白血病患者Prame基因的表达及其与WT1基因比较的临床意义

目的:探讨Prame(黑色素瘤特异性抗原)在白血病患者中的表达及其临床意义。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定58例白血病患者Prame mRNA的表达,并与WT1mRNA的表达相比较。结果:急性髓细胞性白血病(AML)患者Prame阳性表达率为52.2％,急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者Prame阳性表达率为66.7％,慢性粒细胞性白血病(CML)急性变患者Prame阳性表达率为55.6％;慢性及加速期CML患者11例、10名正常人外周血及10例非血液病患者骨髓细胞均未见Prame mRNA表达,其中1例AML和5例ALL患者Prame阳性而WT1阴性。对2例Prame阳性和4例Prame、WT1均阳性的患者短期随访发现所有患者化疗后Prame均有不同程度的下降。1例复发患者Prame表达再次升高且早于WT11个月,余3例白血病患者Prame和WT1表达的波动呈正比。结论:免疫抗原Prame是白血病的一个重要标记基因,与病程进展密切相关,有望成为白血病微小残留病灶检测和进行白血病免疫治疗的靶基因。

WT1基因在骨髓增生异常综合征中的表达及其与疾病进展的关系

目的 :观察 WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)不同亚型中的表达程度 ,探讨 WT1基因在MDS进展为急性白血病 (AL)进程中的表达规律。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)对 49例不同类型的 MDS患者外周血 WT1基因 (4种剪接变体 )表达情况进行测定。同时检测 66例 AL 患者〔其中包括由MDS转变而来的急性白血病 (post MDS AL)患者 8例〕及 16例健康对照者 WT1基因的表达。结果 :49例MDS患者 WT1阳性表达率为 2 2 .4% (11/4 9) ;难治性贫血 (RA) 13例 ,WT1阳性率为 0 (0 /13 ) ;原始细胞增多性难治性贫血 (RAEB) 2 4例 ,WT1阳性率为 2 5 .0 % (6/2 4) ;转化型原始细胞增多性难治性贫血 (RAEB t)12例 ,WT1阳性率为 41.7% (5 /12 )。 RA与 RAEB和 RAEB t比较差异有显著及非常显著性 (P<0 .0 5和P<0 .0 1)。 AL患者 66例 ,WT1阳性率为 48.5 % (3 2 /66) ,与 MDS组比较差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。 postMDS AL 8例 ,WT1阳性率为 5 0 .0 % (4 /8)。 16例正常健康对照者 WT1阳性率为 0 (0 /16)。结论 :WT1基因在 MDS中呈较高表达 ;WT1基因在 MDS的 RAEB、RAEB t中表达率较高 ,在 RA中表达率较低。RT PCR方法灵敏度高 ,特异性强 ,可作为监测 MDS疾病进程及向

WTI基因在再生障碍性贫血表达水平的临床意义探讨

目的探讨WTI基因在监测再生障碍性贫血病人病情变化中的临床意义,从而作为临床早期诊断,早期治疗的依据.方法采用逆转录-聚合酶链反应在 ABI Prism7300型荧光实时定量PCR仪上进行WTl基因检测,拷贝数〉1000为阳性.结果检测了248例再生障碍性贫血病人,有7例患者经骨髓形态学、骨髓活检确诊为MDS-RA1例,MDS-RCMD2例,MDS-RAEB Ⅰ2例,MDS-U2例.结论 WTI基因与不成熟的恶性细胞数量有关,可作为监测再生障碍性贫血病人的病情转归的分子监测指标.

WT1基因与白血病靶向治疗

WT1基因编码一种双向转录因子,对人类泌尿生殖系统的发育和wilms’瘤的发生发展有重要意义。WT1基因也参与人类的造血调控,参与造血细胞增殖、分化、凋亡等各个过程及白血病的形成,在多种白血病中均有异常高表达,故被认为是一种新的白血病抗原,用于制备白血病疫苗、表达WT1白血病细胞的体外净化及体内抗原特异性治疗,近年来利用反义RNA技术进行反义基因治疗也有较快发展。WT1成为白血病基因治疗和特异性免疫治疗的新靶点。

佛波酯诱导K562细胞分化过程中WT1基因表达及其异构体比例变化的研究

目的分析佛波酯(TPA)诱导 K562细胞分化过程中 WT1基因及其四种异构体表达水平及比例变化,探讨 WT1基因不同异构体与细胞分化的关系。方法采用 TPA 诱导 K562细胞分化,以硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验及细胞免疫表型 CD9检测判断细胞分化程度;实时荧光定量 RT-PCR技术检测 K562细胞被诱导分化过程中总 WT1基因表达水平,并计算出 WT1(+/+)、WT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四种异构体在细胞分化过程中的比例变化。结果 TPA 诱导 K562细胞分化过程中 NBT 阳性率及 CD9表达阳性率均有显著增加(P<0.05)。WT1相对表达水平由分化前(4.67±1.11)×10^(-3),降到(1.67±0.45)×10^(-3)(P<0.05),随后回升,96 h达(4.64±1.53)×10^(-3);四种异构体比例变化不一致,WT1(+/+)比例由0 h的(39.65±19.46)%降至96 h的(15.25±7.27)%,而 WT1(-/-)异构体由0 h的(15.38±11.34)%上升至96 h的(37.60±11.90)%,另外两种异构体比例变化无显著性差异。结论 TPA 诱导 K562细胞分化过程中总 WT1表达水平24 h内迅速下降,随后回升。分化前异构体以 WT1(+/+)为主,而分化后以 WT1(-/-)为主,提示 WT1基因可能通过调节四种异构体的比例而发挥抑制分化或促进分化的作用。

WT1基因在急性髓系白血病微小残留病监测中的应用

目的研究WTl基因作为微小残留病（MRD）监测指标在急性髓系白血病（AML）预后中的应用，并探索WTlmRNA预测复发的阈值。方法回顾性分析121例诱导缓解并行巩固治疗的AML患者（非急性早幼粒细胞白血病）WTlmRNA的动态表达水平。比较巩固治疗后不同转归组患者的wTlmRNA表达水平，依据受试者工作特征（ROC）曲线确定可预测临床复发的wTlmRNA阈值。WTlmRNA水平采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法检测。结果确立WTlmRNA〉2．98％提示高风险复发。为了临床应用方便，将提示复发的WTlmRNA阈值设为3．00％。41例患者初诊时检测了wTlmRNA水平，剔除3例初诊wTlmRNA低于3．00％的患者，余下38例患者初诊wTlmRNA中位值为44．09％（7．19％～188．06％）。缓解期351份标本WTlmRNA检测值中位为0．48％（0-8．41％）。初诊WTlmRNA水平高于缓解期水平。除外初诊WTlmRNA水平低于3．00％的3例患者，巩固治疗开始后WTl阳性组（〉3．00％）和阴性组（≤3．00％）复发率分别为70．O％（14／20）和12．2％（12／98）（P〈0．001）。WTlmRNA升高达阈值后到复发的中位时间为58d。结论WTl基因可以作为AML患者巩固治疗开始后的MRD监测指标，WTlmRNA〉3．00％提示存在复发风险。

WT1基因在猪泌尿生殖器官中表达情况的研究

为了研究维尔姆氏瘤基因1(WT1基因)在成体猪各器官表达水平的差异,以及WT1基因在猪胚胎期和成体两个阶段泌尿生殖器官的表达位置,试验以猪作为研究对象,利用荧光定量PCR和免疫荧光染色等技术,对WT1基因在胚胎时期和成体猪各器官的表达情况进行了研究。结果表明:WT1基因在成体猪心脏、脾脏、肾脏、卵巢和睾丸中高表达,在肝脏和肺脏中低表达;在猪胚胎时期主要表达在肾脏中的comma-小体和S-小体、卵巢的皮质和睾丸中的曲细精索周围的间质细胞中;在成体中WT1基因主要表达在肾小管、睾丸曲细精管周围的间质细胞和卵巢的卵泡膜外层细胞中。说明WT1基因对猪胚胎时期泌尿生殖器官的发育、形成以及成体泌尿生殖器官功能的维持发挥重要作用。