期刊文献+
共找到92篇文章
< 1 2 5 >
每页显示 20 50 100
In-Situ Test on Fatigue Characteristics of Top-Mounted Dividable Pile-Board Subgrade for High-Speed Railway 被引量:4
1
作者 苏谦 白皓 +1 位作者 王迅 蒋浩然 《Journal of Southwest Jiaotong University(English Edition)》 2010年第1期8-12,共5页
To simulate the fatigue characteristics of the pile-board structure under long-term dynamic load, using the in-situ dynamic testing system DTS-1, the forced vibration loading was repeated one million times at differen... To simulate the fatigue characteristics of the pile-board structure under long-term dynamic load, using the in-situ dynamic testing system DTS-1, the forced vibration loading was repeated one million times at different cross-sections of the pile-board structure for high-speed railway. The dynamic deformation, permanent deformation and dynamic stress of main reinforcements were measured. The test results show that the dynamic responses of the pile-board structure almost did not vary with the forced vibration times under the simulated trainload. After one million times of forced vibration, the permanent deformations of the midspan section of intermediate span and midspan section of side span were 0.7 mm and 0. 6 mm, respectively, and there was no accumulative plastic deformation at the bearing section of intermediate span. 展开更多
关键词 High-speed railway Top-mounted dividable pile-board structure In-situ test Forced vibration test Fatigue characteristics
下载PDF
东亚飞蝗WntA在胚胎发育阶段的时空表达
2
作者 宋佳 马钰洁 +3 位作者 蒲雪 季荣 Iliya Kabak 袁亮 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1139-1149,共11页
【目的】探讨东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis Wnt基因家族中WntA编码蛋白序列特征及其在胚胎发育阶段的时空表达谱,为进一步开展LmmWntA的功能研究及挖掘东亚飞蝗其他Wnt基因家族成员奠定基础。【方法】PCR克隆并利用邻接法(nei... 【目的】探讨东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis Wnt基因家族中WntA编码蛋白序列特征及其在胚胎发育阶段的时空表达谱,为进一步开展LmmWntA的功能研究及挖掘东亚飞蝗其他Wnt基因家族成员奠定基础。【方法】PCR克隆并利用邻接法(neighbor-joining,NJ)鉴定东亚飞蝗Wnt基因家族基因LmmWntA;通过同源序列多重比对分析LmmWntA氨基酸序列特征;利用整胚原位杂交技术对LmmWntA在东亚飞蝗产卵后(after egg laying,AEL)发育至12,24,35,46,56和65 h以及3,3.5,4,4.5,5,5.5,6.5,8,8.5,9.5和11 d共17个连续胚胎发育阶段进行转录信号筛查。【结果】克隆获得东亚飞蝗LmmWntA(GenBank登录号:MW052768),CDS全长1101 bp,编码336个氨基酸;LmmWtnA与头索动物、昆虫、有爪动物及环节动物WntA蛋白共同聚为WntA亚家族单系群;LmmWntA中段和C端与比对物种WntA蛋白序列保持了较高同源性,仅在N端信号肽区域出现差异,LmmWntA与膜翅目(Hymenoptera)西方蜜蜂Apis mellifera AmWntA蛋白聚为姊妹群,氨基酸序列一致性为59.05%。LmmWntA最先表达在东亚飞蝗35 h AEL胚胎期末端生长区并在该区域持续表达至4 d AEL胚胎期,同时在新生体节每节腹部形成条纹状表达;在46 h AEL胚胎期视叶后半区持续表达至8.5 d AEL胚胎期,该区域未来发育成复眼;在56 h AEL胚胎期脑持续表达至5.5 d AEL胚胎期;在65 h AEL胚胎期每节腹部的条纹状表达信号逐渐转移至腹中线两侧,在触角基部有明显的表达信号;在5.5 d AEL胚胎期表达信号进一步转移至腹神经;从3 d AEL胚胎期开始在腹侧体节远轴端表达,后期转移至上颚、足关节及末端;伴随4.5 d AEL胚胎末端开始内陷形成肛道,LmmWntA在内陷肛道的腹面及前端表达,最多内陷至腹部第7体节;至9.5 d AEL胚胎期时LmmWntA在翅芽盘处表达。【结论】LmmWntA在东亚飞蝗胚胎发育阶段动态表达,推测LmmWntA参与东亚飞蝗胚胎后端体节生长、神经系统(脑和腹神经)、复眼、触角、消化系统后端(肛道)、颚、胸部附肢(足和翅)等重要组织和器官的发生和形成。本研究结果为进一步开展LmmWntA功能缺失研究奠定发育生物学基础。 展开更多
关键词 东亚飞蝗 WntA基因 发育生物学 生长区 翅芽 整胚原位杂交
下载PDF
pcgf5a在斑马鱼胚胎早期发育中的作用
3
作者 周娟 周文娟 +2 位作者 李心悦 史玮 郝爱军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期99-103,共5页
目的探讨pcgf5a基因在斑马鱼胚胎发育过程中的作用和机制。方法通过显微注射pcgf5a吗啉代寡核苷酸(MO)抑制pcgf5a基因mRNA翻译过程,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化;利用胚胎整封原位杂交和Real-time PCR等技术检测抑制pcgf5a... 目的探讨pcgf5a基因在斑马鱼胚胎发育过程中的作用和机制。方法通过显微注射pcgf5a吗啉代寡核苷酸(MO)抑制pcgf5a基因mRNA翻译过程,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化;利用胚胎整封原位杂交和Real-time PCR等技术检测抑制pcgf5a对胚胎神经及眼睛发育相关标记基因的表达变化。结果抑制pcgf5a基因后,斑马鱼胚胎中外胚层发育受到影响,表现为脑区变小,眼睛发育迟缓,尾部卷曲及体轴缩短(548/891),同时神经发育(sox2:82/98、sox3:73/84、foxg1:70/88、pax6a:36/45)和眼睛发育(pax2a、vsx2和rx1,n=5)相关基因表达明显降低。结论pcgf5a可能通过调节神经与眼睛发育相关转录因子的表达,进而影响细胞增殖和凋亡而参与胚层分化以及后续的神经系统与眼睛的发育。 展开更多
关键词 pcgf5a基因 神经系统 眼睛发育 整封原位杂交 实时定量聚合酶链反应 斑马鱼
下载PDF
视黄酸影响斑马鱼胚胎心脏房室分化 被引量:7
4
作者 张立凤 桂永浩 +5 位作者 钟涛 王跃祥 蒋球 崇梅 孙淑娜 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期88-91,共4页
目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视... 目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸对心脏特异基因vmhc,amhc,nkx2.5和nppa表达的影响。结果vmhc,amhc探针的整体原位杂交结果显示视黄酸处理会导致斑马鱼胚胎心脏的前后轴发育异常,表现为vmhc表达细胞的范围缩小,amhc表达细胞的范围明显增大。视黄酸可以明显增强nppa在心脏的表达。视黄酸对心脏房室分化的影响在48hpf后表现得明显。结论5×10-8mol/L和10-7mol/L视黄酸在12.5hpf处理斑马鱼胚胎对斑马鱼心脏早期发生没有影响。斑马鱼发育过程中,视黄酸对心脏的房室分化过程起着重要的调控作用,视黄酸支持心房的分化和发育,同时抑制心室发育。 展开更多
关键词 视黄酸 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
下载PDF
小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立 被引量:5
5
作者 吴燕 马子敏 +2 位作者 刘淑红 范文红 范明 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期434-436,共3页
目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。 方法 小鼠胚胎用 4 %多聚甲醛 4℃固定过夜 ,10mg L蛋白酶K(PK)室温消化 30min ,预杂交 2h后 ,加入探针 6 3℃反应 16~ 18h ,用盐溶液高温洗涤多次 ,RNA酶 37℃消化 1h ,封闭 4h后... 目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。 方法 小鼠胚胎用 4 %多聚甲醛 4℃固定过夜 ,10mg L蛋白酶K(PK)室温消化 30min ,预杂交 2h后 ,加入探针 6 3℃反应 16~ 18h ,用盐溶液高温洗涤多次 ,RNA酶 37℃消化 1h ,封闭 4h后加入地高辛抗体 4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇 ,NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值 ,扣除背景、对照等假阳性信号。 结果 KIAA170 8探针在脑、脊髓等 8个区域有杂交信号 ,对图像数据分析结果表明 ,只有 1个区域的信号在 95 %可信限范围内 ,为阳性信号。 结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度 ,以及洗涤、显色过程 ,得到了低本底、着色清晰的杂交结果 ,结合图像的数据分析步骤 ,消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。 展开更多
关键词 方法改进 整体原位杂交 小鼠胚胎
下载PDF
银鲫pou2基因在胚胎发育过程中的时空表达图式 被引量:5
6
作者 尹隽 周莉 +2 位作者 刘军 杜新征 桂建芳 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期629-636,共8页
用RACE-PCR方法从原肠期SMART文库中扩增到银鲫pou2基因的全长cDNA,其全长为2421bp,开放阅读框为1416bp,编码471个氨基酸,与斑马鱼pou2基因的氨基酸序列一致性高达91.0%。我们用RT-PCR和整体原位杂交的方法研究了银鲫pou2基因在胚胎发... 用RACE-PCR方法从原肠期SMART文库中扩增到银鲫pou2基因的全长cDNA,其全长为2421bp,开放阅读框为1416bp,编码471个氨基酸,与斑马鱼pou2基因的氨基酸序列一致性高达91.0%。我们用RT-PCR和整体原位杂交的方法研究了银鲫pou2基因在胚胎发育过程中的时空表达图式。RT-PCR结果显示,银鲫pou2基因有母源转录本,其合子基因在高囊胚期强烈表达,在50%下包期和90%下包期也有高量的转录本,但在100%下包期表达量急剧降低,至体节期时已经完全检测不到其转录本。胚胎整体原位杂交结果显示其母源转录本在所有的胚盘细胞中。在高囊胚期和50%下包期,高度表达的合子转录本仍在所有的胚盘细胞中,但至90%下包期时,pou2的表达向胚胎背部的正中线汇聚,集中在神经板的两侧区域和脑部的两条横向条带。在100%下包期时,pou2的表达集中在神经板的中间区域以及预期形成的中后脑区域。至体节期时,转录本消失,这与RT-PCR结果高度一致。银鲫pou2基因的表达图式提示该基因在胚胎发育的早期具有重要作用,它可能参与调控神经板的形成和中后脑细胞的发育命运。 展开更多
关键词 银鲫pou2基因 胚胎发育 RT-PCR 胚胎整体原位杂交
下载PDF
转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达 被引量:5
7
作者 蒲荻 杜建霖 +2 位作者 李晓群 翁敏杰 佘强 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1171-1175,共5页
目的检测胚胎期小鼠Tbx18在mRNA及蛋白水平的表达情况,了解Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式。方法用整体原位杂交技术检测小鼠整胚TBX18 mRNA的表达,用X-gal染色检测Tbx18-Cre/Rosa26R/LacZ双杂合基因谱系示踪模型小鼠胚胎的... 目的检测胚胎期小鼠Tbx18在mRNA及蛋白水平的表达情况,了解Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式。方法用整体原位杂交技术检测小鼠整胚TBX18 mRNA的表达,用X-gal染色检测Tbx18-Cre/Rosa26R/LacZ双杂合基因谱系示踪模型小鼠胚胎的报告基因LacZ蛋白的表达,用荧光定量PCR检测小鼠胚胎期心脏mRNA的定量表达。结果发现在小鼠胚胎期9.5~10.5 d转录因子Tbx18主要在前体心外膜表达,由前体心外膜逐渐迁移定位于心外膜;在11.5~12.5 d的小鼠胚胎Tbx18主要定位于心脏、上下肢、体节及上下唇鄂区域;大于12.5 d的小鼠胚胎Tbx18除了上述部位外还定位于肾、输尿管、膀胱等区域。结论转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的表达具有时空特异性,对小鼠心脏的发育可能起着至关重要的作用;同时在上下肢、体节、唇鄂、肾、输尿管、膀胱的发育中也可能起非常重要的作用。 展开更多
关键词 转录因子Tbx18 整体原位杂交 小鼠 胚胎发育 时空表达
下载PDF
人类锌指结构新基因ZNF18的克隆和表达谱分析 被引量:4
8
作者 郭丽丽 慈宏亮 +3 位作者 单红爽 邹星 翟永功 李亦平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期523-530,共8页
在很多转录因子中发现的锌指结构,被认为在人类心脏的发育和相关疾病的发生过程中发挥重要的作用。文章报道了克隆和表达分析人类新的锌指蛋白基因ZNF18。该基因cDNA长2767bp,编码一个有549个氨基酸的蛋白,这一蛋白含有一个SCAN结构域,... 在很多转录因子中发现的锌指结构,被认为在人类心脏的发育和相关疾病的发生过程中发挥重要的作用。文章报道了克隆和表达分析人类新的锌指蛋白基因ZNF18。该基因cDNA长2767bp,编码一个有549个氨基酸的蛋白,这一蛋白含有一个SCAN结构域,一个KRAB结构域和5个连续的C2H2型锌指结构域。ZNF18蛋白与小鼠Zfp535有77%的同源性。ZNF18基因定位于人染色体17p12~p13,包含9个外显子和8个内含子。以ZNF18全长编码区为探针进行Northern杂交,结果显示ZNF18在成体小鼠各组织中广泛表达,但在心脏中低丰度表达。整体原位杂交结果显示,ZNF18基因在小鼠胚胎的表达有很高的动态性。ZNF18主要在E7.5小鼠胚胎的胚外组织表达,E8.5出现了胚胎躯干前端表达。ZNF18从E9.0开始在胚胎的心脏和尾部表达,尤其在E10.5胚胎的心脏高丰度表达。这提示ZNF18基因与心脏发育过程可能有密切的关系。 展开更多
关键词 ZNF18基因 C2H2锌指结构域 胚胎整体原位杂交
下载PDF
半滑舌鳎骨形态发生蛋白4基因的克隆和表达分析 被引量:4
9
作者 马骞 冯文荣 +2 位作者 柳淑芳 庄志猛 马慧 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期500-512,共13页
本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)骨形态发生蛋白4(BMP4)基因的c DNA序列,并分析其在半滑舌鳎成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的定位和表达变化趋势。结果表明,半滑舌鳎BMP4基因c DNA全长为1680 bp,包括了419 bp的5... 本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)骨形态发生蛋白4(BMP4)基因的c DNA序列,并分析其在半滑舌鳎成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的定位和表达变化趋势。结果表明,半滑舌鳎BMP4基因c DNA全长为1680 bp,包括了419 bp的5′非翻译区(5′UTR)、编码403个氨基酸的1212 bp的开放阅读框(ORF)以及49 bp的3′非翻译区(3′UTR)。同源性分析和分子进化聚类分析结果显示,半滑舌鳎与已报道慈鲷科(Cichlidae)各鱼种的同源性最高,并与之共同聚为鱼类BMP4分支。BMP4 m RNA在半滑舌鳎成鱼的13个组织中具有广泛的分布,并在鳃组织中表达量最高,其次在背鳍、软骨等组织具有中等水平的表达。此外,BMP4基因在早期胚胎发育阶段(卵裂期和原肠期)具有极高水平的表达,此后其表达水平逐渐降低;但在后期仔鱼期(孵化后3日龄和4日龄),其表达水平再次升高。整体原位杂交检测结果表明,BMP4 m RNA在早期仔鱼期主要在头部及躯干前部表达;后期仔鱼BMP4基因主要在冠状幼鳍、上下颌及胸鳍处表达;进入稚鱼期后在鳃盖骨及各鳍均有表达。上述研究结果揭示了BMP4在半滑舌鳎早期骨骼发育中的重要作用,为揭示海水硬骨鱼类骨骼发生、发育的调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 BMP4 克隆 基因表达 整体原位杂交 骨骼发育
下载PDF
斑马鱼高分辨率整胚原位杂交实验方法与流程 被引量:11
10
作者 张春霞 刘峰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期522-528,共7页
整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术,在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果,对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方... 整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术,在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果,对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方法,对该技术加以改进,使之更加灵敏,结果更加特异。文章主要以斑马鱼为例,介绍了整胚原位杂交技术的发展历史,并重点介绍了本实验室所用的整胚原位杂交实验流程,同时还分析了实验结果不理想的原因及其解决方法。 展开更多
关键词 斑马鱼 整胚原位杂交
下载PDF
整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达 被引量:4
11
作者 张子峰 樊少华 +4 位作者 陆军 吴冬梅 单群 胡斌 郑元林 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期39-44,共6页
为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记... 为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。 展开更多
关键词 雌激素受体α(ERα) RNA探针 整体原位杂交 小鼠胚胎
下载PDF
zdhhc17对斑马鱼集中延伸运动的调节及其机制 被引量:3
12
作者 杨阳 高明 +4 位作者 陈学冉 史玮 王芬 马保华 郝爱军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期259-263,共5页
目的通过抑制zdhhc17基因的表达,探讨其在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及机制。方法通过显微注射zdhhc17吗啉反义寡聚核苷酸(MO)抑制zdhhc17翻译,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化。利用斑马鱼整封原位杂交技术,检测集中延伸运动... 目的通过抑制zdhhc17基因的表达,探讨其在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及机制。方法通过显微注射zdhhc17吗啉反义寡聚核苷酸(MO)抑制zdhhc17翻译,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化。利用斑马鱼整封原位杂交技术,检测集中延伸运动相关标记基因(dlx3b、ntl、myod1、tbx6等)的表达变化。利用RT-PCR技术,检测集中延伸运动相关调控因子mRNA表达水平的变化。结果敲除zdhhc17基因后,斑马鱼胚胎集中延伸运动出现严重缺陷,主要表现为尾部弯曲变短(82/118),且集中延伸运动相关标记基因表达异常,钙黏附蛋白家族cdh1、padh18a mRNA水平降低。结论 zdhhc17通过调节钙黏附蛋白家族cdh1、padh18a基因的表达,进而影响细胞黏附运动,最终参与调控斑马鱼胚胎集中延伸运动。 展开更多
关键词 zdhhc17 棕榈酰化 集中延伸运动 钙黏附蛋白家族 整封原位杂交 斑马鱼
下载PDF
鳜鱼生肌调节因子MyoD的克隆及其发育表达分析 被引量:4
13
作者 李玉珑 农小献 +5 位作者 李虹辉 王贝贝 刘希良 褚武英 张建社 李琦华 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2013年第4期63-68,共6页
生肌调节因子是肌肉形成的关键控制因素.通过RT-PCR方法克隆得到鳜鱼主要生肌调节因子MyoD序列.鳜鱼MyoD基因cDNA长度为813 bp,编码270个氨基酸,推导的氨基酸序列含有1个bHLH结构.经与其他动物MyoD氨基酸序列比对发现不同动物MyoD的bHL... 生肌调节因子是肌肉形成的关键控制因素.通过RT-PCR方法克隆得到鳜鱼主要生肌调节因子MyoD序列.鳜鱼MyoD基因cDNA长度为813 bp,编码270个氨基酸,推导的氨基酸序列含有1个bHLH结构.经与其他动物MyoD氨基酸序列比对发现不同动物MyoD的bHLH结构域保守性高.通过合成地高辛标记的反义RNA探针对鳜鱼不同发育阶段的胚胎进行整体胚胎原位杂交,结果发现:MyoD最早在肌节早期被检测到信号.伴随着鳜鱼体节从头部往后发育,MyoD也从头部往尾部表达.在体节期,MyoD在中后部表达.尾芽期MyoD的表达量达到最大值.然而,尾芽期过后,头部MyoD的表达量急剧减少,但尾部仍然有强烈的信号.在血流期仍然能在鳜鱼尾部检测到MyoD的微弱信号.到孵出期在鳜鱼鱼眼的后方和胸部腹侧检测到MyoD的强信号,而身体其他地方检测不到信号.仔鱼期没有检测到MyoD表达的信号. 展开更多
关键词 鳜鱼 生肌调节因子 MYOD 整体胚胎原位杂交 发育表达
下载PDF
鲤鱼(Cyprinuscarpio)外异蛋白A受体Edar基因的克隆及表达定位 被引量:2
14
作者 蒋丽 王阳阳 +5 位作者 程安达 张保勇 马龙 王书 刘永新 孙效文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期99-107,共9页
外异蛋白A受体(Ectodysplasin-A receptor,Edar)基因最早是在哺乳动物中发现的,其在皮肤附属物的发育中具有重要的生物学功能。利用Genfishing差异筛选技术对建鲤和镜鲤的皮肤转录表达产物进行筛选,得到Edar基因的部分片段。通过克隆镜... 外异蛋白A受体(Ectodysplasin-A receptor,Edar)基因最早是在哺乳动物中发现的,其在皮肤附属物的发育中具有重要的生物学功能。利用Genfishing差异筛选技术对建鲤和镜鲤的皮肤转录表达产物进行筛选,得到Edar基因的部分片段。通过克隆镜鲤mRNA全长发现,镜鲤该基因全长CDS为1 389 bp,编码一个含有462个氨基酸的蛋白质,包含一个信号肽位点、肿瘤坏死因子受体结合位点序列、跨膜区和死亡结构域。序列比对结果表明,镜鲤Edar蛋白与斑马鱼相似度最高,达88.31%,而与其亲缘关系较远的爪蟾,鸡,人类,小鼠相似度较低,分别是64.88%,63.79%,64.36%,63.50%。对5'-UTR和3'-UTR区进行分析表明,镜鲤与斑马鱼、青鳉5'-UTR的相似度只有23.78%,24.73%,而与非洲爪蟾、鸡、人和老鼠的相似度更低,仅为11.73%、18%、6.50%、10.04%;3'-UTR与青鳉的相似度为35.49%,与非洲爪蟾、人和小鼠的相似度分别为9.42%、8.05%、9.37%。整体原位杂交结果表明,该基因在建鲤和镜鲤鳞片发生时在鳞片着生的皮肤基质中特异表达,而在非鳞片发生区域表达较弱或者不表达,到所有鳞片发育形成后,该基因的表达消失,表明该基因可能参与鲤鱼鳞片的起始发育而不是后期的鳞片模式维持过程。 展开更多
关键词 外异蛋白A受体 RACE 整体原位杂交
下载PDF
小鼠Cpne5基因mRNA水平的表达分布及其在胚胎的表达定位 被引量:3
15
作者 靳雁斌 丁学锋 +4 位作者 司慧远 吴彦瑞 王晓文 吴燕 范文红 《标记免疫分析与临床》 CAS 2013年第2期93-96,共4页
目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA... 目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高;而肝脏和肌肉未表达。新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量最高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少。制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节。结论在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑。 展开更多
关键词 Cpne5基因 信使RNA 表达 整体原位杂交 小鼠
下载PDF
视黄酸缺乏对斑马鱼心脏房室分化的影响 被引量:3
16
作者 侯佳 桂永浩 +3 位作者 张立凤 王跃祥 刘东 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期365-368,I0002,共5页
目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25... 目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25×10-6mol/L)处理斑马鱼胚胎,实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程。通过给予斑马鱼胚胎外源性视黄酸,观察其对DEAB的拮抗作用。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸缺乏对心脏特异基因vmhc和amhc表达的影响。结果斑马鱼胚胎的生存率随着DEAB处理浓度的增加而降低,当DEAB浓度≥5×10-6mol/L时,斑马鱼的畸胎率达100%。5×10-6mol/L DEAB的致畸作用能够被1×10-9mol/L外源性视黄酸所拮抗。整体原位杂交结果显示视黄酸缺乏会导致斑马鱼胚胎心脏房室分化异常,表现为vmhc表达细胞的范围增大,amhc表达细胞的范围缩小。结论通过外源性DEAB处理能有效地建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,DEAB影响胚胎发育存在剂量依赖性。视黄酸在斑马鱼心脏前后轴发育过程中起重要调控作用,心脏发育早期视黄酸缺乏会抑制心房的发育而支持心室的发育,出现房室分化异常。 展开更多
关键词 视黄酸缺乏 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
下载PDF
小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究 被引量:3
17
作者 李红丽 杨忠 +2 位作者 李泽桂 陈活彝 蔡文琴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2223-2226,共4页
目的 观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法 采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果 ①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上... 目的 观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法 采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果 ①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论 表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。 展开更多
关键词 周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)mRNA 脑发育 全胚胎原位杂交 小鼠
下载PDF
p53同系物Djp53在涡虫胚基早期发育阶段的组织特异性表达及其在再生中的作用 被引量:2
18
作者 吴素格 杨武 +1 位作者 周鲁明 赵博生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期561-567,共7页
为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10... 为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10天和成虫的实质组织中表达较弱.RNA干扰后的RT-PCR检测显示,Djp53表达量显著下降,涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷.由此推断,东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段,通过调节多功能干细胞的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成,是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因,并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞的维持具有重要的作用. 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 Djp53基因 整体原位杂交技术 RT-PCR技术
下载PDF
尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用 被引量:3
19
作者 曹建萌 卢迈新 +2 位作者 叶星 曾祖聪 高风英 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1847-1854,共8页
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚... 为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 整胚原位杂交 胚胎发育 重组激活基因(Rag1)
下载PDF
笠贝soxb、mox基因的鉴定及在足原基发育中的表达模式 被引量:2
20
作者 王倩 郇聘 刘保忠 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1091-1097,共7页
足是软体动物最重要的器官之一,目前对其发育机制尚不了解。软体动物的足由神经和肌肉两部分构成,研究足部神经和肌肉系统在发育早期的的动态变化,对于了解足的形态建成机制具有重要意义。本文利用电镜研究了笠贝(Lottia goshimai)足的... 足是软体动物最重要的器官之一,目前对其发育机制尚不了解。软体动物的足由神经和肌肉两部分构成,研究足部神经和肌肉系统在发育早期的的动态变化,对于了解足的形态建成机制具有重要意义。本文利用电镜研究了笠贝(Lottia goshimai)足的早期发育过程。克隆了lgo-soxb和lgo-mox基因,整装原位杂交表明这两个基因分别表达在早期笠贝幼虫的神经外胚层和中胚层,可作为足发育过程的分子标记。不同发育阶段幼虫的原位杂交结果表明,神经外胚层和中胚层细胞在足发育的起始阶段尚未重叠,而在后续发育阶段,二者相向运动并重叠在一起。结果提示组成贝类足部的神经和肌肉细胞起源于早期胚胎不同的部位,在发育过程中逐渐互相接近并重叠,至担轮幼虫晚期共同作用形成足原基。本研究展示了足原基的早期形成过程,为深入研究软体动物足的发育机制提供了基础信息。 展开更多
关键词 笠贝 发育 整装原位杂交
下载PDF
上一页 1 2 5 下一页 到第
使用帮助 返回顶部