Wnt/β-catenin信号通路的中药调控与创面愈合

创面愈合是由于外伤、糖尿病溃疡、压疮、感染和术后创面不愈合等多种因素导致的如表皮、真皮、肌肉、筋膜等局部组织的损伤,其愈合过程是一个复杂且动态的程序,涉及到多种细胞反应和周围微环境的相互配合。目前,创面发病率呈逐年增长的趋势,造成了全球范围内巨大的社会和经济负担,老龄人口中发生的慢性损伤随着年龄的增长而逐年攀升。当前,修复创面的药物种类及方法多样,一定程度上减轻了患者的生理、心理和经济社会压力。中药单体及复方制剂修复创面具有独特的优势和力量,引起社会各界广泛的关注及应用,Wnt/β-catenin是调节细胞增殖、分化及凋亡,高度参与创面修复,是皮肤损伤修复过程中最重要的经典信号通路之一。Wnt/β-catenin信号通路通过中药单体及复方制剂降低机体创面中蛋白激酶、炎症反应,促进血管新生和表皮干细胞等表达,对创面愈合的治疗具有重要的参考价值。本文复习国内外相关文献,对Wnt/β-catenin信号通路与创面的关系及中药单体和中药复方通过调控该信号通路影响创面愈合的机制进行归纳总结,为中药治疗创面损伤提供新的思路和方向。

督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响

目的观察督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠创面修复及核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/NADPH醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)信号通路的影响。方法选取50只SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组,每组10只。除假手术组外,其余4组借助压力装置构建压力性损伤大鼠模型。分组干预并记录各组大鼠的压力性损伤修复情况及创面组织病理变化;借助ELISA检测各组大鼠的血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6以及氧化应激因子丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;Western blot与RT-PCR检测各组大鼠创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及mRNA的表达水平。结果HE染色结果显示:假手术组皮肤结构未被破坏;模型组创面肉芽组织可见明显的细胞坏死、变性及炎性细胞浸润;干预各组可见创面修复,表现为散在炎性细胞浸润,“气球样”坏死变性明显减少。Masson染色结果显示:假手术组创面皮肤组织胶原纤维较为整齐;模型组创面肉芽组织可见大面积的胶原纤维沉积、紊乱;干预各组可见不同程度的创面修复。与假手术组对比,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平均升高(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平均下降(P<0.05);与模型组比较,水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均下降(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及m RNA的表达水平均升高(P<0.05),且联合干预组较其他干预组更优(P<0.05)。结论督脉隔药灸可有效促进压力性损伤的创面修复,与水凝胶多功能复合敷料联合使用效果更佳,其机制可能与督脉隔药灸抑制创面炎性反应及氧化应激,并激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路相关。

小檗碱调节HIF-1α/VEGF信号通路对皮肤溃疡大鼠血管生成和创面愈合的影响

目的:探究小檗碱(BR)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对皮肤溃疡大鼠血管生成和创面愈合的影响。方法:取SD大鼠采用创面局部多次涂抹冰醋酸建立皮肤溃疡模型,随机数字法分组,包括模型组(M组)、小檗碱低剂量组(BR-L组)、小檗碱高剂量组(BR-H组)、小檗碱高剂量+空载组(BR-H+pc-DNA组)、小檗碱高剂量+HIF-1α敲低组(BR-H+pc-HIF-1αKD组),每组10只,另选10只SD大鼠作为对照组(C组)。以药物分组处理3周后,测定各组大鼠创面愈合率;HE染色检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织病理形态;免疫组织化学染色检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织微血管密度(MVD)及胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)与纤维结合蛋白(FN)表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)各组大鼠血清及皮肤溃疡创面组织炎性因子IL-6、IL-8表达水平;免疫印迹法检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织HIF-1α/VEGF通路蛋白表达水平。结果:与C组相比,M组大鼠创面组织MVD、血清及创面组织IL-6、IL-8水平升高(均P<0.05)。与M组相比,BR-L组、BR-H组、BR-H+pc-DNA组大鼠创面愈合率、创面组织MVD、HIF-1α及VEGF蛋白表达均升高(均P<0.05),血清及创面组织IL-6、IL-8水平均降低(均P<0.05),且高剂量小檗碱作用更强。敲低HIF-1α可减弱BR对模型组大鼠各指标的作用。结论:小檗碱可通过上调HIF-1α/VEGF通路而降低炎性因子表达,抑制炎症,增强皮肤溃疡大鼠血管生成和胶原形成,促进其创面愈合。

乳腺熏洗方促进非哺乳期乳腺炎术后创面愈合网络药理学分析及临床验证

目的:采用网络药理学方法分析乳腺熏洗方促进非哺乳期乳腺炎(NPM)术后创面愈合的机制,并通过临床研究对关键通路进行验证。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索并筛选乳腺熏洗方的主要化合物成分和作用靶点,在人类基因综合分析数据库(Genecards)中查找与乳房创面愈合相关的共同靶点,将共同靶点输入STRING数据库,获得蛋白质相互作用(PPI)网络,再使用Cytoscape 3.10.10软件绘制PPI网络图。利用DAVID数据库和Metascap数据库对疾病-药物潜在靶点进行基因本体(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用蛋白质印迹法检测4例NPM术后患者治疗前后创面组织血管内皮生长因子(VEGF)、信号转导和转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达水平。结果:乳腺熏洗方促进乳房创面愈合共涉及101个靶点,关键靶点有基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)、细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子(TNF)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)]、黏附分子(ICAM-1)和信号转导蛋白(STAT3、MAPK)等,参与了包括VEGF、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、IL-17、AGE-RAGE、TNF等信号通路的调控。治疗后,NPM术后创面组织的VEGF、STAT3蛋白表达水平均较治疗前升高(P<0.05)。结论:乳腺熏洗方通过多途径、多靶点的协同调节,在促进NPM术后创面愈合方面具有明确作用。

肛瘘术后应用中医药治疗患者创面愈合相关信号通路及生长因子变化的临床现状分析

肛瘘一般难以自愈,手术是治愈该病的有效方法,但因肛瘘病变位置特殊,术后创面多为开放性,易引发一系列问题,增加患者痛苦。近年中医药治疗因费用低、疗效理想等优势已逐渐成为肛瘘术后促进创面愈合的主要方式。目前发现,部分中草药化合物的活性成分、中药复方制剂在促进肛瘘术后创面愈合有重要作用。通过检索发现,中医药可通过调控转化生长因子-β(TGF-β)/Smad、缺氧诱导因子1(HIF-1)、磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B(PI3K/Akt)、Hippo等信号通路等加速新生血管形成,促进肛瘘术后创面愈合。通过总结肛瘘术后应用中医药治疗患者创面愈合相关信号通路、生长因子变化及其作用机制,旨在为中医药治疗肛瘘术后患者的进一步研究提供依据。

糖尿病足溃疡的治疗与相关信号通路的研究进展

糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病最具威胁性的慢性并发症之一,严重损害了患者的生活质量及生命健康,是临床工作中亟待解决的重要问题。伤口愈合包括四个阶段的动态过程:止血、炎症、增殖和重塑,而在DFU的情况下,所有这些过程都受到干扰,导致愈合延迟,甚至下肢截肢。以往的研究主要在糖尿病周边动脉阻塞性疾病、神经病变和伤口感染三方面。而近年来,与糖尿病足溃疡创面愈合机制相关的信号通路已成为研究热点,目前已有研究显示部分药物或治疗方法通过不同的信号通路在伤口愈合中发挥作用。由于DFU治疗失败的发生率较高,且DFU的潜在分子机制仍不完全清楚,因此仍迫切需要去寻求治疗DFU的有效方法。该文主要针对DFU治疗相关的不同信号通路进行综述,包括PI3K/Akt通路、NF-κB通路、Nrf2通路以及其他相关信号通路,分别从炎症、增殖、免疫等方面进行介绍,从而阐明这些通路在糖尿病伤口愈合机制中的重要性,同时为糖尿病足溃疡创面的治疗提供新思路。

蕲艾挥发油通过PI3K/Akt信号通路促进感染性皮肤创口愈合的机制研究

目的观察蕲艾(Artemisia argyi Levl.et Van.var.argyi cv.Qiai)挥发油对感染性皮肤创口愈合的作用并探索其机制。方法将30只雄性昆明小鼠随机分为5组:空白对照组、膜剂基质组、阳性对照组(3 mL·kg^(-1)莫匹罗星软膏)、低剂量膜剂组(每贴含7.3 mg蕲艾挥发油)和高剂量膜剂组(每贴含57.6 mg蕲艾挥发油)。小鼠麻醉后在背部剪一直径10 mm的全层皮肤圆形伤口,止血后在创口处涂抹100μL金黄色葡萄球菌菌液(1.5×10^(8) CFU·mL^(-1)),各组采取前述方式处理伤口,每日换药并观察皮肤创面愈合情况。术后12 d处死小鼠取创面皮肤做HE和Masson染色,观察病理学特征;利用qPCR和Western blot检测创口皮肤组织愈合相关因子Col1a1、Col3a1、Fn1、VEGFA及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。在小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3利用PI3K抑制剂PI-103探究蕲艾挥发油对PI3K/Akt信号通路活性的潜在影响。结果动物实验表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的相对创口面积显著降低;创口组织的炎性细胞浸润减少,胶原纤维表达增加;qPCR显示,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的VEGFA、Col3a1和Col1a1 mRNA的表达显著上升,炎症因子IL-1β和TNF-αmRNA表达降低;Western blot结果表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量给药组的p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt比值均显著上升并呈现剂量依赖性。细胞实验结果也证实,蕲艾挥发油对NIH-3T3细胞的PI3K/Akt信号通路存在调控作用。结论蕲艾挥发油可促进创口愈合,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,抑制炎症因子表达及促进胶原表达有关。

氧化苦参碱水凝胶通过激活角化细胞Nrf2/HO-1通路促进创面愈合

背景:慢性创面炎症和氧化应激阻碍了角化细胞的再生,氧化苦参碱具有抗氧化、抗炎等多种生物活性,可能具有促进创面愈合的潜在效应。目的:探讨氧化苦参碱对创面愈合的作用,以及对H_(2)O_(2)诱导人角质形成细胞系HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:①体内实验:分别制备含0,0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的甲基丙烯酰化透明质酸(HAMA)水凝胶。在75只糖尿病小鼠背中部制作直径12 mm的全层皮肤缺损模型,随机分5组干预,每组15只:模型组创面包扎固定,单纯水凝胶组以HAMA水凝胶覆盖创面,低、中、高剂量氧化苦参碱组分别以含0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的HAMA水凝胶覆盖创面,光固化后包扎固定,14 d内进行相关指标的检测。②体外实验:将人角质形成细胞系HaCaT分5组培养,正常组常规培养,H_(2)O_(2)组及低、中、高浓度氧化苦参碱组均加入H_(2)O_(2)干预4 h,然后分别更换为含0,0.05,0.1,0.2 g/L氧化苦参碱的培养基,培养24 h后进行相关指标的检测。结果与结论:①体内实验:与模型组比较,单纯水凝胶组小鼠创面愈合率无明显变化,低、中、高剂量氧化苦参碱组治疗后7,14 d的创面愈合率升高(P<0.05)。治疗后14 d的创面样本切片病理观察显示,与模型组相比,中、高剂量氧化苦参碱组再生表皮层厚度、显微血管数量与胶原沉积均增加(P<0.05)。术后7 d的创面样本Western blotting检测显示,与模型组相比,中、高剂量氧化苦参碱组肿瘤坏死因子α与白细胞介素6的蛋白表达降低(P<0.05)。②体外实验:CCK-8检测、EdU及Ki67染色显示,与H_(2)O_(2)组相比,中、高浓度氧化苦参碱组细胞增殖能力明显升高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,中、高浓度氧化苦参碱组线粒体膜电位升高(P<0.05)、活性氧含量降低(P<0.05)。Western blotting检测显示,与H_(2)O_(2)组相比,高浓度氧化苦参碱组Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白、HO-1蛋白及超氧化物歧化酶1蛋白的表达增加(P<0.05)。③结果表明:氧化苦参碱能够通过上调Nrf2、HO-1蛋白减轻HaCat细胞的氧化应激损伤,加速创面愈合。

三七总皂苷对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及机制

目的探究三七总皂苷(PNS)调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及潜在机制。方法以SD大鼠为对象,采用大肠埃希菌液感染创面的方法复制肛瘘术后大鼠模型,并将其随机分为模型组,PNS低、高剂量组(15、30mg/cm2),PNS高剂量+2-甲氧基雌二醇(2ME2)组(PNS 30 mg/cm2+HIF-1α抑制剂2ME24 mg/kg),每组10只;另选10只正常大鼠,仅进行背部脱毛处理,作为对照组。各药物组大鼠肌内或(和)腹腔注射相应药液,每天1次,持续3周。末次给药后,检测各组大鼠的创面愈合率(对照组除外),创面组织微血管密度(MVD)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、纤维连接蛋白(FN)阳性表达情况,血清中血管生成相关因子[VEGF、血管生成素Ⅰ(Ang-Ⅰ)、Ang-Ⅱ]水平和血清、创面组织中炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-2]水平,以及创面组织中HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白的表达情况。结果模型组大鼠创面组织MVD及collagenⅠ、FN表达水平,血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较对照组显著升高(P<0.05),血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平均较对照组显著降低(P<0.05)。PNS低、高剂量组大鼠创面愈合率,创面组织MVD,血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平,创面组织中collagenⅠ、FN表达水平和HIF-1α、VEGF、VEGFR2蛋白的表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较模型组显著降低(P<0.05),且高剂量PNS的作用更强(P<0.05);2ME2可减弱PNS对肛瘘术后大鼠上述指标的改善作用(P<0.05)。结论PNS可促进血管生成相关因子产生并抑制促炎因子生成,从而促进肛瘘术后大鼠创面的愈合,上述作用与激活HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路有关。

紫花牡荆素对浅Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及机制研究

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探究紫花牡荆素(CAS)促进大鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组(生理盐水),模型组(5%羧甲基纤维素钠空白基质),CAS低、高剂量组(15 mL浓度为30、60 mmol/L的CAS药液),CAS高剂量+LY294002组[15 mL CAS药液(60 mmol/L)和PI3K抑制剂LY294002溶液(20μmmol/L)的混合溶液]和阳性对照组(厚涂京万红软膏0.5~1.0 cm),每组15只。除对照组外,其余各组均通过点燃皮肤表面混合烧伤燃料来构建浅Ⅱ度烧伤大鼠模型,并于烧伤后2 h内涂抹给药。给药28 d后,计算大鼠烧伤创面愈合率,观察大鼠烧伤创面中央组织病理变化,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)水平,检测大鼠烧伤组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的磷酸化水平。结果与对照组比较,模型组大鼠皮肤组织表皮层和真皮浅层损伤、愈合状态较差,存在炎症细胞浸润且组织结构不完整等情况;血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、MMP-2、MMP-9水平均显著升高(P<0.05),血清中VEGF水平和烧伤创面中央组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05);与模型组比较,CAS低、高剂量组大鼠上述病理变化及血清和烧伤创面中央组织中上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且CAS高剂量组上述指标的变化较CAS低剂量组更明显(P<0.05);PI3K抑制剂LY294002的加入可逆转CAS对大鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用(P<0.05)。结论CAS可促进大鼠浅Ⅱ度烧伤创面的愈合,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

富血小板血浆促进创面愈合的细胞和分子机制

背景:尽管富血小板血浆在促进创面愈合方面显示出治疗潜力,但其临床应用仍需要进一步的研究和验证。此外,对于富血小板血浆作用的机制仍存在一些争议和不确定性。目的:通过对富血小板血浆促进创面愈合的机制进行概述和分析,以增进对该治疗方法的理解,为未来的基础研究和临床应用提供有益的指导。方法:在中国知网、PubMed数据库检索2000年1月至2023年12月发表的相关文献。英文检索词为“platelet rich plasma,PRP,wound,wound healing,refractory wounds,chronic wounds,cellular and molecular mechanisms,signaling pathways,regenerative medicine”,中文检索词为“富血小板血浆,PRP,创面,伤口,创面愈合,难愈性创面,慢性创面,细胞和分子机制,信号通路,再生医学”。根据纳入和排除标准,最终对80篇文献进行综述。结果与结论:①富血小板血浆在创面愈合中具有许多潜在的优势,它能够提供丰富的生长因子和细胞因子等生物活性物质;②富血小板血浆可以调节参与创面愈合的各种细胞类型的功能,包括表皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、干细胞和炎症细胞等;③在富血小板血浆疗法中,细胞外囊泡、线粒体对于创面愈合可能扮演着重要角色;④负载富血小板血浆水凝胶可广泛用于增强组织再生和作为药物传递的功能性载体;⑤富血小板血浆对创面细胞外基质合成和降解起调节作用,从而影响伤口愈合过程中基质重建;⑥富血小板血浆可能通过动态调节多种信号通路和上皮间质转化来影响组织修复与再生,从而为创面愈合的研究提供了全新的视角。

β2肾上腺素受体通过TGF-β1/Smad3信号通路调控创面愈合中的纤维增生

目的探讨β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,ADRB2)在创面愈合过程中对纤维增生的调控机制。方法将12只小鼠背部皮肤随机注射非特异性敲减ADRB2基因的腺相关病毒(AAV-ADRB2组,n=6)和对照病毒(AAV-NC组,n=6)21 d后,在背部建立全层皮肤缺损创面愈合模型。记录术后第1、3、5、7天创面愈合率;采用H-E染色、Masson染色和免疫组化染色观察创面组织结构、纤维化程度及α-平滑肌肌动蛋白表达;定量PCR检测ADRB2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA水平;Western印迹法检测胶原纤维1A1、胶原纤维3A1、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果术后第5、7天,AAV-ADRB2组创面愈合率显著下降(P<0.05),伴随表皮增厚、炎症细胞增多、纤维细胞减少、胶原沉积降低;α-SMA水平显著下降(P<0.05);COL1A1/COL3A1比例减少(P<0.05);ADRB2 mRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-1和MMP-8 mRNA水平升高(P<0.01);TGF-β1/Smad3蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论ADRB2敲减通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少创面纤维化反应和结缔组织含量,提高MMP mRNA水平,降低Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例。

康复新液对糖尿病难愈合创面中AGEs、RAGE及HIF-1表达水平的影响

目的 应用康复新液干预治疗糖尿病难愈合创面,观察晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)、缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1, HIF-1)表达水平变化,初步探讨糖尿病难愈合创面中AGEs/RAGE通路与HIF-1的关系。方法 选取2020年1-12月宁波市北仑区人民医院收治的糖尿病足患者10例,在用药0、7、14、28 d时分别观察糖尿病患者创面的愈合情况,ELISA法检测不同用药时间后创面肉芽组织中羟脯氨酸的含量变化,体外培养人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells, HMVECs),随机分为对照组(常规培养)、AGE-HSA组(220 nmol/L AGE-HSA)和吡多胺+AGE-HSA组(220 nmol/L吡多胺+AGE-HSA),Western blot法检测创面组织和HMVECs中AGEs、RAGE、HIF-1α蛋白的表达。结果 在用药后7、14、28 d,糖尿病患者创面愈合情况良好,药物治疗有效率和羟脯氨酸含量均呈升高趋势,而AGEs、RAGE、HIF-1α蛋白表达呈下降趋势。与0 d比较,7、14、28 d创面肉芽组织中羟脯氨酸含量均显著升高(P<0.01),而AGEs、RAGE、HIF-1α蛋白表达水平均显著下调(P<0.05,P<0.01)。HMVECs的Western blot结果显示,与对照组比较,AGE-HSA组的AGEs、RAGE、HIF-1α蛋白的表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01),而吡多胺能显著抑制这种蛋白表达的上调(P<0.05,P<0.01)。结论 糖尿病难愈合创面的预后与AGEs、RAGE、HIF-1α的表达水平密切相关,且HIF-1α的表达可能与AGEs/RAGE信号通路的活化有关。

美洲大蠊鲜虫提取物对慢性难愈合创面组织中PI3K、Akt、mTOR、VEGF蛋白表达的影响

目的:探索美洲大蠊鲜虫提取物对慢性难愈合创面的疗效与机制。方法:用BALB-3T3细胞进行细胞增殖、划痕和transwell实验,免疫印迹法检测细胞上清液中PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达水平;构建大鼠慢性难愈合创面模型,在造模第0、4、8、12、15 d拍照记录创面,计算创面愈合率;每组随机抽取3只取材,用免疫印迹法检测组织中PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达水平。结果:美洲大蠊鲜虫提取物显著促进BALB-3T3细胞的增殖和迁移(P<0.01),且细胞上清液中VEGF蛋白表达量上升(P<0.05);与模型组比较,美洲大蠊鲜虫提取物高、中、低剂量组、康复新液组和急性创面组创面愈合率增加(P<0.05或P<0.01);蛋白免疫印迹结果显示,与慢性模型组比较,美洲大蠊鲜虫提取物胶浆剂高、中、低剂量组、康复新液组和急性创面组PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达量上升(P<0.05或P<0.01)。结论:美洲大蠊鲜虫提取物可促进BALB-3T3细胞的增殖和迁移,并上调PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达来促进慢性难愈合创面的愈合。

黄连素液通过影响NF-κB信号通路修复小鼠细菌感染皮肤创面的作用机制研究

目的探讨黄连素液通过影响核因子(NF)-κB信号通路修复小鼠细菌感染皮肤创面的作用机制。方法选取60只SPF级9周龄雄性C57BL/6J小鼠构建耐MRSA皮肤创面感染模型,将造模成功的50只小鼠随机分为模型组、阳性对照组以及黄连素液低、中、高剂量组,每组10只。分别于给药第3、7、14天计算各组小鼠创面愈合率并测定创面菌落数。给药结束后观察各组小鼠创面组织病理变化;检测各组小鼠创面组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。检测Toll样受体2(TLR2)、转化生长因子-活化激酶结合蛋白1(TAB1)、NF-κB p65的mRNA及蛋白表达。结果随黄连素剂量增加,模型组创面愈合率逐渐提升(均<0.05);菌落数逐渐减少(<0.05)。模型组淋巴细胞、中性粒细胞丰富,肉芽增生显著;低剂量组肉芽轻度增生,炎细胞轻度浸润;中剂量组无肉芽增生,炎细胞少量;高剂量组仅见少量中性粒细胞。随黄连素剂量增加,IL-6、TNF-α、MMP-2水平下降,VEGF水平上升,TLR2、TAB1及NF-Bp65的mRNA及蛋白表达逐渐降低(均<0.05)。结论黄连素液可能通过抑制TLR2/NF-κB信号通路激活,减轻小鼠MRSA感染皮肤创面组织炎症反应,进而促进创面愈合。

基于自噬途径的脐带间充质干细胞促进糖尿病模型创面愈合的作用机制

目的旨在从自噬途径HIF-1α/BNIP3/Beclin-1的角度,探讨脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对糖尿病大鼠创面愈合的促进作用及潜在机制。方法将大鼠随机数字表法分为空白组、模型组、MSC组、MSC^(HIF-1α)组和自噬抑制剂组(CQ组)。采用高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射诱导2型糖尿病模型。在大鼠背部做全层皮肤切除创伤以构建皮肤创面损伤模型。于创伤后计算创面愈合率。采用苏木精染色观察创面皮肤组织结构,采用Masson染色观察创面皮肤组织中胶原纤维沉积情况。采用免疫组织化学染色观察创面毛细血管新生情况。采用透射电镜观察创面组织细胞的自噬状态及超微结构。采用蛋白免疫印迹分析创面组织中HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、LC3蛋白的表达水平。结果与空白组相比,模型组创面愈合率、创面组织CD31阳性染色细胞比例,以及HIF-1α、BNIP3、Beclin-1蛋白表达以及LC3II/LC3I水平均明显减少(P<0.05),而创面完全愈合时间和瘢痕厚度均明显增加(P<0.05);与模型组相比,MSC组创面愈合率、创面组织CD31阳性染色细胞比例,以及HIF-1α、BNIP3、Beclin-1蛋白表达以及LC3II/LC3I水平明显增加(P<0.05),而创面完全愈合时间和瘢痕厚度均明显增加减少(P<0.05);与MSC组相比,MSC^(HIF-1α)组创面愈合率、CD31阳性染色细胞比例,以及HIF-1α、BNIP3、Beclin-1蛋白表达以及LC3II/LC3I水平均明显增加(P<0.05),而创面完全愈合时间和瘢痕厚度均明显减少(P<0.05);与MSC^(HIF-1α)组相比,CQ组创面愈合率、创面组织CD31阳性染色细胞比例,以及HIF-1α、BNIP3、Beclin-1蛋白表达以及LC3II/LC3I水平均明显降低(P<0.05),而创面完全愈合时间和瘢痕厚度均明显增加(P<0.05)。结论hUC-MSCs能够改善糖尿病大鼠创面组织损伤,促进肉芽组织生长和血管生成,加速创面愈合,其机制可能是通过调控HIF-1α/BNIP3/Beclin-1信号通路介导的自噬激活来实现。

西黄胶囊调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合的作用机制研究

目的观察西黄胶囊对非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路的影响。方法复制非哺乳期乳腺炎大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性药物组、中药治疗组、联合用药组,每组10只,另选取10只同批次SPF级健康SD大鼠作为假手术组。干预后观察并评估各组大鼠的创面愈合情况及乳腺炎症指数,HE染色法观察各组大鼠乳腺组织的病理改变;免疫组织化学法检测各组大鼠乳腺组织B淋巴细胞瘤-2基因关联X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X,BAX)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的平均光密度值;Western blot法及RT-PCR法检测各组大鼠乳腺组织IL-6、JAK2、STAT3、人胱天蛋白酶9(Caspase-9)蛋白及mRNA的表达水平。结果与假手术组大鼠比较,模型对照组大鼠的创面愈合率明显降低(P<0.05),而乳腺炎症指数,乳腺组织BAX、Bcl-2平均光密度值,IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。HE染色可见模型对照组大鼠乳腺腺叶存在明显的肉芽肿变性,周围充斥大量炎症细胞,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组大鼠的病理情况存在不同程度的缓解,炎性细胞浸润及肉芽肿组织明显减少,“空泡样”坏死存在不同程度的愈合。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的创面愈合率、Bcl-2光密度值均明显升高(P<0.05);其中联合用药组的创面愈合率、Bcl-2光密度值明显高于阳性药物组及中药治疗组(P<0.05);阳性药物组的创面愈合率高于中药治疗组(P<0.05),Bcl-2光密度值与中药治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的BAX光密度值、乳腺炎症指数均明显下降(P<0.05);其中联合用药组的BAX光密度值、乳腺炎症指数明显低于阳性药物组及中药治疗组(P<0.05);阳性药物组的乳腺炎症指数低于中药治疗组(P<0.05),BAX光密度值与中药治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的IL-6、JAK2、STAT3、Caspase-9蛋白及mRNA的表达水平均明显降低(P<0.05);其中联合用药组上述蛋白及mRNA表达水平明显低于阳性药物组及中药治疗组(P<0.05),而阳性药物组的上述蛋白及mRNA表达水平均明显高于中药治疗组(P<0.05)。结论西黄胶囊能有效促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型的乳腺组织创面愈合,抑制乳腺组织细胞凋亡及炎症反应,其作用机制可能与西黄胶囊抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路相关。

复方沙棘籽油加速大鼠肛周脓肿术后创面修复的作用机制研究

目的:探讨复方沙棘籽油加速大鼠肛周脓肿术后创面修复的作用机制。方法:取制备成功肛周脓肿术后创面SD模型鼠共50只,随机分为5组,分别为模型组(G1,给予蒸馏水);阳性对照组(G2,给予高锰酸钾);复方沙棘籽油纳米乳化液低剂量治疗组(G3);复方沙棘籽油纳米乳化液中剂量治疗组(G4);复方沙棘籽油纳米乳化液高剂量治疗组(G5);造模后各组实验大鼠创面用相应实验药物均匀涂抹,2次/d,连续给药14 d。观察治疗5 d、8 d、14 d后各组大鼠创面愈合情况,计算各组大鼠创面愈合率,分别取各组大鼠创面组织,应用免疫组化S-P法检测创面表皮生长因子(EGF)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、白细胞介素-8(IL-8)、前列腺素E2(PGE2)表达情况。结果:创面处理后5 d、8 d、14 d,G5组、G4组、G3组、G2组、G1组大鼠创面愈合率依次升高(均P<0.05)。术后14 d,大鼠创面IL-8表达水平为G2组<G5组<G4组<G3组<G1组(P<0.05);PEG2表达水平为G5组<G2组<G4组<G3组<G1组(P<0.05)。术后14 d,大鼠创面EGF、ERK1/2表达为G5组>G4组>G3组>G2组>G1组(均P<0.05)。结论:复方沙棘籽油纳米乳化液可有效促进大鼠肛周脓肿术后创面愈合,这可能与IL-8及PEG2炎症介质有关,还可能与EGF-ERK通路活化促进创面角质形成细胞、成纤维细胞生长、增殖、分化有关。

中医药治疗肛瘘术后创面愈合相关信号通路研究进展

肛瘘为肛肠科第二大疾病。由于现代饮食结构、生活习惯等的改变,肛瘘发病率不断升高。手术为目前公认根治肛瘘的唯一方式。但肛瘘术后创面愈合周期长,疼痛明显,容易感染。肛瘘术后创面难愈是肛瘘术后患者主要痛苦所在。部分患者可能会出现创面延迟愈合,反复感染,瘢痕严重挛缩等情况。肛瘘术后创面愈合情况是肛瘘治疗效果的重要指标之一。中医药在治疗肛瘘术后创面愈合上以其疗效好,患者痛苦少,治疗费用低等特点在临床上广受好评。目前发现部分中草药,中药复方,以及中草药化合物的有效成分能有效促进肛瘘术后创面愈合,其相关机制的研究也陆续开展。信号通路参与并连接了创面愈合的各个阶段,是肛瘘术后创面愈合病理机制,药物药理研究的主要靶点之一。通过检索发现中医药可通过调控磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B(phosphoinositide3-kinese/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路、Hippo信号通路、缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)信号通路、TGF-β/Smad信号通路等通路,减轻炎症反应,促进新血管生成,加速创面纤维化,促进肛瘘术后创面愈合,改善创面愈合质量。文章归纳了中医治疗肛瘘术后创面愈合相关信号及其作用机制,旨在为中医药治疗肛瘘术后创面愈合的进一步研究和探索提供理论参考以及新的思路与方向。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨益气生肌合剂对慢性难愈性创面大鼠模型修复愈合的影响及作用机制

目的 观察益气生肌合剂对慢性难愈性创面大鼠模型创面修复愈合的影响,并探讨其作用机制。方法 将50只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药物组(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶)、中药组(益气生肌合剂)、联合用药组(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶+益气生肌合剂),共5组,每组10只。建立慢性难愈性创面大鼠模型,空白对照组仅同手术部位置入磁性装置不予施加压力,其余各组予不同方式干预。观察各组大鼠创面愈合情况,苏木精—伊红染色观察各组大鼠创面病理情况,酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清白细胞介素-2(interleukin 2,IL-4)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin 10,IL-10)细胞因子的表达水平,蛋白质印迹法及实时定量PCR检法检测创面组织Wnt/β-catenin信号通路的关键因子Wnt3a、β-catenin、Wnt5a、GSK-3β等蛋白及mRNA的表达情况。结果 (1)除模型对照组外,其余各组创面均呈现不同程度的愈合趋势,创面组织病理明显缓解;(2)与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清IL-4、IL-1β、IL-10水平与创面组织Wnt3a、β-catenin、Wnt5a、GSK-3β的蛋白及mRNA表达水平明显增加(P<0.05);(3)与模型组比较,阳性药物组、中药组、联合用药组大鼠血清IL-4、IL-1β、IL-10水平,创面组织Wnt3a、β-catenin、Wnt5a、GSK-3β的蛋白及mRNA表达水平明显下降(P<0.05),其中联合用药组下降程度最大(P<0.05)。结论 益气生肌合剂能有效促进慢性难愈性创面大鼠模型创面修复,同时与重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶联合使用起到协同增效作用,其作用机制可能与益气生肌合剂能够抑制Wnt/β-catenin信号通路并减少该信号通路相关蛋白表达相关,使慢性难愈性创面由炎症期向增殖期过渡,从而促进创面修复愈合。