藿乌粉的提取工艺研究

为了优化藿乌粉的提取工艺,研究以乙醇浓度、固液比、提取时间、提取次数为影响因素,以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B含量以及干膏得率为评价指标,采用层次分析法(AHP)、基于指标相关性的权重确定方法(CRITIC)、AHP-CRITIC混合加权法确定各评价指标的权重系数,根据单因素和正交试验结果优化提取工艺参数。结果表明AHP-CRITIC混合加权法确定出的权重系数更为科学、合理,优选出的最佳提取工艺为12倍量60%乙醇提取2次,每次1.5 h。3次验证试验综合评分均值为89.69,RSD值为0.63%。优选出的藿乌粉提取工艺经验证稳定可行,重复性好,可用于藿乌粉的制备。

制何首乌对大鼠肝CYP1A2酶活性及mRNA表达的抑制作用

目的:考察制何首乌水提物对大鼠肝细胞色素P450酶亚型CYP1A2的酶活性及mRNA表达的影响。方法:水回流提取得制何首乌水提物,HPLC确定主要成分并测定其含量。大鼠随机分为空白对照组、制何首乌水提物组(2 g/kg和20g/kg),给药组每天按10 m L/kg量灌胃给予制何首乌水提物,连续7 d。取肝分离肝微粒体,HPLC测定肝微粒体对CYP1A2酶的底物非那西丁的代谢消除率,考察肝微粒体CYP1A2酶活性;实时荧光定量PCR技术检测肝组织中CYP1A2基因mRNA的表达。结果:与空白对照组相比,制何首乌水提物20 g/kg组大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达均明显降低(CYP1A2酶活性,P<0.01;CYP1A2的mRNA表达,P<0.05)。结论:制何首乌水提物20 g/kg对大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达有明显抑制作用。

何首乌不同组分单次给药对小鼠肝毒性“量-时-毒”关系研究

目的观察何首乌不同组分单次给药对小鼠肝毒性"量-时-毒"关系的影响。方法 "时-毒"关系研究:取小鼠按不同时间点分组,单次灌胃给予一定剂量的何首乌水提组分、醇提组分,观察给药后小鼠死亡情况和毒性反应,分别于药后不同时间检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),计算肝、脾、胸腺脏器指数。"量-毒"关系研究:取小鼠按不同剂量分组,单次灌胃给予不同剂量的何首乌水提组分、醇提组分,分别于药后4h、2h按"时-毒"研究方法对小鼠进行相应处理。结果小鼠灌胃较高剂量何首乌水提组分后,血清ALT、AST活力在4h达到高峰,持续时间均约达24h;给药4h后小鼠出现肝脏明显肿大,肝指数升高,其中4～6h肝脏指数升高较为明显。小鼠灌胃较高剂量何首乌醇提组分后,血清ALT、AST活力在2h达到高峰,持续时间均约达48 h;给药2 h后小鼠出现肝脏明显肿大,肝指数升高,其中2～4h肝脏指数升高较为明显。何首乌水提组分剂量在(5.5～30.75)g.kg-1之间、醇提组分在(8.5～24.5)g.kg-1之间对肝组织产生明显损伤,且随着剂量增大,ALT、AST升高显著。结论小鼠单次灌胃给予一定剂量的何首乌水提组分或醇提组分可造成急性肝损伤,并呈现一定的"量-时-毒"关系。关于其肝脏损伤的机制有待进一步研究。

响应面法优化何首乌不同炮制品种中游离大黄素及大黄素甲醚提取工艺的研究

目的:研究不同炮制方式的何首乌中大黄素与大黄素甲醚的最佳提取工艺。方法:采用HPLC来测定何首乌生药、制何首乌、豆制何首乌中大黄素与大黄素甲醚的含量,以成分含量为指标,用响应面法建立甲醇浓度、料液比、提取时间3个因素的回归模型,优化提取工艺。结果:最佳提取工艺条件为纯甲醇,料液比1:30,提取时间1.5 h。在此条件下制何首乌中大黄素的含量为1.63 mg·g^(-1)生药,大黄素甲醚含量为0.95 mg·g^(-1)生药。结论:制何首乌中大黄素与大黄素甲醚含量较高。优化后的工艺适用于何首乌不同炮制品中游离大黄素和大黄素甲醚的提取测定。

正交试验优化杠板归的蜜炙工艺

目的：优化杠板归的蜜炙工艺。方法：以有效成分槲皮素和水溶性浸出物的含量为综合评价指标,选取蜂蜜用量、闷润时间、烘制温度及烘制时间为考察因素,采用L_9（3~4）正交试验优化杠板归的蜜炙工艺并进行验证试验。结果：最优蜜炙工艺条件为取杠板归药材加蜂蜜30%,闷润120 min,70℃温度下烘制50 min。验证试验中制备的3批炙杠板归的槲皮素含量均大于0.05%,水溶性浸出物含量均大于25%（RSD均〈2.5%,n=3）。结论：优化的炮制工艺稳定、可行,为规范杠板归饮片的蜜炙操作与成品质量控制提供了一定的参考依据。

制何首乌提取物及主要单体成分对细胞酪氨酸酶及抗氧化保护作用研究

为了探究制何首乌发挥乌发功效的机制,我们利用多巴速率氧化法、多巴染色法评价制何首乌水提物(PWE)、粗多糖及二苯乙烯苷、大黄素对B16F10中酪氨酸酶活性的影响,并利用实时荧光定量PCR法检测其对细胞酪氨酸酶mRNA表达量的影响。结果显示,受试药物对B16F10内酪氨酸酶活性无明显激活作用,但500μg/m L的PWE可显著激活酪氨酸酶mRNA表达;另一方面,利用DPPH自由基清除法测定PWE及大黄素、二苯乙烯苷的体外抗氧化能力,并利用Hep G2C8细胞模型考察其在细胞水平上的抗氧化能力,结果发现,PWE及二苯乙烯苷体外可浓度依赖地清除DPPH自由基,且能激活模型细胞Hep G2C8中ARE的表达,表明二者具有显著的抗氧化活性,或为制何首乌乌发作用要因。

何首乌多糖的提取分离与结构分析研究进展

何首乌多糖是何首乌中的主要活性成分,具有抗氧化、抗疲劳、抗衰老、抗老年痴呆、免疫调节、降血脂等活性。本文从何首乌多糖的提取分离和结构分析等方面对其研究进展进行综述,同时介绍了不同炮制方法对何首乌多糖的影响。通过对以上研究的总结,初步提出目前何首乌多糖研究中尚未解决的问题,以期为何首乌多糖结构分析和质量控制提供参考和借鉴。

何首乌水提物对光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓形成的抑制作用

目的:探讨何首乌水提物对光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓形成的抑制作用。方法:将24只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、何首乌组和阿司匹林组,每组6只。用光化学反应法诱导肠系膜细静脉血栓形成,观察各组血栓出现时间、血栓占血管面积一半所需时间、诱导停止后5min、10min、20min和30min时,各组血栓/血管面积比;然后在各组大鼠肠系膜表面滴加甲苯胺蓝,观察细静脉周围肥大细胞脱颗粒,并计算脱颗粒的肥大细胞比率。结果:何首乌水提物可以明显延迟血栓出现时间,明显缩短血栓占血管面积一半所需时间,显著降低血栓/血管面积比,显著减少血管周围肥大细胞脱颗粒。结论:何首乌水提物能明显抑制光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓形成。该作用可能与其抗氧化、抑制肥大细胞脱颗粒等密切相关。

制何首乌提取物及主要单体成分体外对酪氨酸酶活性的影响

采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法,体外评价制何首乌水提取物、乙醇提取物各分离组分及大黄素,大黄素甲醚,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等制何首乌主要单体成分对体外酪氨酸酶活性的影响。结果未在制何首乌中发现能够体外有效激活酪氨酸酶活性的成分,制何首乌水提物,制何首乌乙醇提取物的50%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷皆有浓度依赖的酪氨酸酶抑制活性,其中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在48μg/mL的浓度下即可达到46.72%的抑制率,具有美白产品研发价值。

制首乌醇提物及其主要成分大黄素对斑马鱼非酒精性脂肪肝的治疗作用

研究制首乌醇提物及其主要成分大黄素对斑马鱼非酒精性脂肪肝疾病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)的治疗作用。选取野生型斑马鱼若干,随机均分为对照组、模型组、制首乌醇提物(RPMP)组和大黄素(emodin)组,于胚胎受精后5天,对照组给于普通饲料AP100,模型组给予2 mg/mL蛋黄粉(EY powder),制首乌醇提物组分别给予2 mg/mL蛋黄粉与低剂量组(1 mg/mL)、中剂量组(1.5 mg/mL)、高剂量组(2 mg/mL),大黄素组分别给予2 mg/mL蛋黄粉与低剂量组(0.25μg/mL)、中剂量组(0.5μg/mL)、高剂量组(1μg/mL)。72 h后观察斑马鱼存活率和体重、体长、BMI的变化■,用整体油红染色评判脂肪肝发生率,石蜡切片观察肝组织病理形态,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)试剂盒判断斑马鱼体脂含量。制首乌醇提物组与大黄素组能显著降低非酒精性脂肪肝斑马鱼的死亡率、BMI、TG含量,并显著改善斑马鱼幼鱼肝脏脂质沉积情况(P<0.05)。由此可见制首乌醇提物与大黄素可有效治疗斑马鱼NAFLD,且大黄素可能为制首乌治疗NAFLD的主要有效成分。

炮制方法及提取溶剂对何首乌中主要成分含量的影响

目的:研究不同炮制方法及不同提取溶剂对何首乌中主要成分含量的影响。方法:采用黑豆汁蒸法和清蒸法对生何首乌进行炮制,分别用水、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇对生何首乌、黑豆汁制何首乌、清蒸制何首乌和市售制何首乌4种饮片进行提取,采用高效液相色谱法同时测定各样品中4种主要成分没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量。结果:3种何首乌炮制品的4种提取液中4种主要成分的含量均较生品中更高;没食子酸以水提时含量最高,二苯乙烯苷以90%乙醇提取时含量最低,大黄素和大黄素甲醚以50%和70%乙醇提取时含量较高。结论:不同炮制方法和提取溶剂能明显影响何首乌中主要成分的含量;各炮制品中各成分的含量变化未呈现一定的规律性。

何首乌提取工艺设计

目的 :分别以何首乌提取物 2 ,3 ,4,5 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷水平和提取物抗氧化能力为检测指标对何首乌进行提取工艺设计 ,并检验 2 ,3 ,4,5 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷和抗氧化能力之间的相关性。方法 :采用正交实验法以乙醇浓度 (A)、溶剂量 (B)、提取时间 (C)和提取次数 (D) 4个因素 ,每个因素选取 3个水平进行实验。结果 :因素A ,D对 2 ,3 ,4,5 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量有显著影响 ,同样对何首乌的抗氧化能力影响也最为显著 ,经检验 2 ,3 ,4,5 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷含量与何首乌的抗氧化能力之间呈显著线性相关 (P <0 .0 1)。结论 :以 60 %乙醇 ,8倍量提取 3次 ,每次 1.5h为最佳提取工艺。

夏枯草、何首乌水提物混合液对酪氨酸酶作用研究

探究夏枯草、何首乌水提物混合液对酪氨酸酶的作用。采用水提法,分别对夏枯草、何首乌提取并蒸发浓缩后,配制成不同浓度、不同比例混合的混合液,加入取自土豆的酪氨酸酶粗提液与L-酪氨酸溶液,使其反应。采用体外酪氨酸酶检测法,通过紫外分光光度计检测反应后的吸光度,根据吸光度计算出酶激活率。加入夏枯草、何首乌水提物混合液后,得到的酪氨酸酶的酶激活率均大于0。夏枯草、何首乌水提物混合液可提高酪氨酸酶的活性。

何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10 g·kg^(-1))7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响。与空白对照组相比,1,10 g·kg^(-1)何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P<0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg^(-1)组P<0.05,10 g·kg^(-1)组P<0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P<0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg^(-1)何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P<0.01)。

何首乌不同提取物清除羟自由基的活性研究

目的:研究何首乌不同提取物清除羟自由基的活性。方法:采用分析羟化产物法对何首乌不同提取物清除羟自由基能力与半数清除浓度(LC50)进行比较,结合何首乌不同提取物化学成分分析,归属清除羟自由基可能的有效化学成分。结果:何首乌不同提取物清除羟自由基能力从高到低与LC50从低到高均依次为醇提水沉物、醇提物、醇提水溶物/总提物、水提醇溶物、水提物、水提醇沉物,即何首乌醇提水沉物清除羟自由基活性最高。结论:大黄酸可能是清除羟自由基的有效化学成分。应重点关注醇提水沉操作,以使何首乌在清除羟自由基方面发挥更大功效。

首乌制剂对老年大鼠脑胆碱能M受体的作用研究

本实验观察了中药首乌制剂对老年大鼠脑皮层和海马内胆碱能 M 受体结合容量(Rt)的影响,结果表明:老年大鼠脑皮层和海马内胆碱能 M 受体 Rt值随增龄而明显下降,首乌醇提浸膏和小提浸膏(2g/kg/天)可明显增强老年大鼠脑皮层和海马内胆碱能 M受体 Rt 值,由此推测:首乌制剂具有延缓脑内胆碱能神经系统老化作用。

何首乌水蒸液化学成分研究

目的研究何首乌炮制过程中产生水蒸液的化学成分。方法使用高效液相色谱对水蒸液化学成分进行表征;采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、制备液相色谱等色谱技术进行分离和纯化,通过理化方法和波谱数据分析鉴定化合物的结构。结果与生、制首乌色谱图相比,何首乌水蒸液具有明显差异的色谱峰群;从何首乌水蒸液中分离鉴定了13个化合物,分别为:没食子酸(1),5-羟甲基糠醛(2),原儿茶酸(3),对羟基苯甲酸(4),香草酸(5),香草醛(6),对羟基苯甲醛(7),对香豆酸(8),trans-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(9),cis-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(10),松柏醛(11),芥子醛(12),大黄素(13)。其中化合物1~8,11和12为小分子酚酸类成分,化合物9和10为二苯乙烯苷类化合物,化合物13为蒽醌类化合物。结论化合物1~12均为首次从何首乌炮制水蒸液分离得到,其中对羟基苯甲酸,对羟基苯甲醛,对香豆酸以及trans-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为水蒸液的主要化学成分。