ClC-3在人脑胶质瘤中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组织化学染色技术检测24例人胶质瘤以及4例脑转移癌手术标本中ClC-3蛋白的表达;RT-PCR检测ClC-3蛋白表达阳性的手术标本中其mRNA表达。结果4例正常脑组织ClC-3蛋白的表达为阴性;而蛋白表达阳性的19例胶质瘤及4例脑转移癌中,ClC-3主要位于瘤细胞和微血管内皮细胞的胞浆或胞膜上。蛋白表达阳性的手术标本中16例胶质瘤和4例脑转移癌检测到ClC-3mRNA的表达。少突胶质细胞瘤Ⅲ级中ClC-3的mRNA和蛋白表达明显高于其Ⅱ级。结论ClC-3在人胶质瘤及脑转移癌组织中普遍表达,并且可能与少突胶质细胞瘤病理分级相关。

氯通道蛋白-3在透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞中的表达

目的研究透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞氯通道蛋白-3(chloride channel protein 3,CLC-3)的表达。方法随机收集40例老年性白内障手术患者和5例透明晶状体(来自晶状体脱位患者)的晶状体前囊膜,采用免疫组织化学染色和免疫荧光技术检测晶状体上皮细胞CLC-3的表达。结果CLC-3阳性表达于晶状体上皮细胞的细胞膜。老年白内障组40张切片中,CLC-3表达均为阳性。而透明晶状体组5张切片中,4张阴性,1张可疑阳性。计算机图像分析结果,透明晶状体组平均吸光度(A)值明显低于老年白内障组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障患者晶状体上皮细胞CLC-3表达阳性,CLC-3可能参与老年性白内障的形成。

SWE检查联合氯离子通道蛋白-3在诊断宫颈癌中的应用

本文探究实时剪切波弹性成像(SWE)联合氯离子通道蛋白-3(ClC-3)诊断宫颈癌的价值。选取疑似宫颈病变的105例患者作为研究对象,包括50例良性病变患者(良性病变组)和55例宫颈癌患者(宫颈癌组),选取同期50例体检健康者作为对照组。通过SWE检查所有受试者的弹性模量最大值、弹性模量平均值。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血清ClC-3 mRNA水平。以临床病理诊断为金标准,通过ROC曲线评价弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA诊断宫颈癌的价值。与对照组和良性病变组相比,宫颈癌组患者弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA水平升高(P<0.05)。弹性模量最大值和弹性模量平均值均与ClC-3 mRNA显著正相关(r=0.447,P<0.001),与单一检查相比,弹性模量最大值、弹性模量平均值、ClC-3 mRNA联合诊断宫颈癌的AUC和敏感度升高(P<0.05)。SWE成像参数与血清ClC-3 mRNA变化与宫颈癌发生具有一定相关性,SWE联合血清ClC-3 mRNA检查具有较高的宫颈癌诊断价值。

氯通道蛋白-3和水通道蛋白-1在大鼠半乳糖性白内障晶状体中表达水平的变化

目的研究大鼠半乳糖性白内障晶状体中氯离子通道蛋白-3(CLC-3)和水通道蛋白-1(AQP-1)表达水平的变化,探讨CLC-3和AQP-1与白内障发病的关系。方法健康清洁级Wistar大鼠88只随机分为空白对照组(8只)、生理盐水组(40只)和半乳糖性白内障模型组(Gal组)(40只)。生理盐水组和Gal组根据处理时间不同各亚分为5个亚组,每个亚组8只大鼠。Gal组单侧眼球后注射D-半乳糖生理盐水注射液,生理盐水组同期单侧眼球后注射等体积无菌生理盐水,每日裂隙灯下观察大鼠晶状体混浊的动态变化,并参照Kador等的分级标准分期记录。分别于第1次给药后第3、7、14、21、30天在全身麻醉下处死各组实验大鼠,摘出晶状体,应用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体中CLC-3mRNA和AQP-1mRNA含量的变化。结果透明晶状体和半乳糖性白内障晶状体中均有CLC-3mRNA和AQP-1mRNA的表达;生理盐水组各时间点CLC-3mRNA和AQP-1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);Gal组于3、7、14d时CLC-3mRNA表达逐渐增高,均高于同期生理盐水组,到14d时约达正常水平的7倍,21d、30d时又有所下降,均低于同期生理盐水组(P<0.01);各时间点晶状体CLC-3mRNA含量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01);模型组于3d时AQP-1mRNA表达已下降,与同期生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着白内障的进一步发展,AQP-1mRNA含量逐渐降低,均低于同期生理盐水组(P<0.01);各时间点晶状体AQP-1mRNA含量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论晶状体中CLC-3和AQP-1表达的变化可能与白内障的发生发展有着密切的联系。

CLIC4、SNHG3表达与Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者预后的关系

目的探讨细胞内氯通道蛋白4(CLIC4)、小核仁RNA宿主基因3(SNHG3)与Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者预后的关系。方法选取113例Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者(卵巢癌组)和76例良性卵巢囊肿患者(对照组),采用免疫组化法检测组织样本中CLIC4的表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测组织样本中SNHG3的相对表达量。同时收集所有对象的临床资料。采用Kaplan-Meier生存曲线分析CLIC4、SNHG3对卵巢癌患者预后(生存)的影响。采用Cox比例回归分析评估Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌预后的影响因素。结果卵巢癌组CLIC4阳性的高表达率、CLIC4免疫组化积分百分率及SNHG3相对表达量均高于对照组(P<0.001)。CLIC4高表达与Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者的病理类型(浆液性癌)、组织学分级(G2~G3级)、临床分期(Ⅱ期)有关(P<0.05)。浆液性癌患者、黏液性癌患者与子宫内膜样癌患者CLIC4表达差异有统计学意义(P=0.000),其他病理类型之间差异均无统计学意义(P>0.05)。SNHG3高表达与卵巢癌组织学分级、临床分期有关(P<0.05)。CLIC4高表达组总体生存率(OS)、疾病无进展生存率(PFS)均低于CLIC4低表达组(P<0.05)。SNHG3高表达组OS、PFS均低于SNHG3低表达组(P<0.05)。Cox比例回归分析结果显示,糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、CLIC4、SNHG3、组织学分级、临床分期均是Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者预后(生存)的影响因素。结论 CLIC4、SNHG3高表达与Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌的临床病理特征及预后有关。CLIC4、SNHG3均是Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌患者预后(生存)的影响因素。

ClC-3基因敲除不影响心肌细胞肿胀激活性氯通道的PKC敏感性

目的 :探讨小鼠心室肌细胞肿胀激活性氯 (VSORCl-)通道的蛋白激酶C (PKC)敏感性是否受ClC 3的影响 .方法 :采用基因打靶、RT PCR、膜片钳全细胞记录技术分别获得ClC 3基因敲除小鼠 (Clcn3-/ -)、验证心肌ClC 3mRNA表达、及记录VSORCl-电流 .结果 :①低渗条件下 1 μmol/L佛波酯 (PMA)明显增大VSORCl-电流 ;②等渗条件下PMA 预处理不影响基础电流 ,随后低渗刺激性VSORCl-电流激活时程明显缩短 ;③PMA对VSORCl-电流的增强作用在野生型和Clcn3-/ -小鼠无明显区别 ;④ 1 0 μmol/L白屈菜红硷 (CHE) 预处理明显抑制低渗激活性VSORCl-电流 ,并消除PMA 后处理对VSORCl-通道的上调作用 .结论 :小鼠心室肌细胞VSORCl-通道激活主要依赖于内源性PKC活性 ,VSORCl-通道的PKC依赖性不受ClC

唾液腺黏液表皮样癌中CLIC3的表达及意义

目的 :探讨细胞内氯离子通道蛋白3(chloride intracellular channel protein 3,CLIC3)在唾液腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学和Western免疫印迹方法检测MEC细胞株M3SP2和MC3中CLIC3的表达情况。应用免疫组织化学方法检测49例大唾液腺和18例小唾液腺MEC组织中CLIC3的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:CLIC3在黏液表皮样癌组织中的阳性表达率为83.6%,正常唾液腺组织中无阳性表达(P<0.01)。CLIC3的高表达与唾液腺MEC的临床病理参数之间无显著相关性(P>0.05)。黏液表皮癌细胞株M3SP2和MC3均阳性表达CLIC3蛋白。结论:CLIC3可能在MEC的发生与发展中发挥一定作用。

ClC-3在糖尿病大鼠主动脉平滑肌、肾脏及脑组织中的表达及其变化

【目的】在糖尿病发展的不同时期探讨容积依赖性氯通道蛋白-3(ClC-3)的表达及其变化。【方法】用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型后,在第2、4、8、12和16周,用蛋白印记法检测主动脉、肾脏(皮质、髓质)及脑组织上ClC-3蛋白的表达。【结果】各组织上均检测到内源性ClC-3蛋白的表达,分子量在80KDa-110KDa之间;与对照组相比,糖尿病时大鼠主动脉平滑肌及脑组织上ClC-3蛋白的表达在第8周后显著性升高(P<0.05),肾髓质上ClC-3蛋白的表达显著性降低(P<0.05),而肾皮质上ClC-3蛋白的表达未见显著性差异。【结论】除肾皮质外,在糖尿病第8周开始,ClC-3蛋白在主动脉平滑肌及脑组织上表达显著性增加,而肾髓质表达显著性降低。

ClC-3在人肺癌中的表达及分布

目的:探讨ClC-3在人肺癌组织中的表达及其生物学意义.方法:应用免疫组织化学染色技术检测76例人肺癌标本中ClC-3蛋白的表达.结果:76例人肺癌标本中阳性表达69例(90.8%),对照组10例正常肺组织ClC-3蛋白的表达为阴性;而蛋白表达阳性的69例肺癌中,ClC-3主要位于瘤细胞和微血管内皮细胞的胞浆内或细胞膜上.随着TNM分期升级,ClC-3蛋白表达也呈逐渐上调趋势(P<0.01).结论:ClC-3在人肺癌及肺转移癌组织中普遍表达,并且可能与肺癌TNM分期相关.

腹腔注射去甲肾上腺素小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3表达变化及其意义

目的观察腹腔注射去甲肾上腺素(NE)小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3(Cl C-3)表达变化,并探讨其意义。方法将C57BL/6小鼠分为NE组、酚妥拉明(Phe)+NE组、对照组; NE组每天腹腔注射NE(2 mg/kg); Phe+NE组每天先腹腔注射Phe(8 mg/kg),2 h后再腹腔注射NE(2 mg/kg);对照组每天腹腔注射等量生理盐水。所有药物连续注射7 d后,测算各组小鼠心脏指数并观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3和心房钠尿肽(ANF) mRNA,Western blotting法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3蛋白。结果 NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心脏指数分别为5. 22±0. 46、4. 80±0. 23、4. 61±0. 25,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05; NE组小鼠心肌细胞和心肌肌束排列异常,心肌细胞及细胞核异常肥大、变形,细胞核聚集,出现明显的心脏重构、心肌细胞增大现象。NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心肌组织中Cl C-3 mRNA的相对表达量分别为0. 50±0. 10、1. 16±0. 38、1. 00±0. 00,ANF mRNA的相对表达量分别为2. 95±1. 78、1. 96±0. 75、1. 00±0. 00,Cl C-3蛋白的相对表达量分别为0. 46±0. 02、0. 68±0. 02、0. 69±0. 04,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05。结论 NE可诱导小鼠心肌肥厚,其机制可能与其抑制Cl C-3 mRNA和蛋白的表达有关。

过表达氯离子通道蛋白3对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用与机制

目的探讨氯离子通道蛋白3(ClC-3)基因过表达对异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用及机制。方法运用腺相关病毒9(AAV9)感染方法构建ClC-3过表达小鼠模型和原代心肌细胞模型,采用蛋白质印迹法与qRT-PCR检测小鼠心脏组织和原代心肌细胞中ClC-3的表达以确定模型是否建立成功。32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只。对照组连续7 d腹腔注射生理盐水,ISO组连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-bv+ISO组用空白载体AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1。采用心脏超声检查小鼠心功能变化,计算心脏体重指数,采用qRT-PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)的mRNA表达水平,H-E染色观察左心室形态学变化,苦味酸-天狼星红(PSR)染色观察心脏组织胶原纤维变化。取乳鼠摘出心脏,体外培养原代心肌细胞并分为4组,对照组未予任何干预,ISO组用0.1μmol/L ISO干预48 h,AAV9-ClC-3组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染细胞48 h,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒和0.1μmol/L ISO共同干预48 h。采用芯片膜片钳技术检测小鼠原代心肌细胞的容积激活性氯电流(ICl,vol)。结果蛋白质印迹法和qRT-PCR检测结果均表明ClC-3过表达小鼠和原代心肌细胞模型成功建立。AAV9介导的ClC-3过表达能缓解ISO诱导的小鼠心脏体重指数、收缩末期室间隔厚度、收缩期左室后壁厚度和舒张期左室后壁厚度的增加,改善心脏组织形态学异常和心脏纤维化,减少心脏组织中ANP、BNP mRNA表达的增加,并能体外抑制ISO导致的心肌细胞ICl,vol降低。结论ClC-3过表达可预防ISO诱导的小鼠心肌肥厚,其机制可能与心肌细胞ICl,vol激活有关。

转染ClC-3 siRNA的大鼠成骨细胞增殖、分化观察

目的观察转染Cl C-3 siRNA的大鼠成骨细胞增殖、分化情况。方法原代提取成骨细胞,将细胞分为四组,Control组细胞不做任何处理,NC组细胞转染无序siRNA,Lipo组细胞转染LipofectamineTM2000转染试剂,Cl C-3 siRNA组细胞转染Cl C-3 siRNA,各组细胞加载流体剪切力行力学刺激。采用MMT法检测各组细胞培养24、48、72 h时的光密度值;同时检测各组细胞碱性磷酸酶水平及成骨细胞钙化结节形成能力。结果与Control组相比,Cl C-3 siRNA组细胞各时点光密度值降低(P均<0.01)。Cl C-3 siRNA组、Lipo组、NC组、Control组成骨细胞碱性磷酸酶水平分别为(32.434±2.130)、(46.199±1.900)、(47.347±2.500)、(49.540±1.550)U/m L,钙化结节形成能力分别为25.02%±3.46%、36.83%±4.54%、38.45%±4.84%、40.57%±2.22%,Cl C-3 siRNA组与Control组相比,P均<0.01。结论转染Cl C-3 siRNA可抑制大鼠成骨细胞的增殖、分化。

氯离子通道蛋白-3在胶质瘤免疫逃逸中的作用及其机制

近些年来免疫逃逸在肿瘤发生、发展中所起的作用受到越来越多学者的关注。胶质瘤起源于神经上皮组织,是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其复发率高、预后差。究其原因,高度侵袭性和免疫逃逸是导致胶质瘤患者预后不良的原因之一。氯离子通道蛋白-3(chloride channel-3,Cl C-3)作为氯通道家族一员,在胶质瘤中高表达并广泛参与细胞容积调节、增殖、迁移及凋亡等多种生理过程;但其是否介导胶质瘤的免疫逃逸目前未见报道。

硫化氢激活H9c2心肌细胞容积调节性氯通道

目的观察硫化氢(H2S)对H9c2心肌细胞容积调节性氯通道(VRCC)的影响。方法培养大鼠H9c2心肌细胞,用H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理H9c2心肌细胞。分别应用Western blot和全细胞膜片钳技术分析蛋白的表达和VRCC的开放和关闭。结果等张灌流液处理的H9c2心肌细胞可记录到微弱的背景氯电流。低张灌流液处理可明显增加H9c2心肌细胞的氯电流(P<0.01),高张灌流液处理则可减弱这种增强作用(P<0.05)。Western blot检测显示H9c2心肌细胞上存在ClC-3氯通道蛋白的表达。用400μmol/L NaHS处理0～30 min可激活H9c2心肌细胞上的氯通道,高张灌流液处理抑制NaHS处理诱导的氯通道激活。400μmol/L NaHS处理0～30min对H9c2心肌细胞ClC-3氯通道蛋白的表达无明显影响(P>0.05)。结论 H9c2心肌细胞存在VRCC和ClC-3氯通道蛋白的表达,H2S处理可激活VRCC而不影响ClC-3氯通道蛋白的表达。

肾上腺素对新生大鼠心肌细胞体积的影响及其作用机制

目的观察肾上腺素(Adr)对新生大鼠心肌细胞体积的影响,并探讨其机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,分为观察组和对照组,观察组加入Adr(1μmol/L),对照组加入等体积PBS,培养48 h。采用Count Star自动细胞计数仪测量各组心肌细胞体积变化;荧光显微镜观察心肌细胞氯通道蛋白3(Cl C-3)荧光强度,在所有拍摄条件相同尤其是曝光时间相同的条件下对心肌细胞拍照,用Image Pro Plus分析软件定量分析心肌细胞Cl C-3的平均光密度(AOD);Western blotting法检测心肌细胞Cl C-3。结果观察组及对照组心肌细胞体积分别为(964.80±60.00)、(716.28±57.49)μm3,心肌细胞Cl C-3的AOD分别为0.037±0.012、0.062±0.009,心肌细胞Cl C-3的相对表达量分别为0.372±0.027、1.040±0.210,两组比较,P均<0.05。结论 Adr能诱导新生大鼠心肌细胞肥大,其机制可能与下调Cl C-3表达有关。

气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变

目的探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替代OVA;2组小鼠在第18天回收肺组织,采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性,荧光定量PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、Claudin 3、Claudin 4、Claudin 5、Claudin 7、Clau-din 10在肺组织中的表达。结果哮喘组Claudin 3、Claudin 4、Claudin 10 m RNA水平较对照组低(P<0.05),而Clau-din 1、Claudin 5、Claudin 7 m RNA水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散,提示气道上皮屏障破坏。

抑制ClC-3表达促进顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的作用机制

目的:探讨抑制ClC-3基因表达对顺铂(DDP)复制的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞损伤促进作用过程中的具体作用机制,为应用DDP治疗卵巢癌提供实验依据。方法:转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒到人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法观察热休克蛋白(HSP70)、溶酶体组织蛋白酶D(cathepsin D)蛋白表达。结果:与SKOV3细胞比较,SK-OV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达增加(P<0.05)。转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达降低(P<0.05),cathepsin D蛋白表达增加(P<0.05)。结论:抑制ClC-3基因表达促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的可能作用机制与溶酶体膜通透性(LMP)增加有关。