螺内酯对实验大鼠肝组织TGFβ1、PDGF-BB及α-SMA表达的影响

目的 探讨螺内酯预防肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠 90只 ,随机分为 3组。正常对照组 (8只 ) :正常饮食 ,皮下注射花生油 ;模型组 (42只 ) :复合因素制成肝纤维化模型 ;螺内酯预防组 (40只 ) :造模方法同模型组 ,螺内酯 10 0mg·kg- 1·d- 1灌胃。分别于第 2周、4周、6周、8周末随机处死 8只大鼠 ,取肝组织用免疫组化法检测各组肝组织内转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子 (PDGF BB)及α 平滑肌动蛋白 (α SMA)含量。结果 螺内酯预防组TGFβ1、PDGF BB及α SMA在肝组织中的表达均较模型组明显减少 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。 结论 螺内酯可通过降低TGFβ1、PDGF

CTGF反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成的抑制效应

目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介导转染CFs,并与血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 10 -6mol/L共培养 4 8h ,采用MTT法测CFs生长数目 ,羟脯氨酸法测胶原蛋白含量 ,RT -PCR法及Westernblotting法分别测CTGFmRNA及蛋白水平的表达。结果 :AngⅡ可以在mRNA及蛋白水平明显促进CFsCTGF的表达 (P <0 . 0 1) ,且呈浓度 -时间依赖性。CTGF反义链组的MTT反应A值、胶原蛋白含量、CTGFmRNA及蛋白水平的表达量均明显低于AngⅡ组 (P <0. 0 1) ,而CTGF正义链组和错义链组与AngⅡ组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :AngⅡ刺激下产生的CFsCTGFmRNA和蛋白水平的表达上调 ,可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节 ,CTGF反义寡核苷酸可以序列特异性地阻断CTGF的介导 ,从而抑制AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的诱导作用 ,进一步证实CTGF可能是拮抗心肌纤维化的特异性靶位。

碱性成纤维细胞生长因子对缺血后脑组织新生神经元的影响

目的研究脑缺血再灌流后海马齿状回神经元发生水平的动态变化及外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法采用5-溴脱氧尿核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记有丝分裂、免疫组织化学的方法观察大鼠全脑缺血再灌流后海马齿状回神经元发生的动态变化以及在侧脑室注射外源性bFGF对神经元发生变化的影响。结果大鼠全脑缺血-再灌注损伤后第14天齿状回神经元发生水平达到峰值。全脑缺血-再灌注损伤大鼠侧脑室注射外源性bFGF后齿状回神经元发生水平升高,神经元发生峰值时间提前。结论脑缺血可以诱导齿状回神经元发生水平上调,外源性bFGF能促进齿状回神经元发生。

抗VEGF抗体及抗KDR抗体对人胃癌生长的抑制作用

目的:观察抗VEGF及抗KDR抗体对胃癌生长和转移的抑制作用。方法:1)将不同浓度的抗VEGF及抗KDR抗体分别加入胃癌BGC-823细胞,培养5天后测细胞活性(MTT法)。2)采用原位种植裸鼠模型,观察抗VEGF抗体及抗KDR抗体的作用。实验分为4组:对照组,抗VEGF组,抗KDR组及抗VEGF+抗KDR组。自肿瘤种植后第7天起,经腹腔注射连续给药8周,每周2次,第10周末处死裸鼠,测定肿瘤重量和肝转移状况,计数微血管密度。结果:1)抗VEGF抗体和抗KDR抗体浓度由高至低对BGC-823细胞生长的抑制作用减弱。2)抗VEGF抗体和抗KDR抗体对原位肿瘤生长有明显抑制作用,两者合用时作用更明显;对照组肝转移率80.0%,而抗VEGF组、抗KDR组和二者合用组分别为16.7%、25.0%、0,与对照组相比其它3组的微血管密度(MVD)明显为低。结论:通过中和VEGF抗体和封闭KDR受体抑制血管形成,可能为胃癌的治疗提供一个新的途径。

纳米磁粒靶向VEGF基因治疗闭塞性血管病的实验研究

目的 创立一种新的基因治疗闭塞性血管病的方法 ,并验证其有效性及安全性。方法 应用乳化复合技术将纳米级磁粒与pcDNA3 VEGF1 6 5合成磁粒基因复合微球。选取中国大耳白兔 2 0只 ,随机分组建立血管闭塞模型。造模后 10d于对侧股动脉插管至髂动脉开口处注入磁粒基因复合微球 ,同时造模肢体外加磁场。分别于治疗前及治疗后 30d行血管内造影。治疗后 30d处死动物取标本 ,染色后显微镜下观察。结果 血管造影X线片可见治疗组造模后第 4 0天有大量新生血管形成 ,新生血管由髂内动脉向股浅动脉远断端方向生长 ,将二者连通 ,并且原有股浅动脉分支形成的侧支循环也大量开放。缺血肢体大腿中部肌肉组织在治疗后 30d微血管密度 :对照组为(12 5± 2 3) mm2 ,治疗组为 (2 98± 2 7) mm2 ,P <0 .0 1;微血管数和肌纤维数二者比率 :对照组为 0 .4 2± 0 .0 4 ,治疗组为0 .83± 0 .0 3,P <0 .0 1,均有显著差异。结论 纳米磁粒靶向VEGF基因治疗兔闭塞性血管病疗效显著 ,安全可靠。

利用基因芯片技术研究造血生长因子在脐静脉内皮细胞中的表达

为探讨利用基因芯片技术研究脐静脉内皮细胞中造血生长因子基因的表达情况 ,将体外培养的人脐静脉内皮细胞 (ECV30 4 )分为血管内皮生长因子 (VEGF)处理组 (添加 5 0ng ml的rhVEGF16 5 )和正常对照组 ;培养 2 4小时后收获细胞 ,提取总RNA ,制备Cy3 dUTP标记的对照组cDNA探针和Cy5 dUTP标记的VEGF组cDNA探针 ,并与表达谱芯片杂交。杂交信号经荧光共聚焦显微镜扫描后 ,计算机分析基因表达情况。结果显示 ,两组细胞均表达多种造血生长因子及受体如Epo R、GM CSF R、G CSF R、LIF、IL 3、TPO、Flt 3和SCF ;同时也表达多种生长因子 (VEGF、IGF2、PDGFA、PDGFB、TGFβ1)和生长因子受体 (神经纤维黏蛋白 1,神经纤维黏蛋白 2 ,TGFβ R1) ;此外 ,共有 2 4个基因存在差异表达。结论 :利用基因芯片技术能够在短时间内迅速而准确地分析脐静脉内皮细胞众多造血生长因子及其受体的表达情况 。

缺氧诱导因子-1与肿瘤血管生长

缺氧诱导因子- 1(HIF- 1)是调节缺氧反应基因的一个核转录因子,由α和β两种亚基组成,在肿瘤血管生长、转移中起重要的作用。本文就HIF -1的结构和功能与活性调节及参与信号转导作用等方面的研究进展作一综述。

环孢菌素A联合造血细胞因子治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效

目的探讨环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法采用环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗难治性贫血(MDS-RA)患者19例,定期观察患者外周血象和骨髓细胞形态学、并随诊观察远期疗效。结果19例患者治疗后总有效率为73.7%(14/19),全部病例未见严重副作用,未发现向白血病转化的病例,治疗后骨髓细胞形态学未见改变。结论环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗MDS-RA疗效可靠。

黄芩苷对脑小血管病模型大鼠认知功能及脑内血管内皮生长因子和内皮抑素表达水平的影响

目的:探讨黄芩苷对脑小血管疾病模型大鼠认知功能及脑内血管内皮生长因子(VEGF)和内皮抑素(ES)表达的影响,阐明其作用机制。方法:采用同种系微栓子体外注入法复制脑小血管疾病大鼠模型,共48只,造模成功后大鼠随机分为模型组、低剂量(50mg·kg^-1)黄芩苷组和高剂量(100mg·kg^-1)黄芩苷组,每组16只,并以假手术大鼠作为对照组(n=16)。造模后次日开始给药,各组大鼠分别于制模7、14和28d 时采用Morris水迷宫实验检测学习记忆功能。采用RT-PCR法和蛋白印迹法检测大鼠脑组织中VEGF和ESmRNA和蛋白表达水平,HE染色观察各组大鼠大脑海马组织形态表现,免疫组织化学法检测各组大鼠大脑海马组织中VEGF和ES蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠7、14和28 dMorris水迷宫逃避潜伏期明显延长(P<0.01),穿越平台次数明显减少(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,低和高剂量黄芩苷组大鼠7、14和28dMorris水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),穿越平台次数明显增加(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠大脑组织中VEGF mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),ESmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,低和高剂量黄芩苷组大鼠大脑海马区VEGF mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05或P<0.01),ES mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可使脑小血管疾病模型大鼠逃避潜伏期缩短,病理改变减缓,对脑组织认知功能起到修复作用,且可降低脑组织中VEGF表达水平,增加ES表达水平,对脑组织起到保护作用。

重组人生长激素对青春发育后期特发性矮小患儿的促生长效应及血清IGF-1、IGFBP-3的检测意义

目的探讨重组人生长激素(rhGH)对青春发育后期特发性矮小(ISS)患儿的促生长效应及血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的检测意义。方法对40例青春发育后期ISS患儿进行rhGH治疗,于治疗前及治疗6个月时测定身高、体质量及骨龄,治疗1及6个月时抽血测定IGF-1和IGFBP-3水平。结果治疗6个月后生长速度(GV)、按年龄的身高标准差积分(HtSDSCA)、按骨龄的身高标准差积分(HtSDSBA)及预测终身高(PAH)均较治疗前增高(均<0.01)。治疗1及6个月后血清IGF-l水平均较治疗前明显升高(均<0.05),治疗前后血清IGFBP-3水平差异无统计学意义(>0.05)。治疗前的血清IGF-1与治疗6个月后的△GV呈负相关(=—0.39,<0.05),治疗1个月后△IGF-1与治疗6个月时的生长指标△GV、△HtSDSCA及△HtSDSBA均呈正相关(=0.42、0.38、0.33,<0.05)。结论青春发育后期ISS患儿接受rhGH治疗是安全的,疗效是肯定的,血清IGF-1可以作为判断和预测GH对青春发育后期ISS患儿疗效的指标。

胃癌组织smad_4基因和转化生长因子β1及其受体的表达及意义

目的研究胃癌组织中smad4mRNA、转化生长因子β1(TGFβ1)、转化生长因子β1受体(TGFβR1)的表达特征及其意义。方法常规石蜡包埋切片行smad4mRNA原位杂交染色及TGFβ1、TGFβR1免疫组织化学染色。结果smad4mRNA、TGFβ1、TGFβR1在胃腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中阳性率无明显差异;组织学分级Ⅰ级、癌细胞未浸润至深肌层和淋巴结未转移的组织smad4mRNA、TGFβ1、TGFβR1阳性率明显高于组织学分级Ⅲ级、癌细胞浸润至深肌层或浆膜层和淋巴结转移组织,差异均有显著或非常显著性意义;smad4mRNA、TGFβ1、TGFβR1在胃癌中表达密切相关。结论smad4mRNA、TGFβ1和TGFβR13者表达与胃癌发生发展、生物学行为和预后可能有关,可作为重要的生物学标记物。

系统性红斑狼疮患者CCR7^+CD8^+CD45RO^+T细胞诱导CD4^+T细胞向Th2分化

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CCR7+CD8+CD45RO+记忆性T细胞对CD4+T细胞的诱导分化作用及其与SLE发病的关系。方法流式细胞仪、实时定量RT-PCR和RNA印迹检测同系CCR7+CD8+CD45RO+T细胞和树突细胞协同刺激CD4+T细胞分泌细胞因子。结果活动期SLE患者CCR7+CD8+CD45RO+记忆性T细胞诱导CD4+T细胞表达Th2类细胞因子:白介素4的表达效率显著高于正常人对照组和非活动期SLE患者组(P<0.01),1型调节性T细胞(Tr1)源性细胞因子:白介素10和转化生长因子β的表达效率均低于正常对照组和非活动期SLE患者组(P<0.01);而活动期和非活动期SLE患者干扰素γ的表达效率显著低于正常人对照组(P<0.01)。结论活动期SLE患者外周血CCR7+中央型记忆性T细胞可与树突细胞相互作用,诱导同系CD4+T细胞向Th2分化,发挥CCR7-CD45RO+效应性记忆性T细胞的功能。

骨生长相关因子对兔骨膜细胞生长分化的量效作用

目的 研究地塞米松 (dexamethasone)、重组人碱性成纤维细胞生长因子 (recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfator,rhFGF)、重组人骨形态发生蛋白 -2 (recombinanthumanbonemorpho geneticprotein -2 ,rhBMP -2 )三种骨生长相关因子对兔骨膜细胞生长及分化的量效作用 ,为其在骨组织工程中的应用提供实验基础。 方法 体外分离培养兔骨膜细胞 ,分别与终浓度为 10 - 8,10 - 7,10 - 6 mol/L的地塞米松 ;终浓度为 50 ,2 0 0 ,50 0ng/ml的rhFGF ;终浓度为 50 ,50 0 ,10 0 0ng/ml的rhBMP -2共培养。分别于 4,7d后终止培养并测定细胞生长及分化指标。 结果 10 - 6 mol/L地塞米松显著抑制细胞蛋白合成 ,且对骨膜细胞碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)表达无明显影响。各浓度组rhFGF显著促进了细胞蛋白合成量 ,而表现出明显的ALP活性抑制。各浓度组rhBMP -2对细胞增殖无明显影响 ;50ng/ml的rhBMP -2不影响骨膜细胞的ALP活性 ;当浓度增加到 50 0ng/ml与 10 0 0ng/ml时 ,ALP活性显著增加 (P <0 .0 1)。 结论 rhBMP -2在不影响骨膜细胞增殖的前提下 ,适当的浓度能够显著促进骨膜细胞向成骨细胞转化 。