不同发展阶段黑素瘤细胞中Wnt5A和Wnt11基因表达的动态变化

目的:研究Wnt/Ca2+通路中Wnt5A,Wnt11基因在不同发展阶段的黑素瘤细胞中的表达水平.方法:运用RT-PCR法,检测正常黑素细胞和6种黑素瘤细胞中Wnt5A和Wnt11基因表达水平.结果:在正常黑素细胞和不同的黑素瘤细胞中,Wnt5A和Wnt11基因的表达均表现出动态变化的特征.Wnt5A和Wnt11水平在正常黑素细胞中表达很低,而在黑素瘤细胞中有不同程度的升高.另外,分别来自表面生长阶段、结节状生长阶段和黑色素瘤淋巴结转移的WM793B,451Lu和A2058细胞系中,Wnt5A和Wnt11基因表达水平逐渐下降,甚至在A2058细胞系中,两种基因的表达均低于正常黑素细胞.结论:在黑素瘤的不同发展阶段,Wnt5A和Wnt11基因表达的动态变化使非经典的Wnt/Ca2+通路激活程度不同.

补肾活血汤石油醚提取物对BMSCs迁移过程中Wnt5a/PKC通路的影响

目的探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制。方法全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾活血汤石油醚提取物0、25、50、100、200μg/m L剂量组的细胞迁移能力,Western blot和RT-PCR检测Wnt5a、蛋白激酶C(PKC)表达情况。结果第3代BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD44表达阳性,而CD45表达阴性;细胞划痕6 h及12 h后,药物各剂量组细胞迁移速度明显高于空白组(P<0.05,P<0.01);Transwell实验中100μg/m L补肾活血汤石油醚提取物为促细胞迁移最佳剂量,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示与空白对照组比较,药物各剂量组的Wnt5a mRNA水平均升高(P<0.05,P<0.01),而与空白对照组的PKC mRNA水平比较,药物只有100μg/m L剂量mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blot结果表明药物组各剂量的Wnt5a、PKC蛋白表达较空白对照组都明显升高(P<0.01),均且以100μg/m L剂量最高(P<0.01)。结论补肾活血汤石油醚提取物可以促进BMSCs体外迁移,其作用机制可能与Wnt5a/PKC信号通路有关。

Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨Wnt5a基因对人肝癌细胞MHCC97L生物学行为的影响。方法脂质体法介导Wnt5a表达及阴性对照质粒转染MHCC97L细胞;RT-PCR及Western blot法检测质粒DNA片段插入和Wnt5a蛋白的表达;借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期和划痕试验对转染细胞的生物学活性进行检测。结果 pcDNA3.1组细胞生长速度明显快于Wnt5a表达组细胞;pcDNA3.1组细胞克隆形成率明显高于Wnt5a表达组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Wnt5a表达能抑制细胞由G1期→S期的进程;划痕试验显示,Wnt5a表达组较阴性对照组细胞迁移速度明显减慢,当加入Wnt5a抗体阻遏信号通路时,细胞迁移速度加快。结论 Wnt5a可抑制人肝癌细胞MHCC97L的增殖和迁移能力,在肿瘤生长过程中发挥肿瘤抑制基因样作用。

高通量组织微阵列研究Wnt5a和LMP1在鼻咽癌癌变中的作用

目的:研究Wnt5a和EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barr virus latent membrane protein 1,LMP1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)癌变过程中作用的分子机制,评估其是否可作为NPC相关的分子标志物。方法:利用前期制备的NPC组织微阵列芯片,免疫组织化学检测Wnt5a和LMP1在NPC癌变过程不同组织中的蛋白表达,分析Wnt5a异常激活和LMP1蛋白过表达在NPC发生发展中的作用及其与NPC临床病理特征的关系,评估其是否可作为鉴别鼻咽良恶性病变的分子标志物。结果:Wnt5a和LMP1蛋白在NPC中的阳性表达率显著高于异型增生鼻咽上皮、增生鼻咽上皮和正常鼻咽上皮(P<0.05,P<0.01,P<0.01);异型增生鼻咽上皮中的Wnt5a和LMP1蛋白阳性表达率也显著高于增生鼻咽上皮和正常鼻咽上皮(P<0.05,P<0.01)。Wnt5a蛋白和LMP1蛋白在临床Ⅲ和Ⅳ期NPC组织中的阳性表达率显著高于临床Ⅰ和Ⅱ期(P<0.01,P<0.05),有淋巴结转移的NPC组织中Wnt5a蛋白阳性表达率也显著高于无淋巴结转移NPC组织(P<0.01),非角化性NPC组织LMP1蛋白阳性表达显著高于未分化癌和角化性癌(P<0.05,P<0.05);NPC组织中Wnt5a与LMP1蛋白的阳性表达存在显著正相关性(r=0.354,P<0.001)。LMP1和Wnt5a蛋白联合表达检测有助于鼻咽良恶性病变的鉴别。结论:NPC组织中Wnt5a和LMP1的表达存在显著正相关,两者可能共同或相继促进鼻咽上皮细胞的恶性转化和NPC的发生发展;联合应用LMP1和Wnt5a可作为NPC鉴别诊断的较好分子标志物。

严重脓毒症胰岛素目标血糖管理下Wnt5a的变化及其临床意义

目的探讨严重脓毒症目标血糖管理过程中Wnt5a浓度的动态变化及其临床意义。方法采用随机对照双盲的临床试验设计方案，将61例脓毒症患者随机分为：A组20例（目标血糖控制在4．4—6．1mmol／L），B组21例（目标血糖控制在6．2～8．3mmol／L），C组20例（目标血糖控制在8．4～10．0mmol／L）。在入住ICU时就给予目标血糖控制，分别在入住ICU时（0d）及入住ICU后1、3、5、7d采集静脉血，分别用ELISA法、酶联荧光分析（ELFA）法、比浊法检测Wnt5a、降钙素原（PCT）、C-反应蛋白（CRP）浓度的变化；相同时间点观察急性生理学和慢性健康状况Ⅱ（APACHEII）评分，并计算28d死亡率。根据28d存活情况将患者分为死亡组和存活组，并进行对比分析。结果随着治疗时间的延长，A、B、C3组Wnt5a浓度及APACHEⅡ评分均降低，治疗第3、5、7天与人院时比较差异有统计学意义（P均〈0．05）；治疗第7天Wnt5a浓度及APACHEII评分A组较B、C组明显降低（P均〈0．05），B组低于C组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。28d死亡率：A组30％（6／20）与B组33．3％（7／21）、C组35％（7／20）比较降低，但差异无统计学意义（P〉0．05）。死亡组Wnt5a浓度及APACHEII评分较存活组明显提高（P〈0．05）。脓毒症患者入院时Wnt5a浓度与APACHEⅡ评分呈正相关（r=0．737，P=0．001）。结论严重脓毒症患者在严格目标血糖管理下，能明显抑制炎症反应程度，降低Wnt5a浓度及病死率，并改善预后，WntSa有望成为判断脓毒症患者病情严重程度和预后的良好指标。

烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平变化及其临床意义

目的观察烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平变化。方法采集烧伤脓毒症患者的血清标本,采用Western blotting法检测Wnt5a水平,并比较轻、中、重度脓毒症患者血清Wnt5a水平。同期选取轻度烧伤的非脓毒症患者8例作对照。结果烧伤脓毒症患者血清Wnt5a水平高于对照者。动态观察发现,脓毒症痊愈后患者血清Wnt5a水平降低,而随着脓毒症病情恶化血清Wnt5a水平持续升高。结论Wnt5a参与了烧伤患者炎症的发病过程,且检测Wnt5a水平可作为炎症严重程度的诊断指标。

大鼠移植静脉重塑中Wnt5a表达的变化

目的研究Wnt5a在自体移植静脉重塑过程中的表达变化。方法建立大鼠颈静脉—腹主动脉移植模型,分别于术后7、14、28 d取材移植血管,采用免疫组化方法检测Wnt5a蛋白在移植血管中的表达,Real-time PCR定量检测Wnt5a mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照。结果免疫组化结果显示:正常静脉、术后7、14、28 d移植静脉Wnt5a阳性细胞比例分别为(4.67±0.21)%、(20.34±0.26)%、(35.25±0.20)%和(57.24±0.52)%,正常静脉与移植静脉之间差异有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR结果显示:术后7、14、28 d大鼠Wnt5a mRNA表达增加,分别为对照组的3.56、8.44和16.87倍。结论自体静脉移植后,Wnt5a在新生内膜及中膜中高表达,并可能与细胞增殖有关。

Wnt5a和β-catenin在乳腺癌中的表达及其临床意义

探讨Wnt5a和β-连环蛋白(β-catenin)在乳腺癌中的表达及其临床意义。采用免疫组化法检测50例乳腺癌组织及24例正常乳腺组织中Wnt5a及β-catenin的阳性表达,并分析Wnt5a及β-catenin与临床病理参数的关系。乳腺癌组织(13/50)中Wnt5a的阳性率显著低于正常乳腺组织(18/24)(P<0.05),乳腺癌组织(33/50)中β-catenin的阳性率显著高于正常乳腺组织(3/24)(P<0.05)。乳腺癌组织中Wnt5a及β-catenin的阳性表达与TNM分期及淋巴结转移密切相关,与年龄及组织学分级无关。同时乳腺癌组织中Wnt5a与β-catenin表达负相关。Wnt5a及β-catenin共同参与着乳腺癌的发生发展及浸润转移。

Wnt5a在ALS转基因鼠海马齿状回中的表达变化

目的观察Wnt5a在ALS转基因鼠海马齿状回的表达变化,探讨Wnt5a在ALS转基因鼠发病中的作用机制。方法将30只ALS转基因鼠和同窝出生野生型鼠随机分两组,应用免疫荧光和RT-PCR技术分别于95d,108d,122d龄检测Wnt5a在海马中表达情况。结果免疫荧光结果显示,与同窝出生的野生型鼠相比,在95d变化不明显,108d,122d ALS转基因鼠海马齿状回Wnt5a阳性细胞增多,且Wnt5a与GFAP,β-tubulinⅢ共表达。RT-PCR结果显示,与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠海马Wnt5a mRNA水平在95d变化不明显,108d和122d均升高(P<0.05)。结论 Wnt5a在ALS转基因鼠海马齿状回高表达,表明Wnt5a与肌萎缩脊髓侧索硬化症海马异常密切相关。

Wnt5a在雌性小鼠胚胎生殖管道的时空表达

目的探讨Wnt5a在早期雌性生殖管道发育过程中的表达。方法正常孕15.5d、17.5d、19.5d和21.5d的小鼠胚胎,PCR鉴定性别,取雌性胎鼠石蜡包埋,连续横断切片,每4张行1张HE染色,1张白片待用。HE染色后获取连续切片图像,根据雌性胚鼠生殖管道解剖走形,识别中肾旁管/子宫解剖定位。选取含有中段中肾旁管/子宫的白片,用SABC免疫组织化学方法,检测Wnt5a在不同发育时期雌性生殖管道的表达。结果获取含雌性生殖管道的鼠胚切片。同时检测到Wnt5a在孕15.5d到21.5d的雌性鼠胚中段中肾旁管/子宫上皮细胞、间质细胞均有表达,随着鼠胚发育,Wnt5a在间质细胞表达不断增强,差异在统计学上有极显著意义(P<0.01)。结论Wnt5a在雌性小鼠生殖管道形成过程中发挥作用,可能是诱导子宫发育及分化的关键因子。

shWnt5a重组慢病毒的制备及其对黑素瘤细胞侵袭的抑制作用

目的构建下调人Wnt5a基因表达的重组质粒并制备重组慢病毒,感染黑素瘤细胞后,观察其对该细胞侵袭的影响。方法构建下调人Wnt5a基因表达的重组质粒pLKO.1-shWnt5a,利用pLKO.1慢病毒包装系统和HEK293T细胞包装、制备携带shWnt5a的重组慢病毒颗粒,并感染WM793B黑素瘤细胞,建立稳定低表达Wnt5a的WM793BWnt5a-黑素瘤细胞株。采取细胞迁移与侵袭实验检测Wnt5a对黑素瘤细胞侵袭的影响。结果成功制备了携带shWnt5a的重组慢病毒,建立低表达Wnt5a的稳定转染细胞株WM793BWnt5a-,细胞迁移与侵袭实验证明抑制Wnt5a基因的表达可以显著抑制黑素瘤的侵袭能力。结论下调Wnt5a基因的表达对黑素瘤的侵袭能力有明显的抑制作用。

代谢正常肥胖人群血清sfrp5和Wnt5a变化及意义

目的探讨代谢正常肥胖(MHO)人群中分泌型卷曲相关蛋白5(sfrp5)及无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)的变化及临床意义,并探讨其与MHO的相关性。方法根据纳入标准选取研究对象150例,分为正常组(n=50)、MHO组(n=50)、肥胖伴代谢综合征(MS)组(n=50),采用酶联吸附法(ELISA)测定血清sfrp5及Wnt5a的浓度。结果与正常组比较,MHO组和肥胖伴MS组血清sfrp5浓度明显降低(均P<0.01),血清Wnt5a浓度、Wnt5a/sfrp5比值升高(均P<0.05)。与MHO组比较,肥胖伴MS组血清sfrp5浓度明显降低(P<0.01),血清Wnt5a浓度、Wnt5a/sfrp5比值升高(均P<0.05)。经相关和回归分析,血清sfrp5与HDL-C呈正相关性(r=0.283,P<0.01),与体质指数(BMI)、腰围、收缩压、舒张压、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2h PBG)、TG、TC呈负相关性(r=-0.454、-0.450、-0.355、-0.328、-0.199、-0.201、-0.353、-0.266,均P<0.05);血清Wnt5a与BMI、腰围呈正相关性(r=0.285、0.281,均P<0.01)。血清sfrp5的主要影响因素是BMI、2h PBG、TG。结论 MHO人群中血清sfrp5呈低水平状态、血清Wnt5a呈高水平状态,且两者的水平及Wnt5a/sfrp5比值均介于正常人群和肥胖伴MS人群之间,该人群代谢之所以正常,可能与这两种因子的保护作用有关,尤其是血清sfrp5。

wnt5a诱导心肌祖细胞向心肌细胞分化的作用研究

目的探讨wnt5a诱导心肌祖细胞CP15-5a向心肌细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒Ad-wnt5a和Ad-GFP;转染CP15-5a细胞后,设置wnt5a组、GFP组和空白对照组。采用流式细胞技术检测Ad-wnt5a和Ad-GFP的转染效率;1周后,通过实时定量PCR(q RT-PCR)检测经Ad-wnt5a诱导的CP15-5a细胞中心肌组织特异性转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌增强因子2C(MEF2C)的表达;2周后,通过Western blotting及免疫荧光技术检测经Ad-wnt5a诱导的CP15-5a细胞中心肌连接因子43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;全细胞膜片钳技术检测钠电流(I_(Na))表达。结果 Ad-wnt5a和Ad-GFP转染效率分别为42.8%、44.3%。腺病毒转染CP15-5a细胞1周后,wnt5a组GATA4和MEF2C基因的表达量(分别为1.717±0.220、1.847±0.190)较GFP组和空白对照组(GATA4:1.003±0.087、0.961±0.063,P<0.05;MEF2C:0.456±0.042、0.500±0.095,P<0.05)明显升高,而GFP组与空白对照组比较差异无统计学意义;腺病毒转染2周后,wnt5a组CX43和c Tn T蛋白的表达量(分别为1.597±0.267、0.727±0.100)较GFP组和空白对照组(CX43:0.723±0.047、0.783±0.1333,P<0.05;cTnT:0.217±0.021和0.253±0.102,P<0.01)明显升高,而GFP组与空白对照组比较差异无统计学意义。与GFP组及空白对照组比较,wnt5a组可检测出I_(Na)。结论 wnt5a可诱导心肌祖细胞CP15-5a向心肌细胞分化。

Wnt5a在胃癌的表达及其临床意义

目的:观察Wnt5a在胃癌中的表达及意义。方法:采用RT-PCR法检测Wnt5a基因在正常胃黏膜细胞GES-1及胃腺癌细胞SGC7901中的表达;应用Western-blot法测定GES-1细胞及SGC7901细胞Wnt5a蛋白的表达;运用免疫组化SP法观察60例胃腺癌及30例癌旁胃黏膜组织Wnt5a蛋白的表达,分析Wnt5a表达与胃癌临床病理参数间的关系。结果:Wnt5a基因与蛋白在SGC7901细胞中的表达高于GES-1细胞;Wnt5a在胃癌组织中的表达高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。淋巴结转移及TNM分期越晚的胃癌组织Wnt5a表达越高(P<0.05)。结论:Wnt5a与胃癌的侵袭和转移有关,在胃癌的发生发展中起癌基因样作用。

血浆外泌体样小体对巨噬细胞Wnt5A—Ca2＋通路影响的初步研究

目的研究血浆中外泌体（exosomes）样小体对正常人巨噬细胞免疫调节作用的影响。方法采用超速离心结合膜过滤的方法，从健康献血者血浆中分离纯化外泌体样小体。通过分离健康献血者外周血单个核细胞，贴壁培养并分离巨噬细胞。外泌体样小体与巨噬细胞共孵育后，采用流式细胞术、RT—PCR、Westernblot法分别检测巨噬细胞胞质Ca^2＋、相关基因和蛋白的变化。结果外泌体样小体与巨噬细胞孵育一段时间后，巨噬细胞胞质内Ca2＋平均荧光强度上调；外泌体样小体对巨噬细胞的促炎因子如IL-1β、IL-6、TNF-α的表达有促进作用，在共培养2h时，IL-1β、TNF-α基因表达达到高峰，分别比对照组表达上调0．85倍和1．69倍，而IL-6基因表达上调水平在共培养8h时达到高峰，是对照组的3．7倍，而对抑炎因子IL-10的表达具有抑制作用；同时发现巨噬细胞表达Wnt5A受体Frizzled5，但是外泌体样小体对其基因表达没有明显影响；外泌体样小体能使钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）发生磷酸化。结论血浆外泌体样小体能上调巨噬细胞炎症因子基因的表达，并且可能通过活化巨噬细胞的Wnt5A—Ca2＋信号通路促进炎性细胞因子的分泌。

Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的观察Wnt5a表达对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响。方法噻唑蓝(MTT)法检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞增殖活性的影响。克隆形成实验检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞单个细胞克隆形成能力的影响。Transwell实验检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响。结果MTT法实验显示,Wnt5a过表达的K1细胞在3、4d检测到的吸光度(A)值(0.403±0.003、0.562±0.005)均大于对照组(0.371±0.006、0.454±0.002),Wnt5a-小干扰RNA(siRNA)-2组A值(0.342±0.005、0.402±0.004)均小于对照组,差异有统计学意义(t=0.951、14.206、-6.431、-20.140,P=0.030、0.000、0.003、0.000)。Wnt5a过表达BCPAP细胞在3、4d检测到的A值(0.454±0.007、0.603±0.002)均大于对照组(0.403±0.006、0.493±0.002),Wnt5a-siRNA-2组A值(0.362±0.005、0.370±0.003)均小于对照组,差异有统计学意义(t=0.839、27.361、-9.092、-29.087,P=0.010、0.000、0.001、0.000)。平板克隆形成实验显示,过表达Wnt5a后,细胞株K1及BCPAP细胞克隆的形成数[(130.00±4.34)、(117.00±3.54)个]均明显高于对照组[(88.00±3.44)、(86.00±3.48)个],敲低Wnt5a后,K1及BCPAP细胞克隆的形成数[(50.00±3.45)、(47.00±4.01)个]均明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=13.136、10.816、-13.510、-12.253,P=0.000)。Transwell实验显示,过表达Wnt5a后,与对照组[(80.20±1.23)、(83.90±1.45)个]比较,细胞株K1及BCPAP每个高倍镜视野中穿过基底膜细胞数[(155.60±2.01)、(164.50±2.09)个]明显增多,差异均有统计学意义(t=-25.420、-24.881,P=0.000)。敲低Wnt5a后,与对照组比较,细胞株K1及BCPAP穿过基底膜细胞数[(50.80±1.02)、(52.30±1.08)个]明显减少,差异均有统计学意义(t=21.868、28.938,P=0.000)。结论过表达Wnt5a能够促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖、克隆和侵袭;敲低Wnt5a能够抑制细胞的增殖、克隆和侵袭。

肥胖及超重人群中血清Wnt5a水平与肝脏脂肪变和纤维化程度的相关性研究

目的探讨肥胖及超重人群中血清Wnt5a水平与肝脏脂肪变及纤维化程度的相关性。方法 134例在我院体检中心参加体检并在内分泌代谢科就诊,同时完成了瞬时弹性扫描仪(Fibroscan)检查的肥胖或超重患者,根据Fibroscan检测结果〔肝脏实时受控衰减参数(controlled attenuation parameter,CAP)评估肝脏脂肪变性程度,瞬时肝脏弹性测量值(elasticity,E)评估纤维化程度〕分为正常对照组(27例)、轻度非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)组(51例)和中重度NAFLD组(56例)。同时测量腰围(waist circumstance,WC)、臀围(hip circumstance,HC),进行糖耐量试验和胰岛功能试验,检测血清转氨酶、血脂等,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清Wnt5a和β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果对照组、轻度NAFLD组和中重度NAFLD组3组间年龄、性别、体质量指数(BMI)、WC、HC差异均无统计学意义(P>0.05)。3组间空腹及餐后2h血糖、空腹胰岛素水平和胰岛素抵抗指数差异有统计学意义(P<0.05),而餐后2h胰岛素水平差异无统计学意义(P>0.05)。轻度NAFLD组与对照组的CAP值、E值、血清Wnt5a和β-catenin水平相当,差异均无统计学意义(P>0.05)。中重度NAFLD组CAP值、E值和血清Wnt5a均高于对照组和轻度NAFLD组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示,血清Wnt5a水平与CAP值呈负相关(相关系数r=-0.19,P<0.000 1),与E值无显著相关关系(r=0.02,P=0.241)。结论血清Wnt5a水平与NAFLD有关,在肥胖或超重合并NAFLD的发病不同阶段可能起着不同的病理生理作用。

Wnt5a结肠腺瘤性息肉病基因和β-连环素在结直肠腺癌组织中的表达和意义

目的探讨Wnt5amRNA和蛋白、结肠腺瘤性息肉病基因（APC）和B-连环素（B—catenin）蛋白在结直肠腺癌组织中的表达及意义。方法应用实时定量PCR法，检测30例新鲜结直肠腺癌组织和配对的痛旁组织中Wnt5amRNA的表达。采用免疫组织化学sP法，检测62例结直肠腺癌和癌旁组织以及10例正常结直肠黏膜组织中Wnt5a、APC和B—catenin蛋白的表达情况，并分析Wnt5a、APC和B．catenin蛋白的表达与结直肠腺癌患者临床病理特征的关系。结果Wnt5amRNA在新鲜结直肠腺癌组织中的相对表达量为0．1232±0．0140，明显高于其在癌旁结直肠黏膜组织中的相对表达量（0．0497±0．0074，P=0．02）。Wnt5a蛋白在61．3％（38／62）的结直肠腺癌组织中低表达，在38．7％（24／62）的结直肠腺癌组织中高表达，其表达与肿瘤的组织学类型和分化程度有关（均P〈0．05）。APC蛋白住61．3％（38／62）的结直肠腺癌组织中低表达，其表达与肿瘤的组织学分犁有关（P〈0．05）。B—catenin蛋白在80．6％（50／62）的结直肠腺癌组织中呈胞质和（或）胞核的异位表达，其表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移、浸润深度以及TNM分期均有关（均P〈0．05）。在结直肠腺癌组织中，Wnt5a（r=0．271，P=0．027）和APC（r=0．343，P=0．004）蛋白的低表达均与B—catenin蛋白的异位表达相关，仉Wnt5a与APC蛋白的表达无关（r=0．218，P=0．078）。结论Wnt5a、APC和B—catenin基因可能参与了结直肠腺癌的发生和发展过程。在结直肠腺癌中，APC和Wnt5a蛋白的低表达可能是B-catenin蛋白异位表达的原因之一。

补肾舒脊颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞Wnt5a、β-catenin mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨补肾舒脊颗粒延缓异位骨化的可能作用机制。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为空白组、模型组、对照组及中药高、中、低剂量组。空白组加入基础培养基(3.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);模型组加入诱导培养基(4.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);西药组加入诱导培养基(3.8 ml)+5%洛索洛芬钠含药血清(0.2 ml);中药高、中、低剂量组分别加入诱导培养基(3.8 ml)+5%补肾舒脊颗粒含药血清(0.2 ml)。28天后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,对照组和中药各剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低,中药中剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);与中药低、中剂量组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组Wnt5a蛋白表达降低,中药高剂量组β-catenin蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。

Wnt5a在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨Wnt5a在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及意义。方法:收集术后病理确诊为PTC的患者石蜡标本47例,包括癌组织及癌旁组织,以及手术切除的PTC新鲜标本及其癌旁组织10例。分别采用免疫组化法及real-time PCR检测Wnt5a在PTC及癌旁组织中的表达。结果:47例患者的石蜡标本中,PTC及癌旁组织中,Wnt5a在PTC组织的阳性表达率为68.09%(32/47),在癌旁甲状腺组织为6.38%(3/47),两者间差异有统计学意义(P<0.01);统计分析显示,Wnt5a的表达与患者的性别及年龄无关(均P>0.05),而与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01)。10例手术标本检测显示,PTC中Wnt5a mRNA的表达明显高于其的癌旁甲状腺组织(6.43±1.38 vs.1.12±0.59,P<0.01)。结论:PTC组织中Wnt5a表达水平增高,这可能对PTC的发生和发展有着重要的作用。