东亚和南亚固有绵羊群体X-蛋白等位基因特有频率分布的研究

本研究利用单向水平板淀粉凝胶电泳以我国5个固有地方绵羊品种包括湖羊（Hu）、同羊（Tong）、滩羊（Tan）、小尾寒羊（Han）、洼地羊（WD）为研究对象对X-蛋白遗传多样性进行了检测，并引用我国周边国家、地区绵羊品种为分析背景。结果表明以喜马拉雅山脉为界的亚洲东部和南部的北部群体和南部群体在编码的X（＋）型的显性等位基因X频率上存在极显著差异（P〈0．01）。北部检测的群体中X等位基因频率范围为0～0．18，平均值为0．0878，包括属于藏羊和蒙古羊系统的小尾寒羊（Han）、不丹羊（Bhutan）、同羊（Tong）、湖羊（Hu）、滩羊（Tan）、洼地绵羊（WD）、Bhyanglung绵羊（Bhy）、Baruwal绵羊（Bar）、云南绵羊（Yunnan）、哈拉和林绵羊（Kh）和乌兰巴托绵羊（Ub）。南部检测的群体中X等位基因频率范围为0．2037～0．4655，平均值为0．3082，包括属于印度绵羊系统的孟加拉国绵羊（Ban）、Kagi绵羊（Kagi）、Lampuchhre绵羊（Lamp）、越南占部落绵羊（Cham）和缅甸绵羊（Mya）。本研究揭示X等位基因可作印度绵羊的标记，在绵羊群体尤其是亚洲东部和南部绵羊系统形成的研究中具有潜在的重要作用。

从包涵体中高效纯化HBx-蛋白

目的获得具有生物学活性的重组ＨＢｘ－蛋白。方法经ＴＮＦＭＸ缓冲液清洗表达的包涵体，再将 此包涵体变性，复性后，经亲和层析，分步洗脱、收集。结果获得大量高纯度的ＨＢｘ－蛋白，ＨＢｘ－该蛋白的纯度和回 收率分别达到９６％和２８％。结论此方法具有较好的纯化效果，也可应用于其他重组蛋白的制备。

X-射线修复交叉互补蛋白5在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的分析X-射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)在脑胶质瘤(brain glioma,BG)中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法利用癌症基因图谱(TCGA)数据库的RNA测序数据分析XRCC5在636例BG[468例低分级脑胶质瘤(LGG),168例多形性胶质母细胞瘤(GBM)]与正常脑组织的表达差异,比较XRCC5表达水平与年龄、性别、病理分级、生存期以及肿瘤增殖相关抗原67(MKI67)表达水平的相关性。对BG组织芯片(47例LGG、75例GBM及3例正常脑组织)进行XRCC5免疫组化染色,进一步验证XRCC5表达水平与BG病理分级的关系。结果TCGA分析结果显示,XRCC5在BG组织中的表达水平高于正常脑组织(P<0.001),在GBM组的表达水平高于LGG组(P<0.001);XRCC5表达水平与BG病理分级呈正相关(P<0.001),与MKI67表达水平呈正相关(P<0.001);XRCC5高表达组生存期长于低表达组(P<0.001);不同性别、不同年龄段XRCC5表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);XRCC5的免疫组化染色结果显示,肿瘤组织中XRCC5表达水平高于正常人脑组织(P<0.05)。结论XRCC5在BG组织中升高,且与恶性肿瘤的生物标记物MKI67呈正相关。XRCC5表达越高,患者的预后越好,生存期越长。

X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

X-盒结合蛋白1的生理及病理生理学作用

X-盒结合蛋白1(XBP-1)是未折叠蛋白反应的重要组分,有剪接型XBP-1(XBP-1S)和非剪接型XBP-1(XBP-1U)两种形式。当细胞处于内质网应激状态时,XBP-1由活化转录因子6(ATF6)诱导,经IRE1α非传统剪接,转录有功能的XBP-1S,活化未折叠蛋白反应。XBP-1是一种重要的转录因子,对细胞生长和分化具有重要调控作用,并与人类多种疾病的发生和发展相关。

内质网应激相关因子X-盒结合蛋白-1在人体肝癌组织中的表达

目的研究内质网应激(ERS)相关因子X-盒结合蛋白(XBP)-1在肝癌组织中的表达情况,以此证实肝癌演进中是否存在ERS反应的活化。方法病理学诊断确定的45例肝癌组织、15例癌旁组织和15例正常肝组织,采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测XBP-1 mRNA和蛋白表达。结果 RT-PCR结果表明,肝癌组织中XBP-1 mRNA表达(0.444 6±0.035 7)显著高于癌旁组织(0.421 8±0.033 8)、正常肝组织(0.402 7±0.026 9)(P<0.05)。Western印迹结果表明肝癌组织中XBP-1蛋白的表达量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05)。结论肝癌发生及发展过程中存在ERS反应的激活。

X-连锁凋亡抑制蛋白与肿瘤关系的研究进展

凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein．IAP）是一类在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族，它们能够对抗各种凋亡诱导因素，抵抗细胞凋亡。X-连锁凋亡抑制蛋白（X—linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是IAP家族中最有效的caspase抑制物，近年来发现XIAP在肿瘤中高表达，与肿瘤的分化程度及预后有关。已成为肿瘤基因治疗的新靶点和研究热点。本文就XIAP与肿瘤关系的研究进展作一综述。

脑缺血缺氧后X-连锁凋亡抑制蛋白的表达及黄体酮的干预研究

目的观察脑梗死大鼠脑缺血半暗带脑组织内x-连锁凋亡抑制蛋白的表达情况，并观察黄体酮治疗对其表达水平及神经细胞凋亡的影响，以进一步探讨黄体酮神经保护作用的机制。方法选择成年雄性S-D大鼠102只，质量为260～310g，随机分为假手术组、模型组、溶剂治疗组、黄体酮治疗组。分别于脑梗死12h、24h、48h3个时间点处死大鼠，取出脑组织，应用免疫组化染色、Westernblot技术检测各组大鼠缺血半暗带内X-连锁凋亡抑制蛋白的表达情况；应用原位末端标记法检测脑组织细胞的凋亡情况。采用单因素方差分析对上述结果进行统计学分析，取α／=0．05为检验水准。结果脑梗死发生后，缺血半暗带内X-连锁凋亡抑制蛋白的表达水平较假手术组有所增高，经黄体酮治疗后，其表达水平明显升高，与模型组、溶剂治疗组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），黄体酮治疗组凋亡细胞数明显减少，与模型组、溶剂治疗组比较，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论黄体酮可减少脑梗死大鼠缺血半暗带内的脑细胞凋亡，提高脑组织中X-连锁凋亡抑制蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。

X-连锁无丙种球蛋白血症合并关节炎3例并文献复习

目的:探讨X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)合并关节炎的临床特点和治疗转归。方法:分析3例XLA合并关节炎患儿的临床表现、治疗经过及转归,并进行文献复习。结果:3例患儿1岁后开始反复呼吸道感染,4岁后出现关节炎,2例以关节炎为首发症状;主要累及膝、腕、髋、骶髂关节等大关节。免疫球蛋白均显著降低,CD19<2%。1例关节腔穿刺提示为化脓性炎症,1例穿刺液检查正常,1例行膝关节镜检查显示为化脓性滑膜炎。关节X线检查可见关节肿胀,1例关节MRI显示滑膜增厚并关节积液。3例患儿基因诊断均存在Bruton’S酪氨酸激酶基因突变。3例患儿予静脉丙种球蛋白(IVIG)联合布洛芬治疗,1例规则治疗后患儿关节功能恢复,2例不规则治疗,1例关节未发生进一步损害,1例关节屈曲畸形。结论:XLA合并关节炎的发生率较高,关节炎可能与感染有关;早期、规则IVIG治疗可有效控制临床症状,不规则治疗可能影响预后。

内质网应激前后肝癌细胞中C/EBP同源蛋白及X-盒-结合蛋白-1的表达

目的:观察内质网应激(ERS)标志蛋白X-盒-结合蛋白-1(XBP-1)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在正常肝细胞及不同分化程度肝癌细胞中的表达。方法:将培养获得的正常肝细胞LO2、高分化肝癌细胞株Hep G2及低分化肝癌细胞株SMMC-7721细胞分为无水乙醇未处理组(ERS前组)和无水乙醇处理组(ERS组),ERS组的3种细胞分别给予无水乙醇处理获得ERS细胞模型;采用Western Blot方法检测3种细胞ERS前后XBP-1、CHOP表达。结果:在ERS前组中,XBP-1表达从高到低依次为LO2、Hep G2、SMMC-7721;ERS组中,XBP-1在3种细胞中的表达都上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),增加量从高到低依次为SMMC-7721、LO2及Hep G2,3种细胞间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);ERS前后,Hep G2细胞中均无CHOP表达;ERS前组中,CHOP表达高低依次为SMMC-7721、LO2;ERS组中,CHOP在LO2细胞及SMMC-7721细胞表达均上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),而在SMMC-7721细胞中表达上调更明显(与LO2细胞比较,P<0.05)。结论:发生ERS后,LO2、Hep G2及SMMC-7721细胞中XBP-1的表达水平都升高,分化程度低的SMMC-7721细胞中的XBP-1及CHOP的表达升高更明显。

重组人促红细胞生成素对大鼠癫痫持续状态X-连锁凋亡抑制蛋白的影响及作用机制的实验研究

目的观察重组人红细胞生成素(r Hu EPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的SD大鼠海马神经元的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002,观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的变化情况,进一步探讨r Hu EPO作用的可能机制。方法采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为正常对照组(生理盐水,NS)、PTZ组(PTZ+NS)、r Hu EPO组(PTZ+r Hu EPO)、LY294002组(PTZ+LY294002+r Hu EPO)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(PTZ+DMSO+r Hu EPO),检测大鼠行为学和脑电图(EEG)的改变及苏木精-伊红染色观察海马病理学的改变;免疫组织化学法观察磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马XIAPm RNA的表达,Western blot方法检测各组大鼠海马Akt、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果 PTZ点燃大鼠SE后下调了p-Akt、XIAP的表达;r Hu EPO可以增加p-Akt、XIAP的表达,发挥神经保护作用;加入PI3K抑制剂LY294002,海马p-Akt、XIAP蛋白、XIAPm RNA的表达较r Hu EPO组减少,减弱了r Hu EPO的保护作用。结论从正反两个方面佐证了PI3K/Akt信号通路是r Hu EPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是r Hu EPO活化PI3K/Akt通路后,对线粒体凋亡途径的相关调控因子XIAP的表达进行了调控,进而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。

X-连锁无丙种球蛋白血症3例报告并文献复习

目的分析X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的临床表现、诊断和治疗特点。方法回顾性分析3例XLA患儿的临床特点、细胞免疫、体液免疫指标及治疗和预后。结果 3例XLA患儿的发病年龄自11个月至6岁,中位诊断年龄为12岁。患儿均表现为多发反复细菌感染;关节炎症累及膝、踝、肘和髋等大关节。实验室检查提示血清免疫球蛋白水平及循环B细胞明显降低。3例患儿均发现存在BTK基因突变,分别为外显子3的移码突变及无义突变,外显子10的移码突变,以及外显子18的错义突变。确诊为XLA后予静脉滴注丙种球蛋白(IVIG)替代治疗;合并关节炎加用非甾体类抗炎药物(NSAIDs),酌情加用小剂量激素,病情得到明显改善。结论 XLA临床表现具有较大的变异性,反复不同部位的细菌感染,扁桃体、淋巴结发育不良及血清免疫球蛋白水平低下是早期诊断XLA的重要环节;XLA合并关节炎使用IVIG和NSAIDs联合治疗,谨慎使用激素或免疫抑制剂。

X-连锁凋亡抑制蛋白通路与神经系统疾病

X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是重要的内源性凋亡抑制因子,通过抑制不同的半胱天冬酶等多种途径而发挥抗凋亡作用。许多神经系统疾病的发生与发展涉及细胞凋亡机制,XIAP在细胞凋亡机制中扮演着一个重要角色。

X-连锁无丙种球蛋白血症合并幼年特发性关节炎

目的 探讨X 连锁无丙种球蛋白血症 (XLA)合并幼年特发性关节炎 (JIA)的临床表现、诊断和治疗的特点。方法与结果 3例患儿在婴幼儿期即开始发生反复感染 ,随后出现关节炎症表现 ,之后反复多次发生关节炎症和关节外感染。关节炎症累及膝、踝、肘和髋等大关节 ,个别伴有肝脏肿大。实验室检查 :血清丙种球蛋白明显低下 ,外周血B细胞缺如。确诊为XLA后予静脉滴注丙种球蛋白 (IVIG)和非甾体类抗炎药物(NSAIDs) ,病情得到迅速控制 ,关节未发生进一步损害。结论 用IVIG和NSAIDs治疗XLA合并的JIA ,可有效控制JIA的临床症状。谨慎使用激素或免疫抑制剂。

2例小儿X-连锁高免疫球蛋白M血症病例分析

目的总结小儿X-连锁高免疫球蛋白M血症(XHIM)的临床特点及诊治要点。方法回顾性分析2例XHIM患儿的临床特点、基因诊断及治疗过程。结果病例1患儿男,生后反复皮肤感染、口腔溃疡、肛周蜂窝织炎,伴右膝关节活动受限,多次本院及外院就诊血常规结果提示患儿血白细胞中性粒细胞百分比偏低,维持在11%~30%,绝对值低于正常值,免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)减少,免疫球蛋白M(IgM)升高及CD19+B细胞,三次在不同部位不同时间脓液培养出铜绿假单胞菌,予抗感染及丙种球蛋白静脉滴注后好转;送检免疫Panel基因检测结果提示患儿CD40LG基因的一个半合变异c.776T>C(p.L259P),该患儿母亲为杂合状态,父亲为正常,确诊为XHIM。病例2患儿男,反复发热、重症肺炎、口腔溃疡,肠镜提示回肠末端增生性病变,肠黏膜病理示小灶糜烂及出血、微脓肿形成,基因测序分析发现其CD40LG基因半合变异c.714dupT(p.V239Cfs*5),母亲为杂合状态。上述两例患儿均定期于本院行丙种球蛋白替代治疗,暂未出现感染性疾病。结论XHIM是原发性免疫缺陷病,以反复感染、IgM水平升高为特征,基因诊断是其诊断金标准。

X-染色体连锁的凋亡抑制蛋白对新生小鼠脑缺氧缺血后细胞色素C释放的影响

目的探讨X-染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)对未成熟脑缺氧缺血(HI)后细胞色素C从线粒体释放的影响。方法新生9日龄转基因XIAP过度表达C57BL/6小鼠(XIAP组)及同期野生型9日龄C57BL/6小鼠(野生组)在HI后不同时间点处死取脑,部分脑组织进行手工匀浆后差速离心分离胞浆和线粒体成分进行Western蛋白印迹,部分脑组织进行细胞色素C免疫组化染色。结果Western蛋白印迹显示,HI后24h缺血侧脑组织线粒体中细胞色素C的含量较对侧减少,而胞浆中细胞色素C的含量较对侧增加(细胞色素C从线粒体释放);XIAP组脑组织线粒体中细胞色素C释放量明显少于野生组。免疫组化结果显示HI后3h、24h,XIAP组大脑皮层和海马CA1区细胞色素C阳性细胞数明显低于野生组。结论XIAP过度表达可抑制HI后细胞色素C从线粒体向胞浆的释放。

X-连锁无丙种球蛋白血症3例报告

例1男,5岁,天津蓟县人。因左膝关节肿痛半年于2001年5月21日入院。入院半前年患儿出现左膝关节疼痛,不肿,影响活动,夜间疼痛重,不伴有发热、皮疹及其他关节疼痛,家长未予重视。入院前4个月左膝关节轻微肿胀,外院诊为＂关节炎＂,未正规治疗;入院前2个月左膝关节肿胀明显加重,影响行走及下蹲，故来我院就诊。

X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白与口腔鳞癌细胞Tca8113化疗耐药的关系

目的研究X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达水平,并探讨XIAP表达与Tca8113细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法用平阳霉素(PYM)间歇性加药,逐步递增剂量,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测药物处理前后细胞对PYM的敏感性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测XIAP在药物处理前后的各Tca8113细胞组中的表达变化,并探讨XIAP与细胞耐药性的关系。结果Tca8113细胞在PYM间断作用下产生耐受,Tca8113-1-10组、Tca8113-10-10组耐药细胞对PYM的半数有效浓度(IC50)分别为(12.758±0.030)、(18.986±0.150)μg·mL-1。Tca8113-1-20、Tca8113-10-20组耐药细胞对PYM的IC50分别为(26.302±0.072)、(35.294±0.115)μg·mL-1。XAIP的表达水平与细胞对PYM的耐药有相关性(P<0.01)。结论XIAP在口腔鳞癌中的表达水平升高,可能与鳞癌的化疗耐药性有关,这可作为口腔鳞癌基因治疗的一个新靶点。

HAX-1调控人宫颈癌Hela的细胞增殖

目的探讨造血细胞特异性蛋白1(HS-1)相关蛋白X-1(HAX-1)对宫颈癌Hela细胞增殖的调控作用。方法以人宫颈癌Hela细胞系为研究模型,采用脂质体介导法将HAX-1 siRNAs和阴性对照siRNA转染Hela细胞并构建HAX-1沉默细胞系(HAX-1沉默组),以HAX-1高表达质粒和pcDNA3.1空载质粒转染Hela细胞并构建HAX-1过表达细胞系(HAX-1过表达组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测转染后Hela细胞中HAX-1的表达情况;EdU试验检测转染后的细胞增殖能力;MTT试验检测转染后的细胞活力;流式细胞术检测HAX-1对转染后Hela细胞周期和细胞凋亡的变化;RT-qPCR检测转染后Ki-67、c-Myc、BCL-2/BAX基因的表达水平。结果沉默HAX-1后,Hela细胞中HAX-1 mRNA和蛋白质的水平显著降低,而过表达HAX-1后,Hela细胞中HAX-1 mRNA和蛋白质的水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达HAX-1后,HAX-1过表达组中EdU阳性细胞数目下降,细胞活力降低,G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,细胞凋亡率上升,增殖相关基因Ki67表达降低,BCL-2/BAX基因显著降低(P<0.05),而HAX-1沉默组则具有相反的表现。结论HAX-1的表达抑制了Hela细胞增殖,并通过BCL-2/BAX途径诱导其凋亡。