黑豆与黄酒共制女贞子炮制工艺优化

目的优化黑豆与黄酒共制女贞子炮制工艺。方法在单因素试验基础上,以蒸制时间、蒸制次数、烘制温度为影响因素,外观性状,红景天苷、特女贞苷、女贞苷G13、醇溶性浸出物含量,DPPH、ABTS自由基清除率的总评“归一值”(OD值)为评价指标,星点设计-响应面法优化炮制工艺。结果最优工艺为蒸制时间70 min,蒸制次数7次,烘制温度90℃,OD值为0.8415。结论该方法简便可靠,稳定可行,可用于黑豆黄酒共制女贞子。

基于UPLC结合PCA法研究黄酒类型对酒女贞子质量影响

目的:研究不同类型黄酒(干型、半干型、半甜型、甜型)对酒制后女贞子的外观性状及主成分的变化规律,探究黄酒类型对酒女贞子的炮制影响。方法:采用HPLC方法对不同类型黄酒炮制后的酒女贞子进行主成分分析,比较不同类型黄酒炮制后女贞子的外观性状及浸出物、红景天苷、特女贞苷、毛蕊花糖苷、松果菊苷、芦丁等多个成分的含量。结果:4种类型黄酒对制后女贞子性状无较大影响,对浸出物及芦丁含量影响较小,制后红景天苷含量升高,特女贞苷、松果菊苷及毛蕊花糖苷含量下降。通过4种黄酒对浸出物及其他成分的组间和组内差异比较,发现黄酒类型对红景天苷、特女贞苷、松果菊苷无显著性影响,而对芦丁和毛蕊花糖苷有显著的影响。结论:不同类型黄酒对酒女贞子的外观性状及浸出物、红景天苷、特女贞苷、松果菊苷含量无显著性影响,对芦丁和毛蕊花糖苷有显著性影响。

酒蒸女贞子对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用

目的比较女贞子生品及酒蒸炮制品对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用。方法 SD大鼠灌服甲状腺素片诱导肾阴虚模型,然后分别给予女贞子生品及酒蒸4 h、酒蒸8 h炮制品提取液进行干预,空白对照组给予等体积的蒸馏水,各组连续灌胃24 d。用黄嘌呤氧化酶法测定大鼠睾丸组织中SOD活力,用硫代巴比妥酸法测定大鼠睾丸组织中MDA水平,用重量法测定大鼠睾丸及免疫器官指数。结果与空白对照组比较,肾阴虚模型大鼠睾丸组织中SOD活力显著降低,MDA水平显著升高,睾丸、胸腺、肝脏、肾脏及脾脏指数明显下降。女贞子生品及酒蒸品均能显著提高肾阴虚模型大鼠的睾丸、胸腺、肝脏、脾脏及肾脏的脏器指数,增强睾丸组织SOD和降低MDA水平,但均以酒蒸8 h炮制品作用最佳。结论女贞子酒蒸后可增强对肾阴虚模型大鼠睾丸组织氧化应激损伤的保护作用。

正交试验法优选酒蒸女贞子最佳炮制工艺

目的:优选酒蒸女贞子的最佳炮制工艺。方法:采用正交试验设计,以齐墩果酸、特女贞苷为含量指标综合评判,研究女贞子酒蒸工艺的三个关键因素即蒸前润制时间(A)、黄酒用量(B)和蒸制时间(C)对成品质量的影响,优选女贞子酒蒸工艺的技术参数。结果:蒸制时间(C)和黄酒用量(B)是女贞子炮制的关键因素,蒸前润制时间(A)对结果无显著影响,影响程度大小顺序为C>B>A。结论:女贞子蒸法炮制工艺为C3B2A1:取净女贞子加入其重量20%的黄酒拌匀,润制或不润,蒸或炖8h,取出,干燥。

蒸制工艺对酒女贞子外观性状和主要成分的影响

目的:探究女贞子酒制过程中外观性状及主要成分随蒸制时间的变化规律,为修订《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版酒女贞子含量测定的方法提供依据。方法:按《中国药典》2015年版方法制备不同蒸制时间的酒女贞子样品,结合PANTONE色卡观察酒女贞子性状变化,采用高效液相色谱法(HPLC)对样品中特女贞苷、红景天苷、酪醇、松果菊苷、毛蕊花糖苷、芦丁6个成分含量进行测定,采用统计软件分析酒女贞子蒸制过程中性状、主要成分随蒸制时间的变化规律。结果:随蒸制时间的增加,酒女贞子颜色逐渐加深,并伴有白霜,酒蒸6~24 h的样品符合《中国药典》2015年版酒女贞子性状标准,蒸制时间超过12 h时,酒女贞子的性状不再发生变化;女贞子在酒蒸过程中,特女贞苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量降低,芦丁含量略有下降,红景天苷和酪醇含量升高。结论:经酒制后,女贞子外观性状、内在成分均发生明显变化,两者存在一定相关性,可反映女贞子的炮制质量,建议以含量相对较高、含量差异较小且生物活性强的红景天苷作为酒女贞子含量测定的指标成分。

基于多元统计分析的酒制前后女贞子成分差异分析

为探究酒制对女贞子化学成分的影响,采用UPLC-Orbitrap-MS技术结合多元统计分析对生女贞子、酒女贞子差异性化学成分进行研究。基于分子网络技术、主成分分析(PCA)模型和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)模型筛选女贞子酒制前后出现差异的主要化学成分。共鉴定出42种化学成分,结果显示PCA,OPLS-DA可将女贞子与酒女贞子完全区分开来,OPLS-DA筛选出VIP>1的22个酒制前后出现差异的主要化学成分。本研究建立了一种新的数据处理策略,以系统识别生女贞子和酒女贞子的化学成分,筛选女贞子酒制前后的差异性成分,为进一步研究女贞子酒制增效物质基础及原理提供坚实的基础。

酒制对女贞子主要化学成分的影响

用酒蒸和酒炖两种方法分别炮制女贞子2 h、4 h、8 h、10 h。测定不同方法炮制后女贞子中齐墩果酸、特女贞苷的含量,并以齐墩果酸和特女贞苷的含量变化作为综合指标,考察女贞子不同炮制工艺之间的差异。结果表明,酒制后女贞子中齐墩果酸含量比生品升高,特女贞苷含量比生品降低,在酒蒸4 h的时候,其综合质量评分最高。女贞子较佳的炮制工艺为酒蒸4 h。

女贞子高压酒炖工艺的优化

目的 优化女贞子高压酒炖工艺。方法 以加酒量、加水量、炖制温度/压力、炖制时间为影响因素,红景天苷、羟基酪醇、酪醇含量为评价指标,正交试验优化高压酒炖工艺。结果 最佳条件为取净女贞子于不锈钢容器中,加20%黄酒与80%水,拌匀,密闭,置于立式压力蒸汽灭菌器中,用蒸汽加热(123℃/0.12 MPa)6 h。结论 该方法稳定可行,可为女贞子的炮制规范化和质量控制提供依据。

基于UPLC特征图谱及多成分同时定量的酒女贞子炮制工艺研究

目的建立UPLC特征图谱和多成分同时定量的分析方法,为酒女贞子炮制过程质量评价提供依据。方法采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长0~3 min为284 nm,3~25 min为224 nm,进样量1μL。采用化学模式识别分析方法对酒女贞子炮制过程进行质量评价。结果建立了女贞子炮制前后的UPLC特征图谱,女贞子和酒女贞子分别确定了10个和14个共有峰,指认3、4、7、9号峰为红景天苷、松果菊苷、特女贞苷、女贞苷G13,炮制后新增成分11号峰为5-羟甲基糠醛;聚类分析和主成分分析(PCA)将酒女贞子不同炮制过程的样品分为2类,结合正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)发现了导致不同炮制过程样品间差异的5个标志性化合物。定量分析了3个指标性成分,红景天苷随着炮制时间的延长含量增加,特女贞苷和女贞苷G13随着炮制时间的延长含量趋于稳定。结论所建立的UPLC特征图谱及多成分同时定量的方法准确、重复性好,对女贞子药材及酒女贞子炮制过程的质量控制及整体性评价具有重要意义。

酒女贞子配方颗粒质量标准研究

目的提高酒女贞子配方颗粒质量标准控制。方法采用薄层色谱法,以女贞子对照药材作为对照进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定其特征成分特女贞苷含量。结果薄层色谱鉴别中,供试品溶液色谱在与对照药材溶液色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。特女贞苷在进样量为0.766 46~15.329 19μg范围内与峰面积线性关系良好(r^2=0.999 8);平均回收率为91.70%,RSD为1.14%(n=6)。结论该方法简便、准确,重复性良好,完善和提高了酒女贞子配方颗粒的质量标准。

HPLC法评估补肾强身胶囊中酒女贞子的质量

目的 HPLC法评估补肾强身胶囊中酒女贞子的质量。方法建立HPLC法测定补肾强身胶囊中红景天苷和特女贞苷的含有量,通过测定不同炮制时间两者的含有量,探讨女贞子在炮制过程中的变化规律,通过配对样本t检验分析补肾强身胶囊和酒女贞子中特女贞苷含有量和红景天苷含有量的比值(比值)。结果红景天苷和特女贞苷分别在2.956~118.2、12.46~498.2μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999 8),平均回收率分别为103.78%、103.81%,RSD分别为1.2%、0.7%。21 h内随着炮制时间的延长,酒女贞子中红景天苷含有量逐渐升高,特女贞苷含有量逐渐降低,比值逐渐变小。t检验表明补肾强身胶囊和酒女贞子的比值无显著差异。29批样品红景天苷、特女贞苷含有量和比值范围分别为0.09~0.60 mg/粒、0.60~3.62 mg/粒和1.5~31.7。结论该方法准确有效,重现性好,可为提高补肾强身胶囊质量标准提供依据。

基于TGF-β1/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后治疗糖尿病肾纤维化的作用机制

目的基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路探讨女贞子酒蒸前后改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的作用与机制。方法随机选取8只SD雄性大鼠作为空白组,其余大鼠高脂饲料喂养联合腹腔注射1%链脲佐菌素(65 mg/kg)建立DN模型。DN模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍阳性药组,女贞子低、高剂量组,酒女贞子低、高剂量组,每组8只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,1次/d,连续8周。血糖仪检测空腹血糖,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白量,ELISA法测定血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,Masson染色法观察大鼠肾组织病理变化,qRT-PCR法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、Smad 7 mRNA表达水平,Western blotting法测定肾组织TGF-β1、Smad 3、磷酸化Smad 3(p-Smad 3)、Smad 7、磷酸化Smad 7(p-Smad 7)蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白及血清中Scr、BUN水平显著升高(P<0.01);肾组织可见肾小球周围有胶原纤维增生,中度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜增厚,肾小球萎缩;肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3和p-Smad 3蛋白表达明显上调(P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7、p-Smad 7蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组相比,女贞子酒蒸前后大鼠肾纤维化及肾损伤均有不同程度改善,血糖、24 h尿蛋白及血清BUN、SCr水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肾组织TGF-β1、Smad 3 mRNA表达及TGF-β1、Smad 3、p-Smad 3蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),肾组织Smad 7 mRNA表达及Smad 7和p-Smad 7蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),且酒女贞子的改善效果优于女贞子。结论女贞子酒蒸后抗DN大鼠肾纤维化作用增强,可能是通过调控TGF-β1/Smads通路增强对DN大鼠肾纤维化的治疗作用。

HPLC-MS/MS法同时测定更年宁中11个成分

目的:建立HPLC-MS/MS法同时测定更年宁中哈巴苷、红景天苷、特女贞苷、党参炔苷、蟛蜞菊内酯、哈巴俄苷、王不留行黄酮苷、6-姜辣素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ共11个成分的含量。方法:采用C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为25℃,进样量为1μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),电离模式为ESI-(哈巴苷、红景天苷、特女贞苷、党参炔苷、蟛蜞菊内酯、哈巴俄苷)和ESI+(王不留行黄酮苷、6-姜辣素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ),多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:11个成分的线性范围分别为1.485~29.71、1.620~32.40、7.801~156.0、0.518~10.35、0.167~3.333、0.359~7.179、1.455~29.10、1.520~30.40、0.160~3.205、0.143~2.864、0.157~3.136μg·mL^(-1),r均≥0.9980;平均回收率(n=6)在95.9%~102.6%,RSD在0.90%~3.0%。5个企业生产的10批更年宁样品中上述11个成分的含量分别为14.8~104.5、37.6~288.5、335.8~1332.8、6.2~10.1、6.6~61.8、13.7~75.1、57.4~132.8、16.9~70.6、11.8~33.9、3.4~15.4、6.5~12.9μg·g^(-1)。结论:本方法灵敏、准确,可用于更年宁的质量控制。

益龄精口服液中红景天苷的含量测定方法建立及其量值传递研究

目的 建立益龄精口服液中红景天苷的含量测定方法 ,研究其从饮片至制剂成品生产过程中的量值传递关系。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)对指标成分红景天苷进行含量测定,以乙腈-水(7∶93)为流动相,等度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);检测波长为220 nm;柱温为35℃;进样量为10μL。结果 所建立的红景天苷含量测定方法 的方法 学验证均良好,红景天苷在56.109~3 591 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系(r^(2)=1.000 0),平均加样回收率为99.19%,RSD为0.27%(n=6),15批益龄精口服液中红景天苷从酒女贞子饮片到中间体和成品的平均转移率分别为(56.93±5.29)%、(47.60±4.32)%。结论 本研究建立了简便、准确、重现性好的指标成分定量方法 ,并进一步探讨了红景天苷在制剂生产过程中的量值传递规律,为完善益龄精口服液的质量标准和过程控制提供参考。

LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分

目的：通过LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物（特女贞苷、新女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷）模拟清蒸品的化学成分,探讨女贞子蒸制过程中环烯醚萜苷类成分的转化机制。方法：色谱条件为流动相乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）梯度洗脱（0~5 min,7%~12%A;5~20 min,12%~25%A;20~30 min,25%~40%A;30~35 min,40%~100%A）,流速0.2 m L·min^-1,柱温25℃,进样量3μL,检测波长240 nm;质谱使用Agilent 6230型LC-TOF/MS联用系统,在ESI/MS正离子模式下采集数据。通过对照品定位、质谱数据及文献参照分析4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分。结果：4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品中均检出了橄榄酸;特女贞苷模拟清蒸品中还检出红景天苷和2种特女贞苷异构体;新女贞苷模拟清蒸品中鉴定出了3,4-二羟基苯乙基-β-D-葡萄糖苷;橄榄苦苷和女贞苷模拟清蒸品中分别检出其各自的苷元羟基酪醇和酪醇。结论：女贞子中环烯醚萜苷类成分性质不稳定,加水、加热可使其水解生成次级苷或者苷元,特女贞苷在模拟炮制过程中可转化为其异构体。女贞子酒蒸后补肝肾药效增强与其环烯醚萜苷类成分水解密切相关。

基于质量常数结合颜色精准识别的酒女贞子质量快速评价研究

目的以酒女贞子为例,基于质量常数结合颜色精准识别建立一种中药质量快速评价方法。方法以市场收集到的20批酒女贞子饮片为研究对象,测定饮片质量(m)和红景天苷含量(c);通过计算得到质量常数(A)与百分质量常数(A%),并据此建立一种质量常数评价方法;采用色度仪对样品粉末色度(L*、a*、b*)进行快速检测,将其与A、c进行相关性分析,在中药颜色精准识别后关联质量内涵,建立基于色度的快速质量评价法。结果根据质量常数评价法划分为三组:优组(A≥0.047,2批),良组(0.028≤A<0.047,5批),合格组(A<0.028,12批)。样品色度值L*、a*、b*与A、c呈负相关(P<0.05);通过色度值实现了酒女贞子质量的快速评价,将样品分为两组,即上品(含优组、良组)L*≤27.68,b*≤11.49,a*≤5.84,普品(含合格组)L*>27.68,b*>11.49,a*>5.84。结论以酒女贞子为例,建立了一种包含性状和成分双重特征的质量常数评价法;同时为色度值赋予质量内涵,建立了一种“更快、更准、更便捷”的色度识别评价法。

女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异分析

目的比较女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,研究女贞子酒蒸对二至丸化学成分的影响。方法采用HPLC法测定不同批次的女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸指纹图谱,并进行相似度评价;采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法研究女贞子生品与酒蒸品分别配方的二至丸HPLC指纹图谱差异,筛选出其差异成分。结果女贞子酒蒸前后分别配方的二至丸HPLC指纹图谱具有35个共有峰,10批生女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.936~0.994,10批酒蒸女贞子配方的二至丸HPLC指纹图谱相似度为0.937~0.995;女贞子酒蒸前后配方的二至丸HPLC指纹图谱具有显著差异,共筛选出羟基酪醇、特女贞苷、女贞苷G13、女贞酸、红景天苷、毛蕊花糖苷、酪醇、油女贞苷、松果菊苷等14种差异成分。结论女贞子酒蒸对二至丸的化学成分影响显著,建立的指纹图谱结合PCA、OPLS-DA可有效区分女贞子生品与酒蒸品配方的二至丸,辨识出的差异成分为二至丸质量标志物的选择提供了科学依据。

中药女贞子饮片中8个成分的含量比较研究

目的：针对不同来源女贞子和酒女贞子饮片中8个成分（红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷、木犀草素、芹菜素、齐墩果酸、熊果酸）建立高效液相色谱含量测定方法,并对女贞子、酒女贞子饮片及水煎煮前后所测成分的含量进行比较,为其质量标准提高和临床应用提供依据。方法：采用液相色谱法,使用Agilent Prep-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以乙腈（A）-0.02%磷酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0~5 min,5%A→10%A;5~15 min,10%A;15~60 min,10%A→33%A;60~65 min,33%A→90%A;65~75 min,90%A;75~80 min,100%A）,流速1 m L·min-1,检测波长224 nm（测定红景天苷、酪醇、特女贞苷）、349 nm（测定木犀草苷、木犀草素、芹菜素）、206 nm（测定齐墩果酸、熊果酸）,柱温25℃。结果：建立的8个成分含量测定方法简便、可行;女贞子、酒女贞子饮片中红景天苷、酪醇、木犀草素和芹菜素的含量存在显著性差异;2种饮片的水煎液中红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷可检出,且变化明显。结论：木犀草素和芹菜素可以用于饮片的鉴别,红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草苷具有特征性,可用于女贞子、酒女贞子饮片的质量评价。

女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的变化规律

目的:探讨女贞子酒蒸过程中5种苯乙醇类成分的动态变化规律。方法:采用HPLC同时测定女贞子生品及酒蒸不同时间(4,8,12,16,20,24 h)炮制品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、红景天苷、酪醇及羟基酪醇的含量。结果:在24 h内,随着酒蒸时间的延长,松果菊苷含量逐渐降低,红景天苷含量逐渐增加,酪醇、羟基酪醇含量均先逐渐升高后达到稳定状态,而毛蕊花糖苷含量呈先升高后降低的趋势,以红景天苷含量变化最为显著。结论:炮制对女贞子中苯乙醇类成分含量具有显著影响;女贞子酒蒸后,松果菊苷、毛蕊花糖苷产生质变,红景天苷、酪醇、羟基酪醇发生量变。为揭示女贞子的炮制机制与女贞子饮片的规范化炮制及研发提供了实验依据。

酒女贞子HPLC指纹图谱的建立及多成分含量的测定

目的:建立酒女贞子饮片的HPLC指纹图谱及建立指标成分含量测定的方法,为酒女贞子饮片的质量控制提供参考。方法:采用ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长230 nm,建立酒女贞子HPLC指纹图谱,并对红景天苷、齐墩果酸、木犀草素及特女贞苷指标成分的含量测定方法进行方法学考察。结果:红景天苷、齐墩果酸、木犀草素及特女贞苷线性范围分别为0.464~2.320、0.204~4.080、0.041~0.205和0.620~3.100μg,线性关系良好(r>0.999 8)。使用外标法测定红景天苷、齐墩果酸、木犀草素和特女贞苷含量分别在2.648~4.681、5.082~11.770、0.059~0.107和5.158~12.25 mg·g^(-1)范围内。取10个收集地酒女贞子饮片建立HPLC指纹图谱,以木犀草素峰为参比峰,样品相似度与对照图谱相似度均≥0.95,说明各地出售的酒女贞子饮片质量相对稳定。结论:该方法简便快速,分离效果好,重复性好,可为规范及评价酒女贞子质量及同属植物的研究提供参考。