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利用Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因
被引量:
1
1
作者
杨公进
马中瑞
+1 位作者
信国
陈敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期83-87,共5页
目的:利用λ噬菌体Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因。方法:以pKD4为模板扩增出与waaL基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的PCR产物。然后电击转化到大肠杆菌O157∶H7中,利用Red重组系统,通过卡那霉素抗性基因两侧的waa...
目的:利用λ噬菌体Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因。方法:以pKD4为模板扩增出与waaL基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的PCR产物。然后电击转化到大肠杆菌O157∶H7中,利用Red重组系统,通过卡那霉素抗性基因两侧的waaL基因序列在体内与waaL基因发生同源重组,置换了O157∶H7基因组中的waaL基因。并进一步利用卡那霉素抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因敲除。结果:成功构建了敲除waaL基因且不带卡那霉素抗性基因的菌株。
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关键词
O157∶H7
λ-Red重组系统
waal基因
原文传递
阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因(waaL,waaG)缺失突变株的构建及分析
被引量:
6
2
作者
王金星
费娜
+4 位作者
王睿瑞
吴国军
张梦晖
赵立平
张晓君
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期1-9,共9页
脂多糖(LPS)在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产...
脂多糖(LPS)在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产生的LPS的差异。根据同源重组技术原理,利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101△waaL和pKNG101△waaG,转化E.coli SM10菌株,并与B29菌株进行双亲杂交,再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL和waaG基因缺失突变株;利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA测序结果均证实突变株B29△waaL和B29△waaG构建成功;最后,对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29菌株的脂多糖为光滑型结构,突变株的LPS结构明显缺失O抗原,B29△waaG突变株同时还缺失了外部核心部分;用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示,突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降;B29△waaL突变株的生长速率与野生型相当,而B29△waaG突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株,为下一步利用突变株研究B29菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。
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关键词
阴沟肠杆菌
脂多糖
waal基因
waaG
基因
内毒素活性
原文传递
大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立及验证
被引量:
2
3
作者
卞晓萍
刘青
+2 位作者
孔庆科
罗洪艳
李沛
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期110-116,共7页
根据大肠杆菌W3110菌株的waaL基因序列设计CRISPR/Cas9的作用靶点,构建sgRNA表达质粒,然后设计同源修复供体DNA序列,通过电转化法导入宿主菌内,从而构建完整的大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统。结果显示,应用该系统成功地构建了大肠杆...
根据大肠杆菌W3110菌株的waaL基因序列设计CRISPR/Cas9的作用靶点,构建sgRNA表达质粒,然后设计同源修复供体DNA序列,通过电转化法导入宿主菌内,从而构建完整的大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统。结果显示,应用该系统成功地构建了大肠杆菌waaL基因缺失株。将该系统继续用于大肠杆菌W3110菌株wecA基因的缺失,结果表明,该系统可快速高效地用于大肠杆菌基因缺失,这为构建大肠杆菌生物工程菌奠定基础。
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关键词
CRISPR/Cas9系统
基因
编辑
大肠杆菌
waal基因
wecA
基因
原文传递
题名
利用Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因
被引量:
1
1
作者
杨公进
马中瑞
信国
陈敏
机构
山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室国家糖工程技术研究中心
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期83-87,共5页
基金
国家自然科学基金(3107082)
国家"863"计划(2007AA10Z404)
山东省自然科学基金(2009ZRB019SQ)资助项目
文摘
目的:利用λ噬菌体Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因。方法:以pKD4为模板扩增出与waaL基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的PCR产物。然后电击转化到大肠杆菌O157∶H7中,利用Red重组系统,通过卡那霉素抗性基因两侧的waaL基因序列在体内与waaL基因发生同源重组,置换了O157∶H7基因组中的waaL基因。并进一步利用卡那霉素抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因敲除。结果:成功构建了敲除waaL基因且不带卡那霉素抗性基因的菌株。
关键词
O157∶H7
λ-Red重组系统
waal基因
Keywords
O157∶H7 λ-Red recombination system
waal
gene
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因(waaL,waaG)缺失突变株的构建及分析
被引量:
6
2
作者
王金星
费娜
王睿瑞
吴国军
张梦晖
赵立平
张晓君
机构
上海交通大学生命科学技术学院
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期1-9,共9页
基金
国家自然科学基金重点项目(31330005)和面上项目(21177086)共同资助
文摘
脂多糖(LPS)在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产生的LPS的差异。根据同源重组技术原理,利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101△waaL和pKNG101△waaG,转化E.coli SM10菌株,并与B29菌株进行双亲杂交,再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL和waaG基因缺失突变株;利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA测序结果均证实突变株B29△waaL和B29△waaG构建成功;最后,对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29菌株的脂多糖为光滑型结构,突变株的LPS结构明显缺失O抗原,B29△waaG突变株同时还缺失了外部核心部分;用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示,突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降;B29△waaL突变株的生长速率与野生型相当,而B29△waaG突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株,为下一步利用突变株研究B29菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。
关键词
阴沟肠杆菌
脂多糖
waal基因
waaG
基因
内毒素活性
Keywords
Enterobacter cloacae, Lipopolysaccharide,
waal
gene, waaG gene, Endotoxin activity
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立及验证
被引量:
2
3
作者
卞晓萍
刘青
孔庆科
罗洪艳
李沛
机构
西南大学
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期110-116,共7页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(SWU118073,SWU118074)
重庆市自然科学基金资助项目(cstc2019jcyj-msxmX0532)。
文摘
根据大肠杆菌W3110菌株的waaL基因序列设计CRISPR/Cas9的作用靶点,构建sgRNA表达质粒,然后设计同源修复供体DNA序列,通过电转化法导入宿主菌内,从而构建完整的大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统。结果显示,应用该系统成功地构建了大肠杆菌waaL基因缺失株。将该系统继续用于大肠杆菌W3110菌株wecA基因的缺失,结果表明,该系统可快速高效地用于大肠杆菌基因缺失,这为构建大肠杆菌生物工程菌奠定基础。
关键词
CRISPR/Cas9系统
基因
编辑
大肠杆菌
waal基因
wecA
基因
Keywords
CRISPR/Cas9 system
gene editing
E.coli
waal
gene
wecA gene
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
R535 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因
杨公进
马中瑞
信国
陈敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
原文传递
2
阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因(waaL,waaG)缺失突变株的构建及分析
王金星
费娜
王睿瑞
吴国军
张梦晖
赵立平
张晓君
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
6
原文传递
3
大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立及验证
卞晓萍
刘青
孔庆科
罗洪艳
李沛
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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