内质网应激相关因子X-盒结合蛋白-1在人体肝癌组织中的表达

目的研究内质网应激(ERS)相关因子X-盒结合蛋白(XBP)-1在肝癌组织中的表达情况,以此证实肝癌演进中是否存在ERS反应的活化。方法病理学诊断确定的45例肝癌组织、15例癌旁组织和15例正常肝组织,采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测XBP-1 mRNA和蛋白表达。结果 RT-PCR结果表明,肝癌组织中XBP-1 mRNA表达(0.444 6±0.035 7)显著高于癌旁组织(0.421 8±0.033 8)、正常肝组织(0.402 7±0.026 9)(P<0.05)。Western印迹结果表明肝癌组织中XBP-1蛋白的表达量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05)。结论肝癌发生及发展过程中存在ERS反应的激活。

内质网应激前后肝癌细胞中C/EBP同源蛋白及X-盒-结合蛋白-1的表达

目的:观察内质网应激(ERS)标志蛋白X-盒-结合蛋白-1(XBP-1)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在正常肝细胞及不同分化程度肝癌细胞中的表达。方法:将培养获得的正常肝细胞LO2、高分化肝癌细胞株Hep G2及低分化肝癌细胞株SMMC-7721细胞分为无水乙醇未处理组(ERS前组)和无水乙醇处理组(ERS组),ERS组的3种细胞分别给予无水乙醇处理获得ERS细胞模型;采用Western Blot方法检测3种细胞ERS前后XBP-1、CHOP表达。结果:在ERS前组中,XBP-1表达从高到低依次为LO2、Hep G2、SMMC-7721;ERS组中,XBP-1在3种细胞中的表达都上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),增加量从高到低依次为SMMC-7721、LO2及Hep G2,3种细胞间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);ERS前后,Hep G2细胞中均无CHOP表达;ERS前组中,CHOP表达高低依次为SMMC-7721、LO2;ERS组中,CHOP在LO2细胞及SMMC-7721细胞表达均上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),而在SMMC-7721细胞中表达上调更明显(与LO2细胞比较,P<0.05)。结论:发生ERS后,LO2、Hep G2及SMMC-7721细胞中XBP-1的表达水平都升高,分化程度低的SMMC-7721细胞中的XBP-1及CHOP的表达升高更明显。

不同时程吗啡依赖对雄性大鼠睾丸GRP94和XBP-1表达的影响

目的观察内质网应激标志性分子GRP94和XBP-1在不同时程吗啡依赖大鼠睾丸组织中的动态表达,以探究吗啡依赖对生殖系统的影响。方法建立吗啡戒断、消退及点燃大鼠模型后,利用定量PCR(RTPCR)技术和蛋白免疫印迹(Western blot)技术分别检测睾丸组织中GRP94和XBP-1 mRNA或蛋白的表达水平。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与NS对照组比较,吗啡依赖大鼠戒断48 h后,其睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01);经17 d的戒断,大鼠对吗啡依赖消退后,GRP94和XBP-1表达水平均有所升高(P>0.05);大鼠对吗啡依赖消退后,于31 d给予吗啡进行复燃,GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)。吗啡依赖大鼠睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平在戒断48 h后最高,消退时有所降低(P<0.01),而点燃后水平又有所上调(P<0.05)。结论吗啡依赖与睾丸内质网应激标志性分子GRP94及其XBP-1通路的激活密切相关,为吗啡依赖患者生殖系统损伤的修复提供更多的理论依据。

萝卜硫素对心肌缺血再灌注损伤大鼠IRE-1/XBP-1通路及心肌凋亡的影响

目的探究萝卜硫素(SFN)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌凋亡及肌醇需求酶1(IRE-1)/X-盒结合蛋白-1(XBP-1)通路的影响。方法实验分为假手术组、模型组、SFN组、STF-083010组、SFN+STF-083010组五组,每组10只。冠状动脉左室支结扎前2 h,SFN组尾静脉注射5 mg/kg SFN,STF-083010组腹腔注射30 mg/kg STF-083010,SFN+STF-083010组在SFN组基础上腹腔注射30 mg/kg STF-083010,假手术组、模型组尾静脉和腹腔注射等体积生理盐水。除假手术组外,其余各组冠状动脉左室支结扎大鼠,假手术组仅打开胸腔暴露出心脏穿丝线而不结扎。TTC染色检测心肌梗死情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织形态学情况;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达;免疫印迹法检测心肌组织中IRE-1、p-IRE-1、XBP-1蛋白表达。结果模型组心肌细胞排列紊乱,细胞膜破坏严重,细胞核部分散落在外;SFN组心肌细胞排列紊乱部分缓解,见少量细胞核散落;STF-083010组心肌细胞排列紊乱,细胞核散落严重;SFN+STF-083010组细胞排列恢复正常,排列整齐。与假手术组比较,模型组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,caspase3、BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平升高(P<0.05),BCL2 mRNA水平降低(P<0.05);与模型组比较,SFN组、STF-083010组、SFN+STF-083010组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,caspase3、BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平降低(P<0.05),BCL2 mRNA水平升高(P<0.05);分别与SFN组、STF-083010组比较,SFN+STF-083010组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平降低(P<0.05);与STF-083010组比较,SFN+STF-083010组caspase3 mRNA水平降低(P<0.05),BCL2 mRNA水平升高(P<0.05)。结论SFN通过抑制IRE-1/XBP-1通路缓解MIRI大鼠的心肌凋亡,从而实现对MIRI的保护。

姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤时内质网应激的影响

目的:探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤(RIRI)时内质网应激(ERS)的影响。方法:选取清洁级SpragueDawley(SD)雄性大鼠96只,采用随机数字表法分为3组(n=32):对照组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)和姜黄素组(CUR组)。I/R组和CUR组采用前房灌注法使眼内压升高而制备大鼠RIRI模型,缺血60 min,再灌注24 h后结束实验。于缺血前60 min时,CUR组腹腔注射姜黄素100 mg/kg,C组和I/R组腹腔注射等容量生理盐水。各组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,光镜下观察病理学改变;采用TUNEL法检测视网膜组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,电镜下观察大鼠视网膜组织超微结构改变。3组于再灌注24h时处死8只大鼠,取视网膜组织,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)、活化的转录因子4(ATF4)和X-盒结合蛋白-1(XBP1)mRNA表达。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠视网膜组织中、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值。结果:与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显上调(P<0.05);与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显下调(P<0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均下降,与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),CUR组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均升高,与I/R组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织出现形态结构及超微结构损伤,AI值升高(P<0.05)。与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织形态结构及超微结构损伤均减轻,AI值降低(P<0.05)。结论:姜黄素可减轻大鼠RIRI,其机制可能与抑制ERS介导的细胞凋亡有关。

小果博落回的化学成分及苯菲啶生物碱的xbp1转录激活作用评价

采用溶剂提取、萃取粗分离和硅胶柱色谱纯化等天然药物化学研究手段,从罂粟科植物小果博落回的根中除得到部分已报道的苯菲啶型生物碱外,又进一步分离得到8个化合物。通过深入的波谱分析并参考文献数据鉴定其结构分别为1-氧代-2,22（30）-何帕二烯-29-羧酸（1）、3-氧代-12-齐墩果烯-30-羧酸（2）、3α-羟基-12-齐墩果烯-30-羧酸（3）、3β-羟基-12-齐墩果烯-30-羧酸（4）、阿魏酸（5）、阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷（6）、3-O-阿魏酰奎尼酸（7）和3-O-阿魏酰奎尼酸甲酯（8）。其中1为新的何帕烷型三萜类化合物,2~8为首次从该植物中分离得到的化合物。为寻找具有潜在抗溃疡性结肠炎活性的天然药物活性物质,本文采用特异的体外靶向xbp1高通量双荧光素酶报告基因药物筛选模型,对小果博落回所含主要成分进行了xbp1转录激活作用评价。实验结果首次阐明了二氢型苯菲啶生物碱类化合物,即二氢血根碱（9）和二氢白屈菜红碱（10）,具有一定的xbp1转录激活作用,其作用强度分别为空载体对照组的1.76倍和1.77倍。

截叶铁扫帚中黄酮类成分研究

运用硅胶柱色谱、中压液相色谱、制备液相色谱等多种色谱技术,对截叶铁扫帚70%乙醇提取物进行了分离纯化。从中分离得到了5个黄酮类化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定为7-O-glucosyllaburnetin(1)、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(2)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(3)、牡荆素(4)和异牡荆素(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2和3均为首次从截叶铁扫帚中分离得到。采用体外靶向xbp1高通量双荧光素酶报告基因药物筛选模型,对截叶铁扫帚所含主要成分进行了xbp1转录激活作用评价,结果发现化合物1具有一定的xbp1转录激活作用,其作用强度为空载体对照组的1.80倍。