应用PCR技术和wciP基因测序方法鉴定6群肺炎链球菌血清型

目的：利用分子生物学方法，包括PCR技术和wciP基因测序鉴别6群肺炎链球菌血清型。方法根据GenBank上发表的wchA基因和wciO基因设计合成6群特异性引物，wciNα基因设计合成6A/B型特异性引物，wciNβ基因设计合成6C/D型特异性引物，做PCR扩增，凝胶电泳确认PCR产物；根据wciP基因设计6群特异性引物，PCR扩增后产物测序确定第584位核苷酸。结果原6A型9株菌株（编号为6A-1至6A-9）和原6B型7株菌株（编号为6B-1至6B-7）用6群特异性引物进行的扩增均有分子量在2.0 kb左右的PCR产物，而1型没有PCR产物；除6A-2、6A-3、6B-3和6B-7外，其余菌株用6A/B型特异性引物进行的扩增有600 bp左右的PCR产物；6A-2、6A-3、6B-3和6B-7用6C/D型特异性引物进行的扩增有750 bp左右的PCR产物；测序结果确认原6A型9株菌株wciP基因第584位为G，原6B型7株菌株wciP基因第584位为A。结论6A-1、6A-4、6A-5、6A-6、6A-7、6A-8、6A-9属于6A型，6A-2、6A-3属于6C型，6B-1、6B-2、6B-4、6B-5、6B-6属于6B型，6B-3和6B-7属于6D型。

应用分子生物学方法鉴定6群肺炎链球菌血清型

目的利用分子生物学方法,鉴定26株6群肺炎链球菌的血清型。方法利用6群肺炎链球菌荚膜多糖相关基因设计合成6对特异性引物,PCR扩增26株肺炎链球菌,并对PCR产物进行基因序列的测定及分析。结果26株肺炎链球菌cpsD蛋白229个氨基酸中有7个突变点,第220~222位均没有缺失;其中,19株肺炎链球菌具有与wci Nα蛋白氨基酸序列完全一致的氨基酸组成,第150位均为Ala,第38位均为Asp,其余7株与wciN_α蛋白氨基酸序列没有相似性,但与wciN_β蛋白氨基酸序列相似性超过99%;15株wciP蛋白第195位为Ser,11株wci P蛋白第195位为Asn。综合分析比对后,26株6群肺炎链球菌中,11株属于6A型肺炎链球菌,8株属于6B型肺炎链球菌,4株属于6C型肺炎链球菌,3株属于6D型肺炎链球菌。结论分子生物学方法可用于6群肺炎链球菌血清型的鉴定,为完善6群肺炎链球菌的菌种档案提供了实验依据。