诊断急性呼吸道感染的新方法：Luminex xMAP~·技术

急性呼吸道感染（ARTI）是最常见的传染病。在美国,仅季节性流感每年至少造成约36 000人死亡,成为致死的第四大原因。目前常用的病毒培养、直接免疫荧光法（DFA）、免疫层析法及定量PCR等方法中,无一种方法能够及时检测出导致ARTI发生的主要病毒种类。由Luminex公司研制的xTAG呼吸道病毒诊断试剂盒（RVP）填补此项空缺,已经通过美国FDA认证。该试剂盒同时保证高敏感性及高特异性,xMAP技术是其核心技术。

液相芯片技术的原理与应用进展

液相芯片是20世纪90年代中期发展起来的被喻为后基因组时代的新型芯片技术,具有高通量、灵活、快速、准确、重复性好、操作简便等众多优点,可用作蛋白质和核酸等生物分子的高通量检测平台。本文简要介绍其原理、优点,并对该技术在基础研究、临床诊断等方面的应用进展作一综述。

转基因小鼠常见传染病血清学液相芯片技术多重检测方法的建立

目的制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,建立转基因小鼠传染病抗体的xMAP多重检测方法。方法将荧光微球分别与小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白进行偶联,并且对最佳蛋白偶联量、检测抗体最佳工作浓度和Streptavidin-PE最佳工作浓度进行优化,制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,对56个转基因小鼠血清样品、阴性血清、阳性血清和质控血清进行xMAP多重检测。并应用传统的ELISA方法对xMAP检测结果进行验证。结果 1)小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白的最佳偶联量分别为20μg、20μg、40μg和20μg,检测抗体最佳浓度分别为2μg/mL、2μg/mL、2μg/mL和4μg/mL;Streptavidin-PE抗体最佳浓度均为2μg/mL;(2)xMAP检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠血清MHV MFI值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的MFI值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性;(3)ELISA检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV A450值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的A450值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性,该ELISA检测结果与xMAP检测结果相一致。结论建立的xMAP多重检测技术可应用于转基因小鼠的传染病检测。

应用流式液相芯片技术分析厦门地区女性人乳头瘤病毒感染现状

目的利用流式液相芯片技术检测人乳头瘤病毒基因的27个亚型,研究厦门地区女性HPV隐性感染及亚型分布状况,为女性人群宫颈癌健康筛查提供依据,做到早预防、早治疗,进而减低宫颈癌发生的风险。方法利用流式液相芯片技术对本院517例健康体检女性宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒基因的27个常见亚型的检测。统计分析整体总人群和不同年龄组:总的、HPV低危型的、HPV高危型的和HPV低/高危型混合的感染率;以及HPV亚型分布特点。结果总的HPV感染占受检人群的19.3%,低危感染占5.8%、高危感染占15.5%,各年龄组差异不明显;HPV阳性例数中混合感染例数占27.0%,在31~35、36~40和46~50岁这三个年龄段中混合感染率较大;HPV亚型分布特点:31~50年龄段低危亚型感染呈多样化,而25~30年龄段和>50岁年龄段低危亚型感染较单一;HPV高危亚型25~30年龄组感染以18型和52型为主;31~35年龄组16和52型最多,其次是18和59型;36~40年龄组51、52、53、56和59型较其他型多见;41~45年龄组52型较多见;46~50年龄组39、51、52、58较其他型多见;51~55年龄组亚型分布较简单,仅有51、52和53型,其中以52型最多见;>55年龄组HPV阳性的7人检出的高危亚型有16、39、52、56和58。结论总的HPV感染率、低危型HPV感染和高危型HPV感染各年龄段无明显差异,但高危感染率均高于低危感染率;低/高危型混合感染率人群中有较高比例;本地区女性各年龄段都有宫颈癌常见亚型感染,不同年龄段高发感染的型别略有不同。因此,各年龄段的妇女都应重视HPV筛查,并进行HPV亚型检测,以便更好地评估宫颈癌患病风险,及早预防、监测、治疗。

恒河猴与食蟹猴血清多重细胞因子检测及分析

目的测定和比较健康恒河猴与食蟹猴基础血清细胞因子水平。方法分别采集15只健康恒河猴和15只健康食蟹猴血清,采用luminex xMap技术测定血清43种细胞因子的浓度,根据正态性检验(W检验)结果选择随机t检验或非参数检验(Mann-Whitney test)比较群体间差异。结果测定的43种细胞因子中,1种促炎症因子(IL-15)、3种抑炎症因子(IL-1RA、IL-6Rα和s CD27)和1种趋化因子(CCL5/RNATES)存在显著性群体间差异。结论研究结果表明,恒河猴与食蟹猴基础血清细胞因子水平差异不显著,用于生物医学研究中具有一定的可比性。同时,本研究结果可为相关研究提供基础数据。

常见7种食源性致病菌xMAP液相芯片快速筛查方法的建立及应用

目的采用xMAP液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测金黄色葡萄球菌、沙门菌、副溶血弧菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157∶H7、创伤弧菌和空肠弯曲菌的快速筛查方法。方法根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌肠毒素nuc基因、沙门菌侵袭性基因ssaR、副溶血弧菌通用基因toxR、单增李斯特菌的hlyA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbE基因、创伤弧菌的vvh基因和空肠弯曲菌的gyrA基因,设计特异性引物和探针,利用上游引物和生物素标记的下游引物对7个靶序列进行不对称实时PCR扩增,7重实时PCR扩增产物和制备的7种偶联探针的微球在同一体系中进行杂交,最后利用藻红蛋白和生物素的亲和作用报告荧光,从而建立7种食源性致病菌的xMAP液相悬浮芯片检测法。结果 xMAP液相悬浮芯片体系检测140株菌株,均出现特异性荧光中值信号,7种食源性致病菌检测互不干扰。DNA和菌液检出限分别为1～100ng和105～108cfu/ml对56份各类食品标本进行检测,检出金黄色葡萄球菌2份、沙门菌4份、副溶血弧菌7份、单增李斯特菌1份、创伤弧菌3份,未检出大肠杆菌O157∶H7和空肠弯曲菌,此结果与传统方法分离结果相一致。结论xMAP液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右,该方法可应用于食品安全风险监测中食源性致病菌的快速筛查和食源性致病菌的分型鉴定。

Luminex液相芯片在微生物多重检测中的应用

液相芯片作为一种新的生物芯片技术,以不同荧光编码微球作为反应及信号检测载体,流式细胞术作为光学检测手段,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子多重检测。它既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高速度、低成本、准确性高、重复性好、灵敏度高、线性范围广、无需洗涤、操作简便等优势。该文对此技术的原理、特点及其在疾控机构微生物多重检测中的应用进行综述。