麦胚凝集素的分离纯化和鉴定

目的研究用鸡卵黏蛋白为配基亲和色谱法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析。方法先制备鸡卵黏蛋白的亲和吸附剂,然后用其纯化麦胚凝集素。结果此亲和色谱方法使纯化后的麦胚凝集素比其粗提液纯度提高约10 0 0倍,相对分子质量为2 0 4 2 0 ,pI为5 .10。

响应面法优化麦胚凝集素分离纯化工艺研究

麦胚凝集素是一种具有生物学活性的蛋白质,将其从麦胚中提取、开发,能促进麦胚的综合利用,提高相关生产企业经济效益。依据Box-Behnken试验设计原理,进行饱和度硫酸铵质量分数、甲壳素用量和甲壳素吸附麦胚凝集素时间的响应面优化分析。建立了提取、纯化麦胚凝集素优化工艺的二次多项数学模型。优化麦胚凝集素分离、纯化工艺参数:饱和硫酸铵质量分数为47.5%、甲壳素用量为2.0:1和甲壳素吸附麦胚时间为19 h。优化工艺模型预测麦胚凝集素相对得率的理论值为92.1%,验证试验显示麦胚凝集素实际提取率为92.7%。

麦胚凝集素分离纯化工艺研究

麦胚凝集素是麦胚中一种具有生物学活性蛋白质。根据甲壳素和麦胚凝集素的性质,以甲壳素作为吸附固相,建立了从麦胚中提取、分离和纯化麦胚凝集素的绢丝布袋法工艺。试验结果显示,采用40%~45%的饱和硫酸铵制备粗麦胚凝集素样品时,粗品麦胚凝集素溶液与布袋中甲壳素的使用比例在3∶1~1∶1,甲壳素吸附麦胚凝集素的时间为19 h,SDS-PAGE凝胶电泳显示可获得纯化度近100%的麦胚凝集素样品。纯化的麦胚凝集素相对分子质量为20415。

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱(HPLC-electrospray ionization-massspectrometry,HPLC-ESI-MS)鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC_(50)为10.98 mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5 kDa的高活性组分,IC50为1.60 mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC_(50)为0.30 mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8个组分(峰),其中1号峰的活性和含量都最高,IC_(50)为0.098 mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z 274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7种多肽,其中二肽有1种,三肽有6种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。

麦胚凝集素修饰的EGCG-明胶-壳聚糖纳米粒的制备、表征及体外抗肿瘤活性研究

目的制备麦胚凝集素(WGA)修饰的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)-明胶(Gel)-壳聚糖(Cs)纳米粒,研究其对结肠癌HT-29细胞的作用。方法以明胶及壳聚糖为载体辅料,采用静电自组装的方法制备EGCG-Gel-Cs纳米粒,以包封率为指标,通过Box-Behnken设计-效应面法(BBD-RSM)优化纳米粒的制备处方及工艺,再将经戊二醛活化的WGA修饰到纳米粒表面。采用差示扫描量热分析药物在纳米粒中的存在状态,采用细胞毒性及细胞凋亡实验,比较研究纳米粒与原料药的体外抗肿瘤活性。结果 EGCG-Gel-Cs纳米粒的最优处方:Gel与Cs的质量比为4.2,Gel与EGCG的质量比为2.82,反应温度为34℃,包封率为(74.42±0.074)%。EGCG-Gel-Cs纳米粒粒径为(264.13±6.48)nm,经过修饰后纳米粒粒径为(389.70±9.00)nm。WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒对HT-29细胞的细胞毒性和细胞凋亡率显著高于EGCG原料药。结论 WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒可显著提高细胞毒性作用。

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 。

麦胚凝集素的纯化及其与小麦根际促生细菌的亲和作用

植物凝集素可引导植物-微生物之间的相互识别,对植物根际促生细菌的定殖起着重要作用。采用石油醚和丙酮脱脂、甲酸抽提、硫酸铵盐析、热处理、甲壳素亲和层析的方法分离纯化麦胚凝集素(WGA),从小麦胚中纯化WGA的纯化倍数为115.9,血凝活力为6.8 mg/L,产率为0.566 mg/g。为检测WGA与小麦根际细菌的亲和性识别作用,依据Marshall法对纯化的WGA进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记;用标记的WGA对小麦根际细菌染色,26株小麦根际促生细菌中23株具有FITC-WGA染色阳性。表明这些FITC-WGA染色阳性的菌株和WGA具有亲和性识别作用,揭示WGA可能影响定殖在小麦根际的促生细菌。

麦胚凝集素的高效纯化工艺及其稳定性研究

通过单因素和正交试验确定了麦胚凝集素(WGA)的最佳提取条件(提取时间3．4h,甲酸浓度 0．5mol／L,液料比10．15),并建立了利用盐析分级、选择性热处理、部分水解甲壳素亲合层析和凝胶过滤层析对WGA进行高效纯化的工艺。研究了WGA的理化稳定性,发现WGA的活性随常压热处理温度、时间的增加而降低,而且对于湿热处理比干热处理更敏感。WGA在加压蒸汽处理(2．4kg／cm2,20min)和挤压处理 (145℃,140r／min)后完全丧失活性。WGA的活性在pH7．0-8．5范围内最高,在pH≤2．5或H≥11．0时完全丧失。WGA的活性随茶多酚浓度的增加而显著降低,在茶多酚浓度达到15g／L时完全丧失。

麦胚凝集素化壳聚糖纳米粒及与N-乙酰葡萄糖胺的结合作用

凝集素(lectin)是非免疫源性的糖蛋白或糖特异体(sugar-specifity),19世纪由Stillmark发现,可选择性识别细胞膜表面糖分子或受体样结构,从而与糖基化生物膜结合(溶酶体传递方式的内化过程),充当给药系统的溶酶体样"佐剂"(drug delivery adjuvant)。