化橘红黄酮深共熔溶剂提取工艺优化及抗氧化活性研究

[目的]提高化橘红在功能食品及医药等领域的应用。[方法]选取深共熔溶剂体系、深共熔溶剂含水率、料液比、提取温度和提取时间为试验因素,以黄酮得率为指标进行单因素试验,从中筛选出具有显著性差异的因素,并采用响应面法优化深共熔溶剂提取化橘红黄酮工艺;以DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除能力评价化橘红黄酮提取液的抗氧化活性。[结果]氯化胆碱—乙二醇体系提取的化橘红黄酮得率最高。深共熔溶剂含水率、料液比、提取温度对化橘红黄酮的得率有显著影响,以此为基础进行响应面分析得到化橘红黄酮的最优提取工艺:深共熔溶剂含水率43%、料液比1∶21(g/mL)、提取温度60℃,化橘红黄酮得率为(19.31±0.47)mg/g。对最优工艺条件下得到的化橘红黄酮提取液进行抗氧化活性研究,结果显示,化橘红黄酮提取液对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除率的半最大效应质量浓度分别为(117.61±1.71),(36.91±0.46),(387.52±1.85)μg/mL。[结论]深共熔溶剂提取化橘红黄酮的得率显著优于传统水提法和乙醇溶剂提取法(P<0.05);化橘红黄酮具有作为天然抗氧化剂来源的潜力。

化橘红提取物的制备工艺优化及其降脂作用

采用单因素试验和L_(9)(3^(4))正交试验设计法,以加水量、提取次数、提取时间和提取温度为考察对象,以化橘红柚皮苷质量分数和干浸膏质量分数为考察指标,确定化橘红最佳提取工艺参数;并通过饲喂高脂饲料建立混合型高脂血症小鼠模型,探讨化橘红提取物对实验小鼠高脂血症的降脂作用。结果表明,化橘红水提物的优选制备工艺参数为:以水作为溶媒,料液比1:30,提取温度70℃,提取3次,每次60min。在此工艺条件下,化橘红水提物柚皮苷质量分数为56.15 mg/g,传统工艺主要以乙醇为溶媒,此工艺可为化橘红水提提供参考。与模型组相比,化橘红高剂量组胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平分别降低了47.11%,36.84%和65.18%,肝指数和Lee’s指数显著降低,血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平分别降低了56.68%和56.63%,且可以改善肝细胞肿胀变性,减轻脂滴沉积以及脂肪空泡形成。结果说明,化橘红提取物对混合型高脂血症模型小鼠有降脂作用。

化橘红多糖的提取纯化及抗氧化活性研究

对化橘红粗多糖及其纯化组分的抗氧化活性进行研究。化橘红粉末经热水提取、乙醇沉淀、sevage法脱蛋白、透析得到粗多糖,粗多糖经DEAE-52纤维素阴离子交换层析柱分离,得到2个纯化组份ECP1和ECP2。采用化学法分别测定了粗多糖及其纯化组分的体外清除自由基(DPPH.,.OH,ABTS.+)能力、还原能力。粗多糖的多糖含量为74.29%,经DEAE-52纯化的组分ECP1和ECP2的多糖含量分别为83.39%和85.77%。结果表明粗多糖及其两个纯化组分均具有较好的抗氧化清除自由基的能力,并且抗氧化能力与多糖浓度之间存在良好的相关性。其中ECP2的抗氧化清除自由基能力强于ECP和ECP1,但是低于对照VC。

化橘红药材挥发油提取及用饱和水溶液法包合工艺研究

目的优选化橘红药材挥发油提取及包合的最佳工艺。方法以挥发油得率为指标,采用单因素试验考察挥发油的提取工艺;以挥发油包合率及包合物得率为评价指标,采用饱和水溶液法,进行L_9(3~4)正交试验,优选挥发油的包合工艺,并采用显微呈像分析、X射线衍射法对包合物进行表征。结果挥发油的最佳提取工艺为不浸泡,加10倍量水,提取10 h;最佳包合工艺为:油(mL)∶β-环糊精(g)∶水(mL)=1∶8∶80,包合温度为50℃,包合时间为3 h。包合工艺的验证试验显示,挥发油包合率、包合物得率平均值分别为91.50%、88.36%。显微镜法、X射线衍射法表明包合物形成,包合物状态良好。结论本试验优选出的挥发油提取及包合工艺稳定可行,可为制剂生产提供一定依据。

化橘红挥发油成分分析研究

运用同时蒸馏萃取法提取中药化橘红挥发油成分,毛细管气相色谱-质谱联用技术对挥发油成分进行分离,峰面积归一化法定量分析,共分离出143种成分,鉴定出其中的61种成分,其含量占挥发油总量的94.5%。主要成分是:柠檬烯(75.8%)、棕榈酸(3.8%)等。

化橘红黄酮类化合物抑制亚硝化反应活性研究

根据超声波最佳提取工艺条件提取得到化橘红总黄酮,经乙酸乙酯萃取分为酯溶性和水溶性两部分,比较它们对亚硝化反应的抑制作用,并分别采用硅胶柱层析对酯溶性成分分离纯化,采用大孔吸附树脂法对水溶性成分进行分离纯化,得到4个主要的黄酮类化合物,研究它们对亚硝化反应的抑制作用,以期得到抑制亚硝化活性较强的化合物。结果表明化橘红总黄酮提取率可达26.42%,酯溶性和水溶性部分均能阻断亚硝胺的合成及清除亚硝酸盐,其中水溶性黄酮提取物作用较强,分离得到的4个黄酮类化合物中柚皮苷的抑制作用较强,对亚硝胺的合成的最大阻断率可达94.7%,对亚硝酸盐的最大清除率可达92.3%。

正交试验法优选化橘红中肌醇提取工艺

【目的】优选化橘红中肌醇最佳提取工艺。【方法】以乙醇浓度、料液比和提取温度为考察因素,采用高效液相—蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)色谱法测定化橘红中肌醇含量,采用正交试验法优选化橘红中肌醇最优提取工艺。【结果】化橘红中肌醇最佳提取工艺为体积分数70%乙醇、料液比1∶20、提取温度100℃、每次时间45 min、提取2次。【结论】本研究优选得到的提取工艺稳定、提取率高,可用于化橘红中肌醇的提取。

化橘红有效成分柚皮苷的研究进展

柚皮苷是化橘红的主要有效成分之一,具有多方面的生物活性。从柚皮苷的提取工艺、检测方法、化橘红中柚皮苷含量的影响因素及其应用等方面进行综述,以期对柚皮苷研究提供一定理论基础。

化橘红提取物对幼龄大鼠厌食症的改善作用研究

目的 探究化橘红提取物对厌食症模型幼龄大鼠的药效学作用。方法 随机选取10只幼龄大鼠作为对照组给予常规饲料,其余50只幼龄大鼠采用病因模拟法建立厌食症模型,将造模成功的幼龄大鼠分成模型组、健胃消食片组(0.65 g/kg)和化橘红提取物低剂量(0.5 g/kg)、中剂量(1.0 g/kg)、高剂量(2.0 g/kg)组。连续灌胃给药14 d后,观察各组大鼠体质量及摄食量变化,检测胃酸浓度、胃蛋白酶活性,以及血清中胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、抑胃肽(GIP)水平,观察胃组织病理变化情况。结果 与对照组比较,模型组幼龄大鼠摄食量、胃酸浓度、胃蛋白酶活性、GAS、MTL水平显著下降,GIP水平显著升高(P<0.05);胃组织病理学检查出现明显胃黏膜充血、上皮细胞松解脱落现象。与模型组比较,各给药组经药物干预后,上述指标均有不同程度的改善,胃组织病理损伤减轻。结论 化橘红提取物通过调节胃酸浓度、胃蛋白酶活性、GAS、MTL、GIP水平,改善胃动力,保护胃黏膜,从而改善幼龄大鼠的厌食症。

橘红痰咳煎膏质量标准提升的研究

目的:建立橘红痰咳煎膏中五味子和苦杏仁的定性鉴别方法和化橘红的含量测定方法,以提高其质量标准的可控性。方法:采用薄层色谱(TLC)法,建立以五味子对照药材和五味子醇甲对照品作为参照的五味子的鉴别方法;建立以苦杏仁苷对照品作为参照的苦杏仁的鉴别方法。采用高效液相色谱(HPLC)法,建立以柚皮苷对照品和野漆树苷对照品为指标性成分的化橘红的含量测定方法,色谱柱为Kromasil 100-5-C18(5μm, 4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-醋酸-水(30∶4.3∶65.7),检测波长采用分段切换方式,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:TLC图谱色谱斑点清晰,Rf值适中,分离度及专属性均较好。柚皮苷和野漆树苷的进样量分别在0.28555~4.75923μg和0.01214~0.20227μg (r=1.0)的范围内与峰面积呈良好的线性关系;柚皮苷和野漆树苷的低、中、高水平的平均回收率分别为100.6%和98.9%、 99.8%和99.2%、 99.6%和99.9%, RSD分别为0.3%和0.5%、 0.5%和0.6%、 0.8%和0.4%(n=3);柚皮苷和野漆树苷重复性RSD分别为0.3%和0.7%(n=6)。结论:文章研究建立的质量控制方法准确、可靠、重复性较好,为橘红痰咳煎膏质量标准的提升奠定了研究基础和技术支持。

蒸汽温润法对化橘红中柚皮苷含量的影响

通过超声波提取法对化橘红中的柚皮苷进行提取,采用蒸汽温润法进行软化操作,先对温润的时间和温润的温度进行了单因素探究,然后两个因素组合搭配,从而获得温度和时间的最佳组合。本实验采用紫外分光光度计对化橘红中的柚皮苷含量进行检测,结果表明:在其他条件不变的情况下,在本实验设置的梯度里,蒸汽温润法的最佳软化条件是在60℃蒸汽温润9 h。

表面活性剂辅助超声波提取橘红胎总黄酮工艺优化及其抗氧化活性

采用响应面分析法,利用表面活性剂辅助超声波对橘红胎总黄酮的提取工艺进行优化,并考察其抗氧化活性。在单因素试验的基础上,选取乙醇浓度、十二烷基硫酸钠(SDS)质量分数、超声时间和超声温度为因变量,进行Box-Behken响应面试验设计,确定橘红胎总黄酮的最佳提取工艺条件。结果表明,橘红胎总黄酮的最佳工艺为:乙醇浓度50%、超声时间40min、SDS质量分数1.6%、超声温度51℃、液料比15∶1(m L/g),在此条件下,橘红胎总黄酮得率为6.78%,RSD为3.58%。橘红胎总黄酮对羟自由基具有较强的清除能力和较强的总还原能力,但是弱于维生素C,表明其具有一定的抗氧化活性。表面活性剂辅助超声波提取橘红胎中的总黄酮有较好的提取效果,本研究为橘红胎的综合开发利用和深入研究提供理论依据。

化橘红黄酮类化学成分研究进展

化橘红为中医临床常用理气药,主要活性成分为黄酮类化合物,包含柚皮苷、野漆树苷、芹菜素等。对近10年化橘红黄酮类化学成分研究相关的文献进行概述,对化橘红黄酮类成分的提取分离纯化、含量测定及药理作用进行总结,得出化橘红中黄酮类成分的提取、分离、纯化及含量测定的最佳方法分别为超声波提取法、高效液相色谱法、大孔树脂法和高效液相色谱-质谱联用法等,并得出相应的提取分离纯化最优工艺;化橘红黄酮类化学成分具有解酒精肝毒、化痰、抗炎、抗氧化等药理作用。上述结论为化橘红质量控制指标的选择、快速有效提取以及挖掘其潜在药理作用提供理论依据。

紫外可见分光光度法测定化橘红中总黄酮的含量

建立一种用紫外分光光度法测定化橘红中总黄酮含量的最佳提取方法。采用水浴加热回流提取法;紫外测定最大吸收波长为283 nm,紫外可见分光光度法测定化橘红中总黄酮含量。结果表明在12~28μg·mL^(-1)浓度范围内标准曲线的线性关系良好,相关系数为r=0.9999;在0~2 h该方法稳定性良好,RSD为1.1%。本方法简便快捷,适用于化橘红产品的提取和质量控制。

响应曲面法优化微波萃取化橘红多糖

目的:研究微波萃取技术在化橘红多糖提取中的应用。方法:选取工艺参数液料比、微波功率、微波温度、微波时间4个因素,分析其对多糖得率的影响,按试验设计做上述工艺参数的优化试验,采用Design-Expert软件对试验数据进行二次响应面分析。结果:优化的微波萃取化橘红多糖的最佳工艺条件:液料比70,微波功率546.56W,微波温度100℃,微波时间22.32min,在该条件下化橘红多糖得率24.64%。结论:微波萃取技术适用于化橘红多糖的提取,拟合的统计模型可信度高。本研究结果对微波萃取多糖技术的研究具有较好的借鉴意义。

正交试验优选橘红贴膏的乙醇渗漉提取工艺

目的:优选橘红贴膏的乙醇渗漉提取工艺条件。方法:以化橘红中柚皮苷提取量为考察指标,采用高效液相色谱法测定其含量,采用L9(34)正交试验进行优选。结果:优选工艺为:15倍量80%乙醇,浸润24 h,渗漉速度5 mL·min-1·kg-1。3批验证试验化橘红中柚皮苷平均转移率为79.0%。结论:优选的提取工艺合理,转移率较高。

化橘红水提物对酒精诱导的急性肝损伤保护作用

目的:探究化橘红水提物对酒精诱导急性肝损伤小鼠的药效学作用,为化橘红解酒保肝作用的开发应用提供数据支撑。方法:利用高效液相色谱法(HPLC)确定化橘红水提物的主要成分。根据体质量将60只Balb/c小鼠随机分为6个组:正常组、模型组、化橘红提取物低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g·kg^(-1))及海王金樽片组(2.0 g·kg^(-1))。正常组及模型组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。每天灌胃给药1次,连续给药14 d。给药结束前1 d,小鼠禁食不禁水12 h,除正常组外其他各组按体质量灌胃56°白酒(13 mL·kg^(-1)),2 h后摘眼球取血。解剖获得肝脏,称其湿重。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及乙醇脱氢酶(ADH)的表达水平;苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠肝脏组织病理变化;原位末端标记法(TUNEL)/DAB双染法观察阳性细胞数的比例判断细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达情况。结果:化橘红水提物HPLC特征图谱显示主要成分是野漆树苷和柚皮苷。与正常组比较,模型组小鼠肝体比显著增加(P<0.01),肝脏损伤酶ALT和AST的表达明显增加(P<0.05,P<0.01),乙醇脱氢酶(ADH)表达水平明显降低(P<0.05),肝小叶结构显模糊,肝组织呈现不同程度的病理改变,细胞胞浆显著疏松、水肿,脂肪变性较严重,TUNEL阳性率显著增加(P<0.01),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达显著降低(P<0.01),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)显著升高(P<0.01)。与模型组比较,化橘红水提物中剂量组能明显降低肝体比(P<0.05),化橘红水提物各剂量组能明显降低小鼠血清中ALT、AST活性(P<0.05,P<0.01),且能明显上调ADH的表达水平(P<0.05),能够明显改善由酒精引起的细胞胞浆疏松、水肿、脂肪变性的病理特征,明显降低肝细胞TUNEL阳性率(P<0.05,P<0.01),提升抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05),降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平(P<0.01)。结论:化橘红水提物通过调节ALT、AST、ADH的表达水平、改善肝脏脂肪病变和肝细胞凋亡,保护急性肝损伤。