甘草水提物促进Erastin诱导CRC细胞株发生铁死亡

目的:研究甘草水提物能否促进Erastin诱导结直肠癌(CRC)细胞株发生铁死亡。方法:2种CRC细胞(Caco-2、SW837)分别分为5组:空白对照组、甘草水提物低浓度(50μg/mL)组、甘草水提物高浓度(100μg/mL)组、甘草水提物高浓度(100μg/mL)+铁死亡诱导剂Erastin(30μmol/L)组、甘草水提物高浓度(100μg/mL)+铁死亡诱导剂Erastin(30μmol/L)+Fer-1(30 nmol/L)组。MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡、死亡情况及细胞ROS生成量、线粒体膜电位变化,CCK-8实验验证细胞死亡方式,并检测Fe^(2+)、MDA、GSH水平和SLC7A11、DPP4、NOX1、GPX4蛋白表达。结果:与空白对照组比较,程序性坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1、凋亡抑制剂Z-VAD-FMK、自噬抑制剂3-MA均不能阻断甘草水提物联合Erastin处理导致的细胞死亡,而铁死亡抑制剂Fer-1能抑制甘草水提物联合Erastin处理导致的细胞死亡,说明细胞死亡为铁死亡。甘草水提物100μg/mL组和甘草水提物100μg/mL+Erastin组Caco-2、SW837细胞中ROS生成量、MDA含量、Fe^(2+)含量及DPP4蛋白表达显著升高,线粒体膜电位、GSH水平及SLC7A11、NOX1、GPX4蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与甘草水提物100μg/mL+Erastin组比较,Fer-1的加入使得Caco-2、SW837细胞中ROS生成量、MDA含量、Fe^(2+)含量及DPP4蛋白表达显著降低,线粒体膜电位、GSH水平及SLC7A11、NOX1、GPX4蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:甘草水提物能诱导CRC细胞株发生铁死亡。

多效唑处理对麦冬有效成分的影响

[目的]研究多效唑处理对麦冬有效成分的影响。[方法]以四川绵阳涪麦冬为材料,在9月上旬至11月上旬进行多效唑处理,测定麦冬块根中总黄酮、总皂苷、多糖和水溶性浸出物等含量,分析多效唑处理对麦冬有效成分的影响。[结果]多效唑处理麦冬块根的总黄酮和总皂苷含量不同程度的低于对照(不进行多效唑处理),部分多效唑处理与对照差异极其明显。大部分多效唑处理麦冬块根的多糖和水溶性浸出物的含量也较对照有明显降低。不同时期和不同用量多效唑处理的影响程度存在一定的差异。[结论]多效唑处理对麦冬块根的几种主要成分有明显影响。

何首乌炮制工艺的研究

目的:优化何首乌高压炮制工艺,比较其与传统炮制工艺的差异。方法:采用正交设计,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量为指标优化何首乌高压炮制工艺;比较高压炮制品与传统炮制品各指标含量、高效液相指纹图谱、不同分子量糖百分含量比的差异。结果:高压炮制何首乌影响因素大小依次为蒸制温度>蒸制时间>干燥温度;高压炮制法和传统炮制法热动力过程不同,所炮制的何首乌无论是醇溶性成分变化还是多糖分子量变化都存在差异。结论:高压炮制法能否代替传统炮制法,需药效学的进一步验证。

炮制对黄芪中水溶性浸出物的影响

目的 :探讨炮制对黄芪中水溶性浸出物含量的影响。方法 :用冷浸法测定黄芪及其炮制品中水溶性浸出物的含量。结果 :盐麸制黄芪中水溶性浸出物含量最高 ,其余炮制品均较生品高。结论 :不同炮制方法对黄芪中水溶性浸出物含量有一定影响 。

东北地区野生赤芍质量的分析评价

目的本文研究了东北地区野生赤芍中4种有效成分含量的差别。方法采用高效液相色谱法,《中华人民共和国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法和附录XA水溶性浸出物测定法,以及紫外分光光度法,比较了芍药苷、水溶性浸出物、挥发油以及多糖含量的差别,并对药材质量的差异性进行分析。结果不同产地赤芍中的4种有效成分均有显著性差异,但是,它们都符合《中国药典》标准。结论东北地区的赤芍药材都符合《中国药典》标准,它们可以增加赤芍药材的供应量,做到既经济又有效。

巴戟天水溶性浸出物提取方法的改进研究

目的改进巴戟天水溶性浸出物的提取方法,优化测定方案。方法比较2010年版药典中巴戟天水溶性浸出物的冷浸法测定方法,采用机摇冷浸法、手摇冷浸法、热浸法、超声-微波协同提取法分别提取,考察水溶性浸出物的含量测定结果有无差异,比较各方法的提取时间和操作难度。结果几种方法的含量测定结果无显著差异。机摇冷浸法和手摇冷浸法提取耗时24 h,热浸法提取耗时1 h,超声-微波协同提取法提取耗时小于10 min。结论机摇冷浸法和手摇冷浸法比冷浸法操作更准确。热浸法可取代冷浸法并大大缩短时间。超声-微波协同提取法用时最短,高效而经济。

正交试验法优选炙甘草配方颗粒水提工艺

目的：通过正交试验筛选炙甘草配方颗粒的最佳水提工艺。方法：以水煮次数、水煮时间和加水倍数为三要素,综合考虑各要素各水平对浸出物得率、甘草苷和甘草酸提取率的影响,从而选出适宜的工艺条件。结果：各要素对水提工艺的影响大小为水煮次数〉水煮时间〉加水倍数,而最终优选的提取条件为加6倍量水,浸泡30 min,水煮2次,每次2 h。结论：经过验证试验,该水提工艺稳定、可行,可用于炙甘草配方颗粒的规模化生产。

丹参提取物对大鼠纤维肝肝细胞摄入脯氨酸的影

用CCl4等攻击Wistar大鼠，致其肝纤维化。后将其随机分为苦杏仁甙（D）、丹参水溶性提取物（F）、冬虫夏草（E）、D加E（G）、秋水仙碱（C）及空白对照（B）组。均持续病因刺激。另设正常对照（A）组。在体预处理60d后，各实验药物组又随机区分为向和未向培养皿中添加药物，继续培养24h后，检测指标变化。结果表明：阳性药秋水仙碱抑制肝细胞摄入[3H]脯氨酸的作用最强；丹参水溶性提取物在病因持续存在条件下，仍能较强地阻抑肝细胞对[3H]脯氨酸的摄入，提示：①该药作用途径可能为多途径的；②可能有直接对抗病因的作用。苦杏仁甙、冬虫夏草的同一药理作用不及上述二药，但二药联用限定某一条件时，其作用可与秋水仙碱相当。

便携式近红外测定龙胆中水溶性浸出物及龙胆苦苷含量

利用近红外光谱技术,分别建立快速分析龙胆药材中水溶性浸出物及龙胆苦苷含量的定量分析模型。采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷含量,依据《中华人民共和国药典》2015版四部通则2201项下“水溶性浸出物测定法”测定龙胆中水溶性浸出物。采集90批龙胆样品的近红外光谱图,结合偏最小二乘法,分别建立最优定量分析模型。所建立的2个模型相关系数(R2)分别为0.9333和0.9505,校正均方差(RMSEC)分别为0.7327和0.2523,预测均方差(RMSEP)分别为0.6906和0.2342;用验证集样品进行模型验证,平均相对偏差分别为0.06%和0.30%。结果表明,近红外光谱法可用于龙胆中水溶性浸出物及活性成分的定量分析,其处理简单、操作简便、快速无损,且结果较准确。该方法在龙胆药材的质量控制及在线监测等方面具有广阔的应用前景。

制何首乌质量标准的初步研究

用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，并结合测定水溶性浸出物含量，能有效地控制何首乌炮制质量。

基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的甘草水提物生物限值测定研究

目的建立基于小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬功能的甘草水提物生物限值测定方法,从生物活性层面对甘草进行质量控制。方法由中国中药有限公司提供4个批次的甘草水提物冻干粉,批号分别为:GCGSQ、GCGSC、GCNMG、GCXJ,GCGSC作为验证使用。首先对细胞实验条件进行优化,并从甘草水提物对巨噬细胞吞噬功能影响的量效关系、精密度、重复性等方面进行考察。采用CCK-8法考察细胞密度、LPS浓度、3个批次甘草水提物对巨噬细胞增殖活性的影响,确定合适的给药浓度范围;采用中性红吞噬实验考察3个批次药物对巨噬细胞吞噬功能的影响,确定药物作用限值及检测限。结果实验结果提示巨噬细胞优选接种密度为3×10~5个/m L、药物作用时间为24 h、LPS浓度为0.25μg/mL,当甘草水提物质量浓度为125~500μg/mL时对巨噬细胞增殖及吞噬功能的影响呈剂量依赖性,当浓度为125μg/mL时促增殖作用和促吞噬功能最强;通过对3个批次甘草水提物对巨噬细胞吞噬功能作用的精密度及重复性进行考察,确定当甘草水提物浓度为125μg/mL为限值剂量,其吞噬指数范围为115%~129%。结论本实验结合甘草免疫调节的药理活性,建立了基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的甘草水提物生物限值评价方法,在本研究确定的试验条件下,确定125μg/mL为限值剂量,在该限值浓度下巨噬细胞的吞噬指数在115%~129%范围内,可判断为质量合格。

炒白芍的炮制工艺研究

目的:优选炒白芍的炮制工艺,为炮制工艺的传承与中药饮片现代化生产提供参考。方法:以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷四种成分含量、水溶性浸出物、外观性状和水分为综合评价指标,通过单因素实验考察炒制温度、炒制时间和炒制功率对炒白芍炮制品质量的影响,以确定白芍最佳炒制工艺。结果:炒白芍的最佳炮制工艺为炒制温度160℃,炒制时间10min,炒制功率为P4(2.4 kW)。结论:不同炒制温度、时间、功率对白芍饮片内在质量会产生影响,优选出的白芍最佳炒制工艺能有效保证饮片质量,可为其饮片质量标准的建立和生产提供试验依据。

不同剂量硫黄熏蒸当归的二氧化硫残留量与pH值、浸出物含量、挥发油含量的相关性研究

目的:探讨经不同剂量硫黄熏蒸后当归样品的二氧化硫(SO_2)残留量与pH值、浸出物含量、挥发油含量的相关性,为制订科学合理、客观可控的当归SO_2限量标准提供依据。方法:采集新鲜当归药材,分别以高剂量(5.0%)、中剂量(1.0%)、低剂量(0.2%)3个不同剂量硫黄进行熏蒸加工,并与市售硫黄熏蒸当归样品进行比较;采用《中华人民共和国药典》(2015年版)一、四部相应方法测定硫黄熏蒸当归的SO_2残留量、水溶性浸出物含量、醇溶性浸出物含量、挥发油含量。结果:随着硫黄熏蒸量逐渐增加,当归水提取液pH值逐渐降低,刺鼻的酸味越来越明显,SO_2残留量逐渐增加;低剂量(0.2%)硫黄熏蒸当归的SO_2残留量符合《中华人民共和国药典》规定,高剂量(5.0%)和中剂量(1.0%)硫黄熏蒸当归超过了国家规定(150 mg/kg);市售硫黄熏蒸当归样品的SO_2残留量差异较大,渭源硫黄熏蒸当归样品的SO_2残留量超过国家规定量5倍之多,岷县市售硫黄熏蒸当归样品的SO_2残留量最低;水溶性浸出物含量呈增加趋势、醇溶性浸出物含量呈下降趋势;当归挥发油含量变化规律不明显,0.2%硫黄熏蒸当归挥发油含量较高,作为常规硫黄熏蒸剂量较为适宜。结论:不同剂量硫黄熏蒸对当归水溶性浸出物含量、醇溶性浸出物含量、挥发油含量均有一定的影响。

不同加工方法对亳白芍中芍药苷及水溶性浸出物含量的影响

目的:通过比较不同加工方法对亳白芍中芍药苷和水溶性浸出物含量的影响,为稳定亳白芍的产地加工工艺积累资料。方法:以芍药苷和水溶性浸出物含量为指标,采用高效液相色谱法和《中国药典》2010年版一部附录ⅩA水溶性浸出物测定法,测定经不同方法加工的亳白芍药材中芍药苷和水溶性浸出物的含量,考察不同加工方法对亳白芍中芍药苷和水溶性浸出物含量的影响。结果:不同加工方法亳白芍中芍药苷和水溶性浸出物的含量以直接晒干含量为最高,达到3.87%;煮后刮皮晒干者次之;生刮皮后煮晒干者含量最低。结论:以芍药苷和水溶性浸出物含量为主要评价指标,不同加工方法对亳白芍中芍药苷和水溶性浸出物含量有较大影响,直接晒干亳白芍中两种指标成分含量最高。

星点设计-效应面法优选蜜糠炙黄芪的炮制工艺

目的:优选蜜糠炙黄芪的炮制工艺,为该饮片的应用与推广提供参考。方法:以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总黄酮及水溶性浸出物含量的总评"归一值"(OD)为评价指标,采用星点设计考察炼蜜用量、炒制时间、炒制温度对蜜糠炙黄芪炮制工艺的影响,对结果进行多元线性回归和二项式拟合,利用效应面法选择较佳炮制工艺条件并进行预测分析。结果:蜜糠炙黄芪最佳炮制工艺为黄芪样品40 g加炼蜜9.6 g,炒制时间4 min,炒制温度210℃。黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总黄酮质量分数及水溶性浸出物分别为0.058%,0.035%,3.28%,48.2%,OD预测值与真实值的偏差1.7%。结论:星点设计-效应面法优选的蜜糠炙黄芪炮制工艺简便可行、预测性良好。

正交设计结合药效学实验优选四君子汤颗粒水提及精制工艺

目的优选四君子汤颗粒最佳水提及精制工艺。方法采取正交试验法,以人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1及甘草酸、甘草苷的含量及出膏率为指标,考察浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数4个因素,优选四君子汤颗粒最佳水提工艺;以药液质量浓度、药液含醇量、醇沉时间为考察因素,优选四君子汤颗粒最佳水提醇沉工艺;通过干预脾虚证药效学实验对醇沉前后提取物进行比较。结果四君子汤颗粒最佳水提工艺为加10倍量的水浸泡60 min,煎煮3次,每次30 min;最佳水提醇沉工艺为水提滤液浓缩至1 mL药液相当于原药材0.5 g,药液含醇量为80%,醇沉时间为12 h。与模型组比较,四君子汤颗粒水提物组、水提醇沉物组大鼠唾液淀粉酶活性和血清胃泌素含量均显著升高(P<0.05),且能提高脾虚大鼠小肠木糖吸收功能(P<0.05);与四君子汤颗粒的水提物组比较,四君子汤颗粒水提醇沉物组D-木糖排泄率有显著性差异(P<0.05),但唾液淀粉酶活性和血清胃泌素含量无显著性差异(P>0.05)。结论四君子汤颗粒不宜采用醇沉工艺进行精制,因此,选择水提工艺作为四君子汤颗粒的最佳提取工艺。

正交试验优选酒白芍的炮制工艺

目的:优选酒白芍的炮制工艺,为该药材的临床用药提供参考。方法:采用HPLC测定芍药苷含量,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86),检测波长230 nm。以外观性状及芍药苷、水溶性浸出物含量为综合评价指标,通过正交试验法考察黄酒用量、酒炙温度、酒炙时间对酒白芍炮制工艺的影响。结果:最佳炮制工艺条件为黄酒用量10%,酒炙温度90℃,酒炙时间15 min。酒白芍呈微黄色,微有酒香味,芍药苷及水溶性浸出物质量分数分别为3.79%,37.51%。结论:外观性状是中药饮片质量标准评价的重要指标之一。通过综合评分法优选的炮制工艺稳定可行,适用于酒白芍的工业化生产。

基于近红外漫反射光谱和多元数据分析的黄芩质量标准的快速评价方法研究

目的:采用近红外漫反射光谱法结合多元数据分析对黄芩中水分、灰分、醇浸出物和黄芩苷进行快速的同步定量分析,同时建立黄芩质量标准的快速评价方法。方法:采集85批不同来源黄芩样品的近红外光谱数据,按照中国药典2010年版一部黄芩项下要求测定黄芩水分、灰分、醇溶性浸出物和黄芩苷含量,比较研究不同预处理方法对模型预测性能的影响,并将窗口移动最小二乘法(MWPLS)用于优化建模光谱区间。结果:黄芩苷、水分、灰分和醇溶性浸出物4个验证模型的相关系数(r)分别为0.945 1、0.895 5,0.930 8和0.915 0,相应的预测误差均方根(RMSEP)分别为1.29、0.669、0.492和3.47。结论:该方法可为建立黄芩质量标准的快速评价方法打下良好的基础。

丹参药材提取工艺的研究

目的通过选择1种溶剂同时提取丹参药材中的脂溶性成分和水溶性成分,以期能达到节约成本的目的。方法采用正交试验设计的方法,选择乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间和提取次数4个因素,以丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B为2个指标成分,考察并确立了丹参的乙醇回流提取工艺。结果在实际生产中,如果侧重于对丹参药材中丹参酮ⅡA的提取,可以采取6号工艺,即85%乙醇提取,加水12倍量,提取2次,每次2h;如果兼顾丹参酮ⅡA和丹酚酸B,可以采取2号或3号工艺,即75%乙醇提取,加水10倍量,提取2次,每次1.5h,或75%乙醇提取,加水12倍量,提取3次,每次2h。结论新工艺可兼顾提取丹参药材的脂溶性和水溶性成分,且省时、省工、节能。

星点设计-效应面法筛选丹参面膜的主要辅料

目的筛选丹参面膜的主要辅料。方法采用星点设计-效应面法,以聚乙烯醇(PVA)与羧甲基纤维素钠(CMC-Na)用量比及甘油、无水乙醇用量为考察对象,以成膜时间和膜外观评价进行综合评分,运用多元线性回归及二项式拟合建立指标与因素之间的数学模型,经效应面法预测最佳参数并进行验证。结果最佳辅料质量分别为PVA1788/CMC-Na(3∶2)、6%甘油、10%无水乙醇。结论所用方法能较好地优选丹参面膜的主要辅料,所建立的二项式数学模型预测值良好。