文昌锥SRAP-PCR体系优化及有效引物筛选

通过单因素试验和正交试验相结合,分析DNA、引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶4种因素对文昌锥SRAP-PCR扩增结果的影响,优化建立文昌锥SRAP-PCR体系。结果表明:文昌锥基因组DNA浓度和dNTPs浓度过低或过高均扩增不出产物,而引物浓度和Taq酶用量的增加能提高扩增效率。在适宜浓度范围内,各个因素对文昌锥SRAP-PCR扩增影响大小依次为:引物=dNTPs>Taq酶>DNA;最优反应体系为:总体系为20μL时,DNA 20 ng,引物0.6μmol/L,dNTPs0.15 mmol/L和Taq酶4 U。经验证,该体系获得的扩增产物清晰、稳定;筛选获得45对有效性引物组合多态性好,可应用于SRAP分子标记技术在文昌锥资源研究。

海南特有极小种群植物文昌锥的SCoT-PCR体系建立及有效引物评价

为了应用SCoT分子标记研究文昌锥种质资源,通过单因素试验和正交试验2种方法,分析DNA、引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶这4种因素对文昌锥SCoT-PCR扩增结果的影响,优化建立文昌锥SCoT-PCR体系,并对文昌锥SCoT标记引物进行有效性评价。结果表明:各个因子对SCoT-PCR扩增影响大小依次为:DNA>dNTPs>引物>Taq DNA聚合酶;最优反应体系为:总体系为20μL,DNA含量为2.5 ng,引物浓度为0.8μmol·L-1,dNTPs浓度为0.2 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶的含量1 U;经验证,该体系获得的扩增产物清晰、稳定;应用该体系筛选出15条多态性好且适合文昌锥扩增的引物,为今后利用SCoT分子标记技术对文昌锥及其他壳斗科植物进行相关研究提供技术支持。

文昌锥种质资源叶片表型多样性分析

文昌锥是海南文昌特有锥属植物,地理分布小且现存数量少。为了解文昌锥叶片表型变异和遗传多样性,本研究对文昌锥7个自然居群叶片的9种叶片表型性状,采用模糊数学的方法进行数量遗传分析。结果表明,文昌锥9种叶片表型性状多样性十分丰富,Shannon-weaver多样性指数变幅为1.96~2.10,均值为2.05;文昌锥叶片表型变异在居群内较高,但是表型变异主要来源于自然居群间;CY、BC、CBX、LFT和MS是选择大叶文昌锥的优势自然居群,XS是选择小叶文昌锥的优势自然居群;文昌锥叶片表型性状间相关性很高,主成分分析把相关性极显著的文昌锥叶片表型指标可以综合概括成叶片大重、叶形指数叶厚、叶柄长以及叶薄等四个主成分因子。本研究可以为文昌锥资源保护、开发利用以及未来分子生物学和基因组学方面的研究提供支持。

外源激素对海南特有植物文昌锥生根的影响

为获得高效文昌锥扦插外源激素配方、明确不同外源激素对文昌锥插穗生根过程的影响,本研究采用正交试验设计方法,研究不同外源激素配比对文昌锥插穗的成活率、生根率、愈伤组织产生面积和产生率以及一级不定根数量等形态建成指标的影响。结果表明,不同外源激素配比处理间在生根率和一级不定根数量中差异极显著,而在存活率和愈伤组织产生率中差异不显著;经综合比较,处理A7(1000 mg/L萘乙酸+1000 mg/L吲哚丁酸+1.0 mg/L 2,4-D+2.5 mg/L复硝酚钠)效果最佳,成活率达86.57%,愈伤组织产生率达75.56%,生根率最高达83.27%,一级不定根数量为12.21条。极差分析表明,供试的四种外源激素对文昌锥扦插生根形态建成指标的影响差异显著。吲哚丁酸对存活率、愈伤组织产生率和一级不定根数量产生影响较大;复硝酚钠对生根率影响最大,萘乙酸、吲哚丁酸和2,4-D对生根率的影响一致;而2,4-D对愈伤组织产生面积影响最大,其次是萘乙酸和吲哚乙酸,复硝酚钠最小。研究分析认为,在植物扦插中不同外源激素的混合使用效果较好,同时在生产中应重视复硝酚钠的使用。