川芎嗪通过Wnt/β-catenin通路调控滋养层细胞增殖和迁移改善子痫前期的研究

目的探索川芎嗪(TMP)治疗子痫前期(PE)的作用及机制。方法将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为对照组(常规培养)和低、中、高剂量实验组(0.5、1.0和2.0 mmol·L^(-1)TMP)及高剂量+抑制剂组(2.0 mmol·L^(-1)TMP+50μmol·L^(-1)PUN-74654)。用细胞计数试剂盒-8法检测细胞存活率,用平板克隆实验检测细胞克隆数,用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖情况,用Transwell实验法检测细胞迁移情况,用蛋白质印迹法检测无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白(CyclinD1)蛋白的表达水平。结果对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和高剂量+抑制剂组的细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(119.57±10.71)%、(142.07±6.02)%、(174.48±13.45)%和(118.71±9.73)%,细胞迁移数目分别为(39.67±3.94)、(53.50±4.43)、(64.67±5.06)、(84.00±4.50)和(68.00±3.46)个,Wnt1蛋白相对表达水平分别为1、2.55±0.03、3.82±0.11、5.01±0.08和1.42±0.06,β-catenin蛋白相对表达水平分别为1、1.47±0.03、2.81±0.10、4.93±0.07和1.45±0.05,CyclinD1蛋白相对表达水平分别为1、1.44±0.03、2.67±0.05、4.02±0.11和1.59±0.04。低、中、高剂量组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组的上述指标与高剂量+抑制剂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TMP可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞增殖和迁移,从而改善PE,且存在剂量依赖性。

小檗碱靶向Wnt5a/NPC1信号通路调节脂自噬抑制动脉粥样硬化形成

目的:探讨小檗碱(BBR)在防治小鼠动脉粥样硬化(AS)病变中对脂自噬的调节作用及分子机制。方法:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠50只随机分为AS模型组、阿托伐他汀组(5 mg·kg-1)、BBR低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg·kg-1);另设10只C57BL/6J小鼠为空白组。12周后苏木素-伊红(HE)及油红O染色检测主动脉AS斑块病理学改变;生化检测血清脂质水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、氧化应激标记物活性氧(ROS)含量及血清脂自噬标记物Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)水平;黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力;免疫组化(IHC)检测主动脉无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(NPC1)分布;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉Wnt5a、NPC1蛋白表达。结果:与空白组比较,AS模型组小鼠可见显著的AS斑块形成,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均显著升高(P<0.01),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与AS模型组比较,阿托伐他汀组、BBR中剂量组及BBR高剂量小鼠AS斑块面积明显减少(P<0.05,P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与阿托伐他汀组比较,BBR中剂量组小鼠以上检测指标差异无统计学意义。结论:BBR可通过竞争性结合Wnt5a激活NPC1表达,上调脂自噬水平降低血脂,抑制炎症介质的释放及氧化应激损伤从而发挥防治AS功效。

非奈利酮对2型糖尿病心肌细胞凋亡的影响

目的探讨非奈利酮对2型糖尿病心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法体外培养HCM心肌细胞,将细胞分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖)、非奈利酮组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+500.0 nmol·L^(-1)非奈利酮)和XAV939组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+500.0 nmmol·L^(-1)非奈利酮+20.0μmol·L^(-1)SKL2001)。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞相关蛋白表达情况,以5-乙炔基-2-脱氧尿苷(Edu)实验检测各组细胞增殖情况,以流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程。结果对照组、高糖组、非奈利酮组和XAV939组细胞无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)3a(Wnt3a)蛋白表达水平分别为0.27±0.03、1.10±0.07、0.47±0.03、0.95±0.07,Edu阳性细胞率分别为(41.21±2.48)%、(20.99±1.15)%、(39.55±2.69)%、(19.30±1.61)%,凋亡率分别为(3.16±0.21)%、(21.97±1.32)%、(9.81±0.35)%、(21.30±1.14)%,G0/G1比例分别为(50.50±3.52)%、(67.77±5.94)%、(53.68±3.07)%、(65.33±3.30)%,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达水平分别为0.88±0.06、0.36±0.03、0.77±0.05、0.31±0.02,裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白水平分别为0.27±0.03、1.01±0.03、0.52±0.05、0.93±0.07。以上指标,高糖组与对照组比较、非奈利酮组与高糖组比较、XAV939组与非奈利酮组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论非奈利酮可通过抑制细胞凋亡、促进增殖、改善周期阻滞减轻高糖诱导的心肌细胞损伤,这可能与调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路有关。