酒蒸女贞子对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用

目的比较女贞子生品及酒蒸炮制品对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用。方法 SD大鼠灌服甲状腺素片诱导肾阴虚模型,然后分别给予女贞子生品及酒蒸4 h、酒蒸8 h炮制品提取液进行干预,空白对照组给予等体积的蒸馏水,各组连续灌胃24 d。用黄嘌呤氧化酶法测定大鼠睾丸组织中SOD活力,用硫代巴比妥酸法测定大鼠睾丸组织中MDA水平,用重量法测定大鼠睾丸及免疫器官指数。结果与空白对照组比较,肾阴虚模型大鼠睾丸组织中SOD活力显著降低,MDA水平显著升高,睾丸、胸腺、肝脏、肾脏及脾脏指数明显下降。女贞子生品及酒蒸品均能显著提高肾阴虚模型大鼠的睾丸、胸腺、肝脏、脾脏及肾脏的脏器指数,增强睾丸组织SOD和降低MDA水平,但均以酒蒸8 h炮制品作用最佳。结论女贞子酒蒸后可增强对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用。

蒸制工艺对酒女贞子外观性状和主要成分的影响

目的:探究女贞子酒制过程中外观性状及主要成分随蒸制时间的变化规律,为修订《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版酒女贞子含量测定的方法提供依据。方法:按《中国药典》2015年版方法制备不同蒸制时间的酒女贞子样品,结合PANTONE色卡观察酒女贞子性状变化,采用高效液相色谱法(HPLC)对样品中特女贞苷、红景天苷、酪醇、松果菊苷、毛蕊花糖苷、芦丁6个成分含量进行测定,采用统计软件分析酒女贞子蒸制过程中性状、主要成分随蒸制时间的变化规律。结果:随蒸制时间的增加,酒女贞子颜色逐渐加深,并伴有白霜,酒蒸6~24 h的样品符合《中国药典》2015年版酒女贞子性状标准,蒸制时间超过12 h时,酒女贞子的性状不再发生变化;女贞子在酒蒸过程中,特女贞苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量降低,芦丁含量略有下降,红景天苷和酪醇含量升高。结论:经酒制后,女贞子外观性状、内在成分均发生明显变化,两者存在一定相关性,可反映女贞子的炮制质量,建议以含量相对较高、含量差异较小且生物活性强的红景天苷作为酒女贞子含量测定的指标成分。

酒制对女贞子主要化学成分的影响

用酒蒸和酒炖两种方法分别炮制女贞子2 h、4 h、8 h、10 h。测定不同方法炮制后女贞子中齐墩果酸、特女贞苷的含量,并以齐墩果酸和特女贞苷的含量变化作为综合指标,考察女贞子不同炮制工艺之间的差异。结果表明,酒制后女贞子中齐墩果酸含量比生品升高,特女贞苷含量比生品降低,在酒蒸4 h的时候,其综合质量评分最高。女贞子较佳的炮制工艺为酒蒸4 h。

HPLC法评估补肾强身胶囊中酒女贞子的质量

目的 HPLC法评估补肾强身胶囊中酒女贞子的质量。方法建立HPLC法测定补肾强身胶囊中红景天苷和特女贞苷的含有量,通过测定不同炮制时间两者的含有量,探讨女贞子在炮制过程中的变化规律,通过配对样本t检验分析补肾强身胶囊和酒女贞子中特女贞苷含有量和红景天苷含有量的比值(比值)。结果红景天苷和特女贞苷分别在2.956~118.2、12.46~498.2μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999 8),平均回收率分别为103.78%、103.81%,RSD分别为1.2%、0.7%。21 h内随着炮制时间的延长,酒女贞子中红景天苷含有量逐渐升高,特女贞苷含有量逐渐降低,比值逐渐变小。t检验表明补肾强身胶囊和酒女贞子的比值无显著差异。29批样品红景天苷、特女贞苷含有量和比值范围分别为0.09~0.60 mg/粒、0.60~3.62 mg/粒和1.5~31.7。结论该方法准确有效,重现性好,可为提高补肾强身胶囊质量标准提供依据。

基于TGF-β1/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后治疗糖尿病肾纤维化的作用机制

目的基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的作用与机制。方法随机选取8只SD雄性大鼠作为空白组,其余大鼠高脂饲料喂养联合腹腔注射1%链脲佐菌素(65 mg/kg)建立DN模型。DN模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍阳性药组,女贞子低、高剂量组,酒女贞子低、高剂量组,每组8只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,1次/d,连续8周。血糖仪检测空腹血糖,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白量,ELISA法测定血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,Masson染色法观察大鼠肾组织病理变化,qRT-PCR法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、Smad 7 mRNA表达水平,Western blotting法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、磷酸化Smad 3(p-Smad 3)、Smad 7、磷酸化Smad 7(p-Smad 7)蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白及血清中Scr、BUN水平显著升高(P<0.01);肾组织可见肾小球周围有胶原纤维增生,中度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜增厚,肾小球萎缩;肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3和p-Smad 3蛋白表达明显上调(P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7、p-Smad 7蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组相比,女贞子酒蒸前后大鼠肾纤维化及肾损伤均有不同程度改善,血糖、24 h尿蛋白及血清BUN、SCr水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3、p-Smad 3蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7和p-Smad 7蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),且酒女贞子的改善效果优于女贞子。结论女贞子酒蒸后抗DN大鼠肾纤维化作用增强,可能是通过调控TGF-β1/Smads通路增强对DN大鼠肾纤维化的治疗作用。

HPLC-MS/MS法同时测定更年宁中11个成分

目的:建立HPLC-MS/MS法同时测定更年宁中哈巴苷、红景天苷、特女贞苷、党参炔苷、蟛蜞菊内酯、哈巴俄苷、王不留行黄酮苷、6-姜辣素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ共11个成分的含量。方法:采用C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为25℃,进样量为1μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),电离模式为ESI-(哈巴苷、红景天苷、特女贞苷、党参炔苷、蟛蜞菊内酯、哈巴俄苷)和ESI+(王不留行黄酮苷、6-姜辣素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ),多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:11个成分的线性范围分别为1.485~29.71、1.620~32.40、7.801~156.0、0.518~10.35、0.167~3.333、0.359~7.179、1.455~29.10、1.520~30.40、0.160~3.205、0.143~2.864、0.157~3.136μg·mL^(-1),r均≥0.9980;平均回收率(n=6)在95.9%~102.6%,RSD在0.90%~3.0%。5个企业生产的10批更年宁样品中上述11个成分的含量分别为14.8~104.5、37.6~288.5、335.8~1332.8、6.2~10.1、6.6~61.8、13.7~75.1、57.4~132.8、16.9~70.6、11.8~33.9、3.4~15.4、6.5~12.9μg·g^(-1)。结论:本方法灵敏、准确,可用于更年宁的质量控制。

益龄精口服液中红景天苷的含量测定方法建立及其量值传递研究

目的 建立益龄精口服液中红景天苷的含量测定方法 ,研究其从饮片至制剂成品生产过程中的量值传递关系。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)对指标成分红景天苷进行含量测定,以乙腈-水(7∶93)为流动相,等度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);检测波长为220 nm;柱温为35℃;进样量为10μL。结果 所建立的红景天苷含量测定方法 的方法 学验证均良好,红景天苷在56.109~3 591 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系(r^(2)=1.000 0),平均加样回收率为99.19%,RSD为0.27%(n=6),15批益龄精口服液中红景天苷从酒女贞子饮片到中间体和成品的平均转移率分别为(56.93±5.29)%、(47.60±4.32)%。结论 本研究建立了简便、准确、重现性好的指标成分定量方法 ,并进一步探讨了红景天苷在制剂生产过程中的量值传递规律,为完善益龄精口服液的质量标准和过程控制提供参考。

女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的变化规律

目的:探讨女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的动态变化规律。方法:采用HPLC同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间(4,8,12,16,20,24 h)炮制品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、红景天苷、酪醇及羟基酪醇的含量。结果:在24 h内,随着酒蒸时间的延长,松果菊苷含量逐渐降低,红景天苷含量逐渐增加,酪醇、羟基酪醇含量均先逐渐升高后达到稳定状态,而毛蕊花糖苷含量呈先升高后降低的趋势,以红景天苷含量变化最为显著。结论:炮制对女贞子中苯乙醇类成分含量具有显著影响;女贞子酒蒸后,松果菊苷、毛蕊花糖苷产生质变,红景天苷、酪醇、羟基酪醇发生量变。为揭示女贞子的炮制机制与女贞子饮片的规范化炮制及研发提供了实验依据。

基于女贞子和酒女贞子中主要差异性成分的体内药代动力学研究

针对女贞子和酒女贞子中的10个主要差异性成分建立定量分析方法,研究女贞子和酒女贞子分别给药后大鼠体内这10个成分(苯乙醇类、环烯醚萜类和三萜类)的药代动力学行为。本研究利用LC-QQQ-MS技术建立了10个成分的定量分析方法,方法学考察结果均符合生物样本分析要求。之后利用该方法检测了大鼠单次给药(同批次女贞子和酒女贞子水提物)后不同时间点血浆中的各成分浓度,计算了药物的药代动力学参数,构建了各成分的药-时曲线。分析药代动力学参数发现,苯乙醇类成分(红景天苷、酪醇、羟基酪醇)在两种样本中的AUC0-24 h和C_(max)均较大,说明该类成分为女贞子类样本的主要药效物质。此外,其中8种体外主要差异性成分的t_(max)值在酒女贞子给药条件时更小,说明这些成分在酒女贞子给药后起效更快;而另外2种成分-特女贞苷和齐墩果酸的t_(max)值则在酒女贞子给药时更大,说明这两类成分在酒女贞子给药环境下有缓释、长效的特征。观察各成分药-时曲线发现,酪醇和羟基酪醇在两组样本中均有二次达峰现象,但红景天苷只在酒女贞子中有二次达峰,该现象进一步提示酒女贞子给药后发挥作用更持久。另外,通过计算发现,酒女贞子给药条件下特女贞苷和齐墩果酸的相对生物利用度都大于100%,进一步验证了"女贞子酒制增效"的中医理论。本文不仅明确了体外有差异的10种成分在不同给药组的药代参数及相对生物利用度的差异,而且揭示了各类成分在体内外的变化规律及其关联性,为女贞子和酒女贞子质控指标的选择以及炮制机制、体内代谢规律的深入研究提供了实验依据。本实验获得中国中医科学院中医基础理论研究所伦理委员会批准。

女贞子酒蒸过程中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸的动态变化

目的：分析女贞子酒蒸过程中3种裂环环烯醚萜苷类成分的动态变化规律。方法：采用HPLC同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间（4，8，12，16，20，24h）炮制品中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸含量，流动相乙腈（A）-0．1％甲酸溶液（B）梯度洗脱（0～19min，12％～25％A），检测波长235nm。结果：新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯、女贞酸的线性范围分别为0．0345～3．450，0．00586～0．586，0．0286～2．860μg，平均加样回收率分别为99．49％，99．02％，97．80％。女贞子酒蒸后新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量显著降低，而女贞酸含量显著升高；在24h内，随着蒸制时间的延长，新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量逐渐降低，而女贞酸含量逐渐升高后达稳定状态。结论：女贞子酒蒸后新女贞苷、木樨榄苷．11一甲酯产生质变，女贞酸发生量变，为科学阐释女贞子炮制机制及其饮片的规范化管理提供实验依据。

酒女贞子对激怒致肝肾阴虚大鼠的肝肾保护作用

目的 研究酒女贞子对综合激怒法致大鼠肝肾阴虚证的肝肾保护作用。方法 雄性SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组及低、中、高3个剂量实验组,每组8只。用综合激怒方法建立大鼠因情志失调致肝肾阴虚模型。造模后,低、中、高3个剂量实验组分别给予0.1,0.2和0.4 g·kg^(-)的酒女贞子提取物,qd,连续14 d,正常组和模型组给予蒸馏水。用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中内分泌指标促甲状腺激素(TSH)和睾酮(T)的含量及肝肾组织中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒微量法检测肝肾组织匀浆液中氧化应激指标丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 正常组、模型组和高剂量实验组大鼠的血清TSH含量分别为(14.02±0.74),(15.55±0.90)和(14.38±0.73) mU·L^(-);这3组血清的T含量分别为(262.82±14.55),(245.28±9.570)和(272.86±18.91) pg·mL^(-);这3组肝肾组织的IL-6含量分别为(106.10±2.78),(111.63±3.66)和(103.73±4.17) pg·mL^(-);这3组肝肾组织的IL-1β含量分别为(25.31±0.98),(26.79±0.95)和(24.76±1.11) pg·mL^(-);这3组肝肾组织的MDA含量分别为(9.65±2.18),(13.29±2.04)和(8.41±0.9) nmol·mg^(-);这3组肝肾组织的GSH含量分别为(3.70±0.77),(1.85±0.94)和(3.57±0.56) pg·mg^(-);模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 酒女贞子可通过改善氧化应激、抑制炎症因子的释放和调节内分泌紊乱对激怒致肝肾阴虚大鼠有一定的改善调节作用。

女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异分析

目的比较女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,研究女贞子酒蒸对二至丸化学成分的影响。方法采用HPLC法测定不同批次的女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸指纹图谱,并进行相似度评价;采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法研究女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,筛选出其差异成分。结果女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱具有35个共有峰,10批生女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.936~0.994,10批酒蒸女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.937~0.995;女贞子酒蒸前后配方的二至丸HPLC指纹图谱具有显著差异,共筛选出羟基酪醇、特女贞苷、女贞苷G13、女贞酸、红景天苷、毛蕊花糖苷、酪醇、油女贞苷、松果菊苷等14种差异成分。结论女贞子酒蒸对二至丸的化学成分影响显著,建立的指纹图谱结合PCA、OPLS-DA可有效区分女贞子生品与酒蒸品配方的二至丸,辨识出的差异成分为二至丸质量标志物的选择提供了科学依据。