食品中大肠杆菌O157的PCR检测与wzy基因的测序分析

大肠杆菌O157:H7和O157:H-是重要食品致病菌。从食品中分离得到一株O157:H7菌株EC5。将该菌株PCR扩增wzy基因全长并克隆测序。结果表明,wzy基因序列与大肠杆菌O157:H7标准株EDL933有100%同源性。从NCBIGenBank数据库下载O157菌株wzy基因序列,针对保守序列设计引物并扩增O157菌株和非O157菌株。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因。本研究为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。

猪链球菌wzy基因与血清型别的相关性分析

目的分析wzy基因序列与血清分型相关性,评价基于wzy基因的基因组水平血清分型的可行性。方法建立了33个已知血清型(1～31,33与1/2型)及21种新型cps型别(NCL1～20与Chz型)的wzy基因的氨基酸序列数据库,用来检索公开发表的767个有传统血清分型结果的基因组序列,以确定它们的分子血清型别,并与其用传统血清分型结果进行比对。结果 767个基因组中,有765个基因组含有1种且仅含有1种数据库中的wzy基因,剩余的2个基因组携带数据库中没有的wzy基因,本研究中将其cps型别命名为NCL21。94.13%(722/767)基因组的分子血清型别与其传统血清分型结果一致。在二者结果有差异的基因组中,其cps基因簇的核苷酸序列与其传统血清分型结果相应的血清型标准菌株cps序列有明显的差异。结论基因组水平检测血清型特异性的wzy基因的分型策略,显著优于传统的血清分型方法。

小麦WZY2基因RNA干扰表达载体的构建及遗传转化

【目的】利用基因枪将WZY2基因RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri导入"郑引1号"小麦,获得WZY2基因表达缺失型小麦,为深入分析WZY2基因功能奠定基础。【方法】以植物表达载体pAHC25为基础,构建含有反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri,利用基因枪将其转入"郑引1号"小麦幼胚愈伤组织中,经过筛选、PCR检测得到阳性植株。【结果】从转化的1 500个愈伤组织中获得27株再生植株。利用PCR对再生植株进行检测,获得阳性植株3株,转化率为0.2%。【结论】构建了WZY2基因的RNA干扰表达载体,成功地将WZY2基因RNA干扰表达载体导入"郑引1号"小麦,获得阳性植株。