中药苍耳草中苍耳亭的研究进展

苍耳亭是一种天然倍半萜内酯类化合物,其主要来源为菊科植物苍耳草,具有十分丰富的生物活性,主要表现在抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒及抗虫等方面。苍耳亭的抗肿瘤效果较为显著,其作用机制主要与抑制血管生成有关。苍耳亭的抗菌作用在细菌和真菌方面均效果明显。此外,有研究发现苍耳亭在治疗过敏性皮炎、溃疡性结肠炎及杀虫方面亦具有良好的效果。本文从苍耳亭的来源及化学结构等角度出发对苍耳亭的药理作用、化学结构修饰以及全合成研究现状进行总结归纳,并对苍耳亭的应用前景及研究方向进行探讨,以期为苍耳亭的进一步开发提供参考。

苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养后细胞外泌体测序及功能分析

目的筛选苍耳亭与MHCC97H共培养过程中差异miRNAs并进行验证,为寻找肝癌治疗靶点提供线索。方法将苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养24 h,利用差速超离心法分离出外泌体。通过透射电镜观察外泌体的典型结构以及Western blotting分析外泌体标志性蛋白CD9和HSP70的表达来验证分离的是外泌体;检测苍耳亭与MHCC97H共培养后细胞外泌体的miRNA谱。筛选苍耳亭与MHCC97H细胞共培养和未共培养的MHCC97H细胞外泌体的差异miRNAs,通过GO和KEGG分析表征差异miRNAs的功能,分析差异miRNAs的潜在抗肿瘤意义。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的4种差异miRNAs进行验证。结果共鉴定出78个差异miRNAs,其中36个上调miRNA,42个下调miRNA。差异基因主要与肿瘤代谢通路相关。qRT-PCR实验结果显示,细胞外泌体let-7f-5p、let-7b-5p、miR-192-5p和miR-197-3p表达上调,与miRNA测序结果一致。结论苍耳亭可调节肿瘤细胞来源的外泌体miRNA,这些外泌体对抑制肝癌具有重要意义。

苍耳亭抑制肝癌HepG2体内外药效研究

目的通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨苍耳亭体内外抗人肝癌细胞HepG2的作用。方法体内通过构建裸鼠肝癌自发转移模型,并随机分成空白对照组、苍耳亭低、高剂量组,连续腹腔注射2周,完整剥离肿瘤组织,称取瘤质量,计算抑瘤率,并且剥取主要脏器,计算脾指数与胸腺指数;体外通过MTT、Transwell实验初步观察苍耳亭对癌细胞侵袭迁移的作用。结果体内实验结果显示苍耳亭低剂量组与高剂量组的抑瘤率分别为17.61%和39.57%,具有较好的抑制肿瘤活性(P<0.05,P<0.01),并且高低剂量组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。体外苍耳亭抑制HepG2细胞增殖效果明显,与空白对照组DMSO比较,16μM时诱导肿瘤细胞凋亡差异有统计学意义(P<0.01),其IC 50值为29.04μM。同时,Transwell实验显示也能抑制体外癌细胞侵袭。结论苍耳亭体内外对肝癌HepG2细胞均具有较强的抑制作用,具有浓度依赖性。

苍耳亭对卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎的影响

目的研究苍耳亭对卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎的影响。方法采用卵清蛋白诱导大鼠过敏性鼻炎模型，将48只大鼠分成6组：正常组，模型组，苍耳亭高、中、低剂量组，富马酸酮替芬组。给药1周后，记录大鼠打喷嚏和挠鼻数，检测血清中免疫球蛋白E（IgE）和白细胞介素-4（IL-4）的水平，剥取鼻中隔黏膜进行H-E染色及电镜观察。结果苍耳亭可明显减少过敏性鼻炎模型大鼠的打喷嚏和挠鼻数，降低血清中IgE和IL-4的水平，改善鼻黏膜的病理状况。结论苍耳亭对卵清蛋白诱导的过敏性鼻炎模型大鼠有积极的治疗作用。

苍耳亭通过ERK/JNK信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜组织损伤的影响

目的:探究苍耳亭对细胞外信号调节激酶(ERK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用以及对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜组织损伤的保护作用。方法:90只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、阳性药物组、苍耳亭低剂量组、苍耳亭中剂量组、苍耳亭高剂量组,每组15只。除正常组外,其余各组运用5%2,4,6-三硝基甲苯磺酸(TNBS)建立大鼠UC模型,实验结束后记录各组大鼠排出的粪便性状、便血情况和体质量变化,进行疾病活动指数(DAI)评分;处死大鼠,取出完整结肠,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并进行HE染色,ELISA法检测结肠黏膜组织中IL-6、TNF-α、IL-10含量,免疫组化法检测结肠黏膜组织中Occludin、Claudin-1、Caspase-3表达情况,Western blotting法检测结肠黏膜组织中p-ERK、ERK、p-JNK、JNK蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织可见隐窝消失,大量炎症细胞浸润,黏膜下层也出现炎症现象;DAI、CMDI评分,IL-6、TNF-α含量,Caspase-3表达,以及p-ERK/ERK、p-JNK/JNK均明显升高(P<0.05),IL-10含量与Occludin、Claudin-1表达均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药物组与苍耳亭低、中、高剂量组结肠黏膜组织病变减轻,DAI、CMDI评分,IL-6、TNF-α含量,Caspase-3表达,以及p-ERK/ERK、p-JNK/JNK均明显降低(P<0.05),IL-10含量与Occludin、Claudin-1表达均明显升高(P<0.05)。苍耳亭高剂量组上述指标与阳性药物组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。苍耳亭各剂量组间各指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苍耳亭可能通过抑制ERK/JNK信号通路的表达,改善UC大鼠肠道黏膜组织损伤。

苍耳亭对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和GSTP1的影响

目的：研究苍耳亭对宫颈癌鳞癌 SiHa 细胞增殖、凋亡及谷胱甘肽硫-转移酶 P1（GSTP1）的影响。方法 MTS法检测不同浓度苍耳亭对 SiHa 细胞生长的抑制作用，荧光显微术观察 SiHa 细胞形态的变化，流式细胞术检测苍耳亭对 SiHa 细胞凋亡的影响，酶标仪法检测 GSTP1酶活性，免疫组化检测 GSTP1蛋白表达，Western blot 法检测 p-JNK 蛋白表达。结果苍耳亭（0~40μmol/ L）对 SiHa 细胞的抑制作用呈时间-浓度依赖性，实验组 SiHa 细胞逐渐皱缩、变圆，甚至出现明显的凋亡小体。用不同浓度苍耳亭（0、5、10、20、40μmol/ L）处理 SiHa 细胞24 h 后，凋亡率分别为5.02%、9.62%、18.5%、26.4%和37.5%；与对照组相比，凋亡率明显升高。苍耳亭浓度性降低 SiHa 细胞 GSTP1酶活性及蛋白表达。Western blot 法结果显示苍耳亭可上调 SiHa 细胞 p-JNK 蛋白的表达。结论苍耳亭对宫颈癌 SiHa 细胞有明显的抑制增殖及促进凋亡作用，抑制 GSTP1、激活 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）通路可能是其发挥诱导 SiHa 细胞凋亡的作用机制之一。

晋产苍耳叶提取物的抗菌活性及其主要抗菌组分

为了探究苍耳叶提取物对植物病原真菌的抑制作用,并明确其中的抗菌活性物质,以山西太谷地区野生苍耳叶为研究对象,使用95%乙醇提取其有效成分,利用石油醚和乙酸乙酯对其抗菌物质进行初步分离,采用反复硅胶柱层析和重结晶等技术分离纯化其主要抗菌组分,通过菌丝生长速率法和孢子萌发法分析上述各组分的抗菌作用。结果表明,苍耳叶中的主要抗菌物质为倍半萜内酯类化合物苍耳亭;苍耳亭对6种供试植物病原真菌均显示出良好的抑制菌丝生长作用,对玉米圆斑病菌(Bipolaris carbonum)、辣椒枯萎病菌(Fusarium oxyspo⁃rum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、腐皮镰刀病菌(Fusarium solani)和黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)的抑制中浓度均在30μg/mL左右;苍耳亭对4种供试植物病原真菌孢子表现出优异的抑制萌发活性,尤其是对腐皮镰刀病菌和番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)孢子的抑制萌发效果最为显著,抑制中浓度分别为78.00、15.22μg/mL,远优于阳性对照药剂苯醚甲环唑和恶霉灵。研究证实,苍耳叶中丰富的倍半萜类物质苍耳亭是其发挥抗菌活性的重要物质基础,其不仅拥有良好的抑制真菌菌丝生长作用,而且首次发现苍耳亭对植物病原真菌孢子也有强烈的抑制萌发活性,具有开发成新型植物源抗菌剂的巨大潜力。

苍耳提取物苍耳亭的结构修饰及其杀虫活性测定

通过对苍耳提取物苍耳亭的化学结构进行改造合成得到18种单体化合物,采用室内生测法测定了化合物对二斑叶螨和粘虫的杀虫活性.结果表明:C7和C5对二斑叶螨触杀活性最高,48h校正死亡率分别为75.38%和69.62%;C7、C18、C5和C10对粘虫有较好的拒食活性,48h非选择拒食率分别为74.40%、63.59%、59.98%和58.40%;C5、C7、C14和C4对粘虫有很好的触杀活性,48h校正死亡率分别分别为78.74%、73.62%、65.21%和62.06%;C5、C7、C14和C10对粘虫有一定的胃毒作用,48h校正死亡率分别为74.26%、65.32%、56.97%和53.86%.可见,C7、C5和C14不仅对二斑叶螨雌成螨有很好的触杀活性,对粘虫还有良好地触杀、胃毒和拒食作用,具有很好的开发前景;C18、C10和C4对粘虫拒食、胃毒和触杀作用也值得研究.

苍耳亭缓解过敏性皮炎及机制探索

目的探讨苍耳亭对过敏性皮炎的药效作用及其机制.方法利用异硫氰酸荧光素(FITC)诱导Th2型变应性接触性皮炎(ACD)模型观察苍耳亭全程给药对小鼠的耳肿胀、耳组织病理学以及脾脏指数的影响,并运用ELISA法检测小鼠耳匀浆中的Th2型炎症因子IL-4、IL-5和IL-13水平.利用MTT法考察不同化合物浓度对于人永生化角质形成细胞(HaCaT)、单核巨噬细胞RAW264.7以及小鼠脾脏淋巴细胞的增殖毒性作用.ELISA法检测Poly(I:C)和TNF-α联合作用于上皮细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的量以及脂多糖(LPS)诱导下RAW264.7产生TNF-α的含量.结果苍耳亭40 mg/kg能显著抑制ACD小鼠耳肿胀,并可明显降低耳匀浆中Th2型细胞因子IL-4、IL-5水平,病理切片显示其可明显改善耳肿胀程度以及炎性细胞的浸润.体外实验中0.1μmol/L苍耳亭对上皮细胞产生的TSLP有显著抑制作用;1μmol/L的苍耳亭可以显著抑制RAW264.7产生TNF-α;苍耳亭对于脾淋巴细胞的增殖、对刀豆蛋白(ConA)以及脂多糖(LPS)诱导下T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化增殖作用均未见明显影响.结论苍耳亭对过敏性皮炎有明显的治疗作用,其机制可能通过抑制上皮细胞产生的TSLP以及巨噬细胞产生TNF-α发挥抗炎作用.

苍耳亭通过调控LOXL1-AS1miR-520d-5p轴对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨苍耳亭对白血病细胞的抗癌作用及其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)和微小RNA(miR)-520d-5p表达有关。方法 按转染细胞分组:对照组、苍耳亭6μmol/L组、苍耳亭20μmol/L组、苍耳亭60μmol/L组、si-NC组、si-LOXL1-AS1组、苍耳亭+pcDNA-LOXL1-AS1组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。实时定量PCR(RT-qPCR)检测LOXL1-AS1和miR-520d-5p表达;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达。分别转染LOXL1-AS1小干扰RNA、LOXL1-AS1过表达载体至K-562细胞中,通过CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分析干扰LOXL1-AS1表达或过表达LOXL1-AS1联合苍耳亭对K-562细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。双荧光素酶报告实验分析LOXL1-AS1和miR-520d-5p相互作用。结果 苍耳亭处理后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达、LOXL1-AS1表达显著降低(均P<0.05)。干扰LOXL1-AS1表达后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。过表达LOXL1-AS1明显减弱苍耳亭处理对K-562细胞细胞增殖、凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。LOXL1-AS1与miR-520d-5p直接结合。结论 苍耳亭可抑制白血病细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴有关。

苍耳亭抗大鼠肺癌机制研究

【目的】观察祛风解表苍耳子中苍耳亭对肺癌大鼠的抑瘤作用及机制。【方法】将40只大鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型,随机分为模型组,苍耳亭低、中、高剂量组,每组10只。给药14 d后,比较各组大鼠瘤体质量和体积;苏木素-伊红(HE)染色观察肺癌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法测定肺癌细胞凋亡情况,高效液相色谱法(HPLC)检测肺癌组织中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量,JC-1法检测肺癌组织线粒体膜电位(MMP)水平,蛋白质免疫印迹法检测肺癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)结合蛋白1(p-4E-BP1)的蛋白表达。【结果】与模型组比较,苍耳亭低、中、高剂量组瘤体质量和体积均显著减小(P<0.05),肺癌细胞凋亡指数均增加(P<0.05),ATP含量均显著降低(P<0.05),ADP/ATP、AMP/ATP比值均显著升高(P<0.05),MMP水平均明显降低(P<0.05),肺癌组织中mTOR、p-4E-BP1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。【结论】苍耳亭可通过降低癌细胞能量代谢,抑制癌细胞mTOR/4E-BP1信号通路的活化,抑制大鼠肺癌。

高效液相色谱法测定大鼠血浆中倍半萜内酯类化合物苍耳亭的浓度

目的:建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中苍耳亭的浓度。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(V∶V=52∶48),流速为1.0 ml/min,检测波长为278 nm,柱温为25℃。血浆样品经二氯甲烷萃取富集,10μl进样检测。结果:苍耳亭质量浓度在0.1~10μg/ml(R^2=0.9997)范围内呈现良好的线性关系,定量下限为0.1μg/ml。苍耳亭低、中及高浓度的提取回收率分别为89.19%、83.56%及96.72%,日内和日间精密度分别≤5.47%和8.65%。结论:本方法灵敏快速简单,适用于体内苍耳亭的浓度分析,为药动学研究提供方法依据。

苍耳化学成分的分离与鉴定

目的对苍耳Xanthium sibiricum地上部分的化学成分进行分离和鉴定。方法采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱、MCI凝胶色谱和Sephadex LH-20柱色谱等方法对其化学成分进行分离纯化,应用现代波谱技术ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR对化合物的结构进行鉴定。结果从苍耳中分离得到了7个倍半萜类化合物,分别为苍耳农(1)、苍耳亭(2)、3-cycloheptene-1-acetic acid(3)、xanthinosin(4)、inusoniolide(5)、5-azuleneacetic acid(6)、2-hydroxy xanthinosin(7)。结论化合物1为新化合物,命名为苍耳农,化合物3、6、7为首次从苍耳植物中分离得到,化合物5为首次从苍耳属植物中分离得到,其中化合物2的量较丰富(0.1%),为开发新型植物源杀菌剂奠定了基础。

苍耳子的化学成分研究

目的对苍耳子Xanthii Fructus的化学成分进行研究。方法利用正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、重结晶等方法进行分离和纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从苍耳子的95%乙醇提取物中分离得到了15个化合物,分别鉴定为百合内酯(1)、(3S,5R,6S,7E)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmene-9-one(2)、7α-羟基-β-谷甾醇(3)、豆甾-4-烯-3β,6α-二醇(4)、6′-棕榈酰基-β-胡萝卜苷(5)、β-谷甾醇(6)、β-胡萝卜苷(7)、蛇菰宁(8)、松脂醇(9)、苍耳亭(10)、苍耳皂素(11)、苍耳烯吡喃(12)、对羟基苯甲醛(13)、3-羟基-4-甲氧基反式桂皮醛(14)、槲皮素(15)。结论化合物1～5为首次从苍耳属植物中分离得到,化合物8为首次从苍耳中分离得到。

基于分子对接虚拟技术及Western blotting实验考察苍耳亭对肝癌上皮间质转化作用靶点的影响

目的用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western Blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响。方法选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)为作用靶点,采用分子对接虚拟技术评价苍耳亭与其空间结合能力,并与相应内源性物质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、醋酸离子、黄素腺嘌呤二核苷酸、N-乙酰葡糖胺对比;培养HepG2细胞,给予1、5、20μmol/L浓度的苍耳亭,利用Western Blotting实验检测其对Dhs、Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示,苍耳亭与EMT过程中作用靶点均具有一定亲和力,其中与Dhs、Snail、VEGFR3的亲和力高于内源性物质,与Vimentin的亲和能力不及内源性物质;Western Blotting实验结果显示,苍耳亭显著下调Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论苍耳亭对肝癌侵袭转移关键因子E-cadherin、Vimentin、Snail、VEGFR3有明显影响,可能是其潜在靶点;分子虚拟对接和Western blotting实验结果具有一定的相似性,能预先提示潜在靶因子。

Akt活性抑制对苍耳亭抗非小细胞肺癌活性的促进作用

目的:研究抑制非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞内的Akt激活对苍耳提取物苍耳亭(Xanthatin)抗肿瘤活性的影响。方法:MTT实验检测苍耳亭对A549细胞的抑制能力;Western blot实验检测苍耳亭对Akt、m TOR激活水平的影响;采用Akt1 siRNA干扰及Akt特异性抑制剂MK-2206研究Akt信号阻断对苍耳亭抗肿瘤效果的影响。结果:苍耳亭(2.5μmol/L^40μmol/L)能够剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,起效剂量为20μmol/L,24h的IC50值为14.52μmol/L;苍耳亭处理24h能够促进Akt、m TOR的磷酸化激活;采用Akt1 siRNA干扰或MK-2206(1μmol/L)阻断Akt通路后能够提高10μmol/L剂量的苍耳亭作用24h对A549细胞的抑制作用。结论:阻断Akt信号对于苍耳亭抗NSCLC效果的发挥具有促进意义。