液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的应用比较

[目的]比较液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的临床应用效果,并探讨液相蛋白芯片应用于临床检验的可行性。[方法]分别用液相与固相蛋白芯片方法检测45例临床送检样本的AFP、CA125、CA242及CEA,对两种方法的操作步骤、有效检测范围、参考临界值及检测结果进行比较。[结果]与固相蛋白芯片相比,液相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的操作至少节省1h,标本用量节省80μl,线性范围至少增大1倍;两种方法检测AFP、CA125、CA242及CEA的参考临界值相同,阴阳性判断结果的符合率分别为97.78%(44/45)、86.67%(39/45)、88.89%(40/45)、86.67%(39/45)。统计学分析表明两种方法检测的阴阳性结果无明显差异。[结论]液相蛋白芯片检测多肿瘤标志物具有操作简便、标本用量少、线性范围广、准确度高的优点,可推广应用于临床检验。

液相蛋白芯片技术及其在中医药研究中的应用

以荧光微球为载体基质且有别于固相蛋白芯片的液相蛋白芯片技术,是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析及蛋白质一蛋白质相互作用等研究,可广泛应用于生物医学包括中医药研究的各个领域。液相蛋白芯片具有灵活性好、灵敏度高、操作简单、通量大等特点,可进行细胞因子、激酶、肽类等的检测,并可用于中药复方和单体的药理学研究及有效方药和成分的筛选。

液相蛋白芯片检测三种肿瘤标志物反应模式的建立及方法学评价

目的建立用液相蛋白芯片检测人血清三种肿瘤标志物的反应模式，并对其进行方法学评价。方法将癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和总前列腺特异性抗原（tPSA）的包被抗体分别交联于不同荧光编码的微球上，并自行制备生物素标记抗体和抗原标准品，建立双抗体夹心反应模式，评价液相蛋白芯片的检测范围、最低检测限、精密度等指标；将检测结果与化学发光免疫分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）进行相关性分析。结果CEA、AFP、tPSA的线性范围分别为0．063～200、0．052—66．6、0．008～10ng／ml；最低检测限分别为31．3、13．0、5．2pg／ml；批内变异系数（cv）为6．2％～9．1％，批间CV为7．5％-13．5％；检测100（109）份临床血清标本的灵敏度为96．2％～98．2％，特异度为97．7％～98．2％，准确度为97％-98％；液相蛋白芯片与CLIA及TRFIA结果均呈明显正相关，P均〈0．001。结论液相蛋白芯片检测多种肿瘤标志物具有线性范围广、灵敏度高、重复性好、操作简便、标本用量少等优点，具有临床应用潜力。

基于液相蛋白芯片的多指标同时检测方法诊断营养状况异常的性能评价

目的:对基于液相蛋白芯片的多指标同时检测方法在诊断营养状况异常时的联合诊断性能进行评价。方法:使用免疫比浊法对25份人血清的血清铁蛋白(SF)进行检测,分别使用液相蛋白芯片和酶联免疫法对血清中SF、转铁蛋白受体(sTfR)、C反应蛋白(CRP)和前白蛋白(PA)4项指标进行检测;采用配对比较t检验或Wilcoxon匹配符号秩和检验对不同检测方法结果的一致性进行比较;采用配对卡方检验对不同检测方法诊断能力进行比较;计算不同检测方法的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、约登指数及Kappa值等真实性与可靠性指标,并对液相蛋白芯片法联合诊断营养指标异常的真实性与可靠性进行评价。结果:液相蛋白芯片法与其他方法之间在诊断铁缺乏、CRP异常及PA重度缺乏时具有等效的诊断能力。铁缺乏的判断中,液相蛋白芯片法与免疫比浊法的诊断真实性与可靠性相同,灵敏度均为40.00%、特异度均为85.00%、阳性似然比均为2.67,阴性似然比均为0.71、约登指数均为0.25、Kappa值均为0.45;CRP异常的判断中,液相蛋白芯片法的特异度和阴性似然比分别为100.00%和0.50,优于酶联免疫法的96.00%和0.00;对PA重度缺乏判断时,液相蛋白芯片法的特异度为100.00%,阴性似然比为0.14,约登指数为0.86,Kappa值为0.70,分别优于酶联免疫法的50.00%,0.00,0.50和0.62。结论:在评价营养状况时,液相蛋白芯片法的联合诊断性能基本与免疫比浊法、酶联免疫法分别检测所获得结果的联合诊断性能等效,其具有更进一步开展应用的可能。

建立检测禽流感病毒抗体的液相蛋白芯片方法

本实验通过液相蛋白芯片技术(Flexible Multi Analyte Profiling,xMAP)建立了一种禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)抗体检测方法。主要包括蛋白抗原性分析、xMAP检测方法的优化、特异性分析、灵敏性分析和临床样本检测等内容,研究结果表明所选用的流感病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP蛋白)抗原性良好,通过对蛋白包被浓度的优化初步建立了检测禽流感病毒抗体的xMAP方法。经过验证该方法特异性良好,与其他禽病原抗体无交叉反应。xMAP灵敏度高于ELISA方法。批内及批间变异系数均在10%以内,稳定性好。检测临床样品与ELISA试剂盒检测的符合率为100%。综上,本研究成功建立了一种检测AIV抗体的xMAP方法。

Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达

目的研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响。方法收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidinBeads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性。结果①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低。②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P<0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P<0.05)。且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著。③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P<0.05)。MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P<0.05)。且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著。④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P<0.05),且关系较密切(r=0.6645)。MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P<0.05),且关系密切(r>0.7340)。其他MMP之间相关关系不显著。结论首次利用LuminexxMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件。

兔免疫球蛋白液相芯片的制备及其检测方法的建立

目的制备实验兔的免疫球蛋白液相芯片，建立液相芯片技术（xMAP）检测方法。方法分别将兔IgG、IgM和IgA亲和纯化的捕获抗体耦联至荧光编码微球，对蛋白耦联量进行优化，制备兔IgG、IgM和IgA液相芯片，同步检测白毛黑眼兔（WHBE兔）和日本大耳白兔（JW兔）血清中IgG、IgM和IgA相对含量，建立可应用于实验兔免疫球蛋白半定量检测的xMAP方法，并对其结果用ELISA方法进行验证。结果（1）IgG、IgM和IgA的最佳蛋白耦联量分别为10、20和15№。（2）xMAP检测结果显示，WHBE兔血清中IgG、IgM蛋白含量显著低于删兔（P〈0．05），IgA蛋白含量显著高于Jw兔（P〈O．01）；ELISA检测结果表明，WHBE兔血清中IgG、IgM蛋白含量显著低于Jw兔（P〈0．05，P〈0．01），其中IgM蛋白含量变化达到极显著水平，IgA蛋白含量显著高于Jw兔（P〈0．01）。结论应用制备的兔IgG、IgM和IgA液相芯片建立的xMAP方法，对实验兔血清进行检测，检测结果与ELISA结果一致，提示该方法可应用于实验兔血清的IgG、IgM和IgA半定量检测。

液相芯片技术的原理与应用进展

液相芯片是20世纪90年代中期发展起来的被喻为后基因组时代的新型芯片技术,具有高通量、灵活、快速、准确、重复性好、操作简便等众多优点,可用作蛋白质和核酸等生物分子的高通量检测平台。本文简要介绍其原理、优点,并对该技术在基础研究、临床诊断等方面的应用进展作一综述。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均<10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。

转基因小鼠常见传染病血清学液相芯片技术多重检测方法的建立

目的制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,建立转基因小鼠传染病抗体的xMAP多重检测方法。方法将荧光微球分别与小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白进行偶联,并且对最佳蛋白偶联量、检测抗体最佳工作浓度和Streptavidin-PE最佳工作浓度进行优化,制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,对56个转基因小鼠血清样品、阴性血清、阳性血清和质控血清进行xMAP多重检测。并应用传统的ELISA方法对xMAP检测结果进行验证。结果 1)小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白的最佳偶联量分别为20μg、20μg、40μg和20μg,检测抗体最佳浓度分别为2μg/mL、2μg/mL、2μg/mL和4μg/mL;Streptavidin-PE抗体最佳浓度均为2μg/mL;(2)xMAP检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠血清MHV MFI值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的MFI值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性;(3)ELISA检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV A450值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的A450值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性,该ELISA检测结果与xMAP检测结果相一致。结论建立的xMAP多重检测技术可应用于转基因小鼠的传染病检测。

结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及在CEA抗原检测中的初步应用

液相芯片技术由于其高通量,灵敏度高,信噪比高,液相条件下反应,操作简便,耗时短等优点,已被美国FDA批准成为临床的检测手段。主要介绍了结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及其在CEA抗原检测中的初步应用。首先将CEA抗原的捕获抗体与微球载体进行偶联,制备液相芯片,然后对影响反应的微球与抗原的反应时间,生物素化检测抗体的浓度及avidin-PE荧光染料的反应浓度等因素进行正交设计,确定出最优的反应条件;用该液相芯片反应体系检测55例临床样本,与ELISA试剂盒检测结果相比:在同样的样本浓度范围内,两者的检测结果基本一致,但液相芯片检测的浓度范围更大而且液相芯片可将多种肿瘤标记物在一个反应进行检测,节省检测的时间和人力。

食源性沙门氏菌携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的液相芯片检测技术研究

目的:建立应用新型液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因中4种基因:qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法。方法:针对食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因,设计对应引物和微球,采用液相芯片技术对7株标准菌株进行特异性实验;对4株各含1种PMQR基因的食源性沙门氏菌进行重复性和灵敏度实验;然后检测来自食源性风险监测的71株耐喹诺酮类沙门氏菌,和普通PCR进行对比实验。结果:成功建立了液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因的方法,携带qnrS基因的耐药株检出限为5 CFU/mL、携带aac(6')-Ib-cr基因的耐药株检出限为25 CFU/mL、携带oqxA和oqxB基因的耐药株检出限为10 CFU/mL。所有阳性判定结果荧光中位值(MFI)均≥5倍阴性对照组。重复性实验变异系数(CV)均小于5%,特异性实验结果特异性100%,阴性菌株无阳性信号反应。qnrS检出率29.6%(21/71)、aac(6')-Ib-cr 35.2%(25/71)、oqxA 28.2%(20/71)、oqxB 23.9%(17/71),方法比对的结果符合率为100%。结论:实验建立的液相芯片技术检测食源性沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法具有灵敏度高、特异性好、稳定性强、结果准确的特点,可以为食源性沙门氏菌PMQR基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

应用流式液相芯片技术分析厦门地区女性人乳头瘤病毒感染现状

目的利用流式液相芯片技术检测人乳头瘤病毒基因的27个亚型,研究厦门地区女性HPV隐性感染及亚型分布状况,为女性人群宫颈癌健康筛查提供依据,做到早预防、早治疗,进而减低宫颈癌发生的风险。方法利用流式液相芯片技术对本院517例健康体检女性宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒基因的27个常见亚型的检测。统计分析整体总人群和不同年龄组:总的、HPV低危型的、HPV高危型的和HPV低/高危型混合的感染率;以及HPV亚型分布特点。结果总的HPV感染占受检人群的19.3%,低危感染占5.8%、高危感染占15.5%,各年龄组差异不明显;HPV阳性例数中混合感染例数占27.0%,在31~35、36~40和46~50岁这三个年龄段中混合感染率较大;HPV亚型分布特点:31~50年龄段低危亚型感染呈多样化,而25~30年龄段和>50岁年龄段低危亚型感染较单一;HPV高危亚型25~30年龄组感染以18型和52型为主;31~35年龄组16和52型最多,其次是18和59型;36~40年龄组51、52、53、56和59型较其他型多见;41~45年龄组52型较多见;46~50年龄组39、51、52、58较其他型多见;51~55年龄组亚型分布较简单,仅有51、52和53型,其中以52型最多见;>55年龄组HPV阳性的7人检出的高危亚型有16、39、52、56和58。结论总的HPV感染率、低危型HPV感染和高危型HPV感染各年龄段无明显差异,但高危感染率均高于低危感染率;低/高危型混合感染率人群中有较高比例;本地区女性各年龄段都有宫颈癌常见亚型感染,不同年龄段高发感染的型别略有不同。因此,各年龄段的妇女都应重视HPV筛查,并进行HPV亚型检测,以便更好地评估宫颈癌患病风险,及早预防、监测、治疗。

液相芯片技术进展及在检验医学中应用

生物芯片技术是对生命体海量信息进行检测和分析的重要手段,生物芯片包括基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片和组织芯片等。生物芯片虽在生物医学领域的检测、分析和研究中发挥了重要的作用,但仍存在较多不足。液相芯片技术因其所有反应都在液相中完成,是集微球编码技术、液流控制技术、激光技术、生物技术及数字信号处理技术为一体的新型生物分子检测技术。

液相芯片技术在国内的发展现状

从20世纪90年代开始生物芯片已在全球进行应用,其最初用于基因序列分析、基因表达谱和基因突变体的检测等,主要用于基因分析,故又称为基因芯片或DNA芯片。而随着其被广泛应用于免疫反应、受体结合等领域,出现了蛋白芯片、细胞芯片和组织芯片等[1-2]各种生物芯片。 液相芯片是在20世纪90代中期发展起来的,又被称为xMAP技术,集流式细胞技术、激光、数字信号处理系统和传统化学技术为一体的,具有新型通量大、灵活性好,灵敏度高、动力学范围广等优点[3-4]。

牛地方流行性白血病液相蛋白芯片检测方法的建立

应用xMAP液相芯片技术原理,以原核表达的重组牛白血病病毒gp51蛋白为抗原,建立了检测牛白血病病毒抗体的LiquiChip液相蛋白芯片检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性与稳定性试验。结果表明,该方法对牛白血病病毒阳性血清检测阳性,对其他常见牛病毒阳性血清检测阴性,表明特异性好;液相蛋白芯片方法对牛白血病病毒抗体的检测敏感性可达119.7ng/μL,对多份牛白血病病毒阳性血清的检测结果显示该方法的检测敏感性与商品化ELISA试剂盒无显著差异;对3份牛白血病病毒阳性血清进行4次重复检测,批内、批间的变异系数均低于10%。所制备的偶联微球芯片保存3个月,其检测结果无显著差异。采用该方法对169份临床牛血清样品进行检测,检出阳性率达57.4%,该检测结果与瑞典进口ELISA试剂盒检测结果的符合率为94.67%。本方法为牛地方流行性白血病的进出境检疫、疫病监测和流行学调查研究提供了一种特异、敏感的新型快速检测技术。

差异蛋白质组学的研究进展

差异蛋白质组是蛋白质组学研究的一个主要内容,其核心在于寻找某种特定因素引起样本之间蛋白质组的差异,揭示并验证蛋白质组在生理或病理过程中的变化。进一步对蛋白质组差异信息分析后,理论上可以推断造成这种变化的原因。因此,对于临床上肿瘤预诊、药物靶标寻找、细胞调控分子的鉴别等有着极大的实际意义。差异蛋白质组研究要求可靠性和可重复性。因此,对于样本处理要求较高,激光微切割技术和高丰度蛋白去除技术的应用优化了样本处理方法。目前差异蛋白质组的主要研究方法仍是2-DE分离和MS鉴定联合应用,基于2-DE的2-DDIGE方法弥补了2-DE的弱点,更适用于差异蛋白质组研究。除2-DE技术外的其他几种技术手段,如多维液相色谱分离技术、ICAT技术、蛋白芯片技术等差异蛋白质组学研究技术可以作为2-DE技术的补充,甚至或替代技术。

一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究表明,白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用,但其是否可抑制人的软骨细胞增殖?这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚。实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响。方法:选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊柱骨病科住院的膝骨关节炎患者8例。所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准,排除其他疾病(创伤性、风湿性及感染性)所导致的骨关节炎。所有患者均在术前告知,并签有试验知情同意书。分离培养关节软骨细胞,将不同浓度(0,1,10,100μg/L,其中0μg/L作为对照)白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24,48,72h,一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素,与白细胞介素1β共同作用72h,收集细胞上清液,一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测,并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段;四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖;xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1,基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达。结果:①不同时间点1,10,100μg/L白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比,差异显著(P<0.05,P<0.01);相同浓度白细胞介素1β在24,72h的吸光度值相比较,差异显著(P<0.01)。②白细胞介素1β和氨基胍(100μmol/L)共同作用软骨细胞72h后,各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比,差异显著(P<0.01)。③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达,并呈剂量依赖关系。④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01),而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到。结论:白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖,诱导基质金属蛋白酶表达,这些影响可被氨基胍抑制,白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用。

5种重要虫媒病毒液相蛋白芯片多重检测方法的建立及应用

目的建立森林脑炎、乙型脑炎、登革热、基孔肯雅和刚果-克里米亚出血热5种虫媒病毒的液相蛋白芯片检测方法,为虫媒病毒的筛查检测提供一种新方法。方法将病毒抗原包被微球,采用间接法原理,利用病毒抗体和阳性血清建立并优化5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法。对临床样本进行检测,评价液相蛋白芯片方法的敏感性、准确性。结果以病毒抗体和阳性血清建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,病毒抗体及生物素标记二抗的孵育时间均为1 h,生物素标记羊抗兔/鼠/人Ig G的最佳稀释度为1∶100,能对5种虫媒病毒进行准确检测。该方法具有高通量、快速、敏感、特异等特点。结论本研究所建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,可用于这5种虫媒病毒的同时筛查检测,适用于国境口岸对虫媒病毒进行筛查检测,能提高检测的效率,满足口岸检疫中快速检验的要求。

Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶抑制剂对骨关节炎患者软骨基质金属蛋白酶表达的影响

目的应用Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶（NOS）抑制剂对骨关节炎（OA）患者软骨基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响，以及NOS抑制剂改善OA代谢的途径。方法研究经本院医学伦理委员会批准并获取患者的知情同意。无菌条件下，取15例重度OA需行关节置换术患者的关节软骨，置人体外培养系统。应用随机数目表法分为：①对照组：不加药物干预；②L—N^6-亚氨乙基-赖氨酸（L-NIL）组：加入NOS抑制剂L-NIL干预。培养72h后，通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察软骨一氧化氮（NO）的释放量和NOS的活性；应用Luminex液相蛋白芯片检测OA患者软骨中MMPs（MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-9，MMP-13）表达量的变化。数据采用配对t检验作均数的显著性检验。结果对照组软骨培养72h后，在其上清液中可检测到高浓度NO[（216±47）μmol／L]和高活性的NOS[（5．7±1．3）U／ml]，L—NIL组NO释放量[（55±20）μmol／L]较对照组明显减少，NOS活性[（1．7±0．7）U/ml]显著降低（P均〈0．01）。Luminex液相蛋白芯片显示对照组OA软骨中MMPs[（MMP-1（10．8±5．4）ng／ml，MMP-2（9．2±3．3）ng／ml，MMP-3（11．6±4．2）ng／ml，MMP-9（1．27±1．07）ng／ml，MMP-13（3．6±1．3）ng／ml]的表达异常，而L—NIL组OA软骨中MMPs表达量明显被抑制[分别为（3．6±1．8）ng／ml，（2．3±1．2）ng/ml，（3．6±1．4）ng／ml，（0．65±0．21）ng／ml，（1．8±0．5）．g／ml，P均〈0．05]。结论Luminex液相蛋白芯片检测系统表明NOS抑制剂通过减少NO的过度释放和降低NOS活性，进而抑制MMPs的过度表达来改善OA软骨的代谢。