乳清蛋白抗氧化肽对H_2O_2所致人胚肺成纤维细胞MRC-5过氧化损伤的保护作用

【目的】探讨纯化后的乳清蛋白抗氧化肽P4对人胚肺成纤维细胞(human lung fibroblast)MRC-5过氧化损伤的保护作用及可能的作用机制。【方法】采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型,应用四唑蓝快速比色法(MTT法)检测细胞存活率,通过检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,来确定P4对过氧化损伤MRC-5细胞的保护作用,并利用电镜观察细胞形态学变化。【结果】1mmol·L-1H2O2孵育24h可显著诱导MRC-5细胞损伤,使细胞存活力下降到22.47%,细胞经不同浓度的抗氧化肽P4(4、20、100μg·mL-1)与H2O2共孵育后,特别是100μg·mL-1(高剂量组)抗氧化肽P4可使细胞存活率达到44.77%。同时,提高乳清蛋白抗氧化肽P4的浓度,可促进受损的MRC-5细胞修复,提高了SOD、CAT、GSH-Px酶活性,降低MDA含量。扫描电镜和透射电镜观察结果也表明,一定浓度的乳清抗氧化肽对MRC-5细胞具有保护作用。【结论】乳清抗氧化肽通过拮抗H2O2而对MRC-5的过氧化损伤具有保护作用。

超高压处理对乳清分离蛋白凝胶特性的影响

研究了超高压处理压力、时间、蛋白质量浓度、pH值、CaCl_2对乳清分离蛋白(whey protein isolated,WPI)凝胶特性的影响。当处理压力≥300 MPa、处理时间≥10 min、蛋白质质量浓度≥12 g/L时,WPI溶液经超高压处理后可以形成凝胶,且随着处理压力增大、处理时间延长和蛋白质浓度的提高,凝胶中二硫键含量明显升高,凝胶网络结构趋于致密,质地逐渐细腻,凝胶强度、得率和保水性呈现增大的趋势;WPI溶液pH在等电点以上且接近中性时,形成凝胶的二硫键含量较高,凝胶网络致密,凝胶品质较好;添加CaCl_2对形成凝胶的二硫键含量不产生影响,但其可以通过键桥作用提高凝胶强度;凝胶得率与CaCl_2浓度呈负相关。当CaCl_2浓度为0.06mol/L时,凝胶具有较大保水能力,之后保水性随Ca^(2+)浓度的升高而下降。

酶法水解乳清分离蛋白制备纳米纤维

采用天冬氨酸内切酶(Asp endoproteinase,AspN)在37℃诱导乳清分离蛋白(whey protein isolate,WPI)制备蛋白质纳米纤维(protein nanofibrils,PNFs),考察WPI不同水解时间对产物PNFs形貌的影响。利用透射电子显微镜、原子力显微镜、小分子蛋白质十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、硫磺素T荧光、红外光谱以及激光散射法对PNFs及形成过程进行表征。结果显示,该方法制备的产物PNFs呈乳白色,AspN水解得到的5 kD左右的多肽为构筑单元,β-折叠为PNFs稳定存在的主要二级结构,PNFs平均粒径随水解时间延长而增大。酶法制备PNFs解决了酸法中的褐变问题,有望拓展其在食品领域的应用。

亲水有机溶剂-盐双水相体系分离乳清蛋白抗氧化性多肽

为建立一种快速高效分离乳清蛋白胃蛋白酶水解液中的抗氧化肽的方法,采用基于有机溶剂-盐的双水相体系进行分离。以上相多肽提取率和ABTS自由基清除率为评价指标,结合反相-高效液相色谱(RP-HPLC)检测,探究多肽的分配规律,确定最优分离条件。对上、下相和水解液中多肽进行纯化,分别测定其ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力以及还原能力,并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)和液相色谱对纯化后多肽进行表征。结果表明:双水相体系分离抗氧化肽的最优条件为加入4mL 25%NaH_2PO_4,3 mL正丙醇,NaCl 0.75 g/10 m L,此时,大多数的抗氧化性多肽被分配到双水相上相中,且纯化后上相多肽各项抗氧化值均高于下相及水解液多肽。结论:亲水有机溶剂-盐双水相体系可对水解液中抗氧化性多肽进行分离富集,且效果良好。