双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染

目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。 方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区 ,再克隆入pcDNA3,构建成 pcDNA3 KN F1F2真核表达质粒 ;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株 ,进行G4 1 8筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBVDNA。 结果 :(1 )成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒 pcDNA3 KN F1F2及含双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;(2 )对两质粒成功进行细胞转染后 ,测得第 3、6、1 4天细胞培养上清液中HBVDNA均高表达 ,两质粒之间差别不明显。 结论 :构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌 ;

X基因缺失的乙型肝炎病毒转基因鼠中的病毒复制

已知乙型肝炎病毒(HBV)X基因高度保守,体外实验表明X基因的产物对于HBV复制和病毒体输出并不重要,但在体内是否如此尚不清楚。作者构建了两种末端延长的HBV基因组结构用于建立转基因小鼠,一种与以前用于建立HBV转基因小鼠的结构和序列相同,另一种X基因阅读框架中发生一个从C到T的突变。

肺癌产生化疗抗性之成因

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／10／16）报道，约翰霍普金斯的科学家Shyam Biswal发现detox基因缺失如何导致肺癌的患者对于化疗产生抵抗性。这个基因编码的蛋白质为NRF2，可以保护细胞免受环境污染物的伤害，例如香烟和汽车的烟雾，并有助于细胞排出这些污染物。另外有一种基因KEAP1编码的产物，可以阻止这个细胞自清的过程停止，但是肺癌细胞会破坏这些基因表现，并阻断化疗药物的攻击。