1例伴神经性耳聋的Werner综合征患者WRN基因突变研究

目的:检测1例伴神经性耳聋Werner综合征患者的WRN基因突变情况。方法:收集1例伴神经性耳聋Werner综合征患者及其亲属的外周血标本,提取其外周血总RNA进行RT-PCR,将cDNA产物测序;提取患者外周血基因组DNA进行PCR,将DNA产物测序验证突变,以同样方法检测其1例亲属及30例健康对照。结果:患者WRN基因发现4处碱基改变:内含子2967+237 A>G和3309+26C>T、同义突变c.2361 G>T和c.3237 G>A。结论:该例伴神经性耳聋Werner综合征患者存在WRN基因2个内含子SNP和2个已报道cSNPs。

苯代谢物氢醌对K562细胞WRN基因转录及表达的影响

目的探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞K562中解旋酶WRN基因mRNA转录及蛋白表达的影响。方法常规培养白血病细胞K562至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以15、30、60μmol/L浓度HQ重复间隔染毒48及72 h,以等体积的PBS培养的细胞组为空白对照组。采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测WRN基因mRNA水平,采用免疫印迹分析WRN基因蛋白表达水平,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效应随染毒浓度增加而增大,72 h比48 h的DNA损伤程度增加,呈时间-剂量依赖性;(2)HQ染毒48 h,WRN基因mRNA在各组差异均无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),低、中剂量组与高剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与中剂量组组间差异无统计学意义(P>0.05);(3)HQ染毒48 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较,蛋白表达随着染毒剂量增大而降低,差异有统计学意义(P<0.05),HQ各剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HQ可导致K562细胞DNA损伤,且呈时间-剂量依赖性,其机制可能与HQ下调WRN基因mRNA转录及蛋白的表达有关。

中国人群WRN基因多态性与脑膜瘤的关联研究

目的探讨Werner(WRN)基因与中国人群脑膜瘤发病风险的关联。方法对215例病理确诊的脑膜瘤病人和219例健康人,采用Snapshot方法对4个多态性位点(rs3024239、rs2725364、rs1800392、rs1801195)进行基因分型,比较脑膜瘤与健康人群之间WRN基因不同位点基因频率分布差异,并根据性别、年龄及病理亚型进行分层分析。结果 rs3024239多态性位点与内皮型脑膜瘤发病关联,rs3024239位点携带等位基因C的人群内皮型脑膜瘤的发病风险较低(P=0.015)。余3个位点多态性与脑膜瘤无明显相关性(均P>0.05);4个位点基因多态性与不同年龄与性别的脑膜瘤人群的发病风险无明显相关(均P>0.05)。结论中国人群中WRN基因多态性可能与脑膜瘤的发病风险具有相关性,rs3024239位点等位基因C能降低内皮型脑膜瘤的发病风险。

氢醌HQ对K562细胞WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响

目的:探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响。方法:K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低(15μmol/L)、中(30μmol/L)、高(60μmol/L)剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养。MTT比色法检测细胞存活率;重亚硫酸盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测细胞WRN基因甲基化水平;FQ-PCR法检测DNMT1基因的m RNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT1基因的蛋白表达情况。结果:(1)MTT结果显示,细胞存活率随着HQ染毒浓度增加而下降(P=0.000)。(2)BSP检测结果显示,低、中、高剂量HQ组甲基化率与对照组比较,差异有统计学意义(χ~2=7.50,P=0.048)。(3)与对照组比较,低、中、高剂量HQ组DNMT1基因m RNA及蛋白表达量呈下降趋势(P=0.000)。结论:HQ染毒K562细胞可引起WRN基因甲基化水平增高,同时下调DNMT1基因的表达。

伴神经性耳聋的Werner综合征1例国内首报

目的探讨Werner综合征的临床表现及诊断,提高对Werner综合征的认识。方法报告1例伴神经性耳聋的Werner综合征,并进行相关的文献复习,详细分析该病的组织起源、临床表现、鉴别诊断、治疗及预后等,完善患者各系统筛查和实验室检查。结果各系统筛查结果提示患者多组织发育不良或加速退行性变。其临床表现复杂,伴有神经性耳聋等,但无糖尿病及白内障,临床诊断为伴神经性耳聋Werner综合征。结论伴神经性耳聋的Werner综合征较为罕见,目前国内未见报道,该病极易误诊,应对Werner综合征相关基因进一步筛查研究。

电镜下衰老背景小鼠p21功能缺失胃窦细胞的观察研究

目的了解衰老背景以及衰老背景下小鼠p21功能缺失胃窦细胞线粒体形态改变,探讨衰老背景下小鼠p21功能缺失胃癌易感的发生机制。方法小鼠端粒酶和wrn基因同时敲除(mTerc-/-wrn-/-)并在后代(G4)表现稳定的衰老表型,取同代同龄的野生型(WT)、衰老以及衰老背景下p21功能缺失的雄鼠各15只,获得胃窦组织进行透射电子显微镜观察细胞线粒体形态。结果 WT、衰老以及衰老背景下p21功能缺失的小鼠胃窦细胞线粒体异常率分别是13.3%、53.3%和93.3%。结论衰老背景下p21的功能缺失导致胃窦细胞线粒体发生明显的形态异常,由此可能促进癌变的风险。