花椒毒素在人体皮肤及角质层中的渗透动力学探讨

目的探讨花椒毒素在人体完整皮肤及其角质层中的渗透动力学特性。方法采用人体离体皮肤及从完整皮肤中分离出的角质层,在Franz-cell扩散池中进行不同浓度的花椒毒素乙醇溶液(0.1,0.5,2.5和5.0 mg.mL-1)的渗透实验,均采用1.4%的人血清溶液作为接收液,用HPLC法测定各接收液的药物量和皮肤中的贮存药物量。结果花椒毒素乙醇溶液单位面积透过完整人皮肤速率随着浓度增加而增加,2.5 mg.mL-1以上的浓度对其速率几乎无影响。在角质层中也存在同样的现象,但其单位面积透皮速率最大值提前了约6 h。而且随着给药浓度的增加,24 h后完整皮肤和角质层的药物贮存量也相应增加,但达到一定浓度后存在饱和现象。且花椒毒素乙醇溶液在完整皮肤中的透皮时滞(0.82 h)明显大于在角质层中的透皮时滞(0.47 h)。结论该结果对开发花椒毒素外用制剂时浓度的选择提供了依据,并对其外用药物后照射长波段紫外光(UVA)的时间提供了参考。

RP－HPLC分析白花前胡根和茎叶中花椒毒素的含量

建立了ＲＰ－ＨＰＬＣ分离和测定白花前胡根和茎叶中活性成分花椒毒素含量的方法，采用Ｃ＿（１８）柱，甲醇－水（６５：３５）为流动相，ＵＶ检测波长为２９７ｎｍ，花椒毒素在浓度为１～４μｇ／ｍｌ范围内（进样１μｌ），进样浓度（μｇ／ｍｌ）与峰面积呈直线相关，回归方程Ａ＝－０．１４１×１０￣３＋２．６１６×１０￣３Ｘ，ｒ＝０．９９９８。回收率为９９．９％，ＲＳＤ为０．６８％（ｎ＝５）。该方法步骤简便，重现性好，结果准确，分析速度快，可望成为分析白花前胡根和茎叶中花椒毒素含量的常规方法。

花椒毒素的合成工艺改进

目的合成花椒毒素。方法连苯三酚为原料 ,经甲酯化、傅 克反应、氯甲基化得到 2 氯 2′ 羟基 3′ ,4′ 二甲氧基 5′ 氯甲基苯乙酮。再经环合、硼氢化钠还原得 6 ,7 二甲氧基 5 羟甲基苯并呋喃 ,然后用选择性氧化剂PCC将其结构上的伯醇羟基氧化为醛 ,三氯化铝脱甲基得 6 羟基 7 甲氧基 5 甲酰基苯并呋喃。最后经过Knoevenagel反应 ,脱羧 ,得到花椒毒素 ,并用1H NMR、MS以及IR验证产物结构。结果结构确证为花椒毒素 ,总收率约 9 0 % ,纯度 99%以上。结论该工艺路线合成花椒毒素是有效的、可行的 。

HPLC法同时测定蛇床子配方颗粒中蛇床子素、花椒毒酚、花椒毒素的含量研究

目的:通过对蛇床子配方颗粒的定性鉴别和定量分析研究,制定更加完善的蛇床子配方颗粒质量控制标准。方法:以蛇床子配方颗粒为对照品,采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定蛇床子配方颗粒中蛇床子素、花椒毒酚、花椒毒素3种成分的含量。结果:含量测定中,以测定的峰面积为纵坐标,蛇床子素在0.04~0.40μg范围内,呈线性关系(r^2=0.993);花椒毒酚在0.04~0.40μg范围内,呈线性关系(r^2=0.994);花椒毒素在0.04~0.40μg范围内,呈线性关系(r^2=0.996);线性关系良好;平均回收率分别为99.53%、98.13%和101.46%(n=6),准确度良好。结论:本方法重复性良好,实验结果稳定可靠,完善和提高了蛇床子配方颗粒的质量控制标准。

花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素的合成

花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素为香豆素类天然活性分子。以2,6-二羟基苯乙酮与溴代乙醛缩二乙醇为原料,经单酚羟基缩合、成环构建呋喃片段,然后在硫酸催化下与苹果酸经Pechmann缩合反应生成吡喃-2-酮骨架,进一步经Baeyer-Villiger氧化合成花椒毒醇,4步总产率为42%,最后分别与碘甲烷、1-溴-3-甲基-2-丁烯缩合生成花椒毒素与欧前胡素,总产率分别为35%与37%,其结构经IR、1HNMR、13CNMR与MS表征。这为合成天然产物花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素提供了一种较为简便的方法,同时为此类化合物的合成与应用提供了参考。

广州地区市售酱油污染黄曲霉毒素和花椒毒素的抽样调查

目的:对2000年广州地区部分市售品牌酱油以及12所高校的35间食堂、餐厅、饮食店等使用的酱油进行了污染黄曲霉毒素B1(AFB1)、花椒毒素(XAT)情况进行抽样调查,以了解当年该地区市售酱油的污染情况.方法:采用国际通用的高效薄层层析法(HPTLC)进行检测.结果:AFT阳性(AFB1≥5μg/kg)检出率为24%～33%,污染量从5μg/kg到25μg/kg,最高的高出国家标准4倍;样品中XAT阳性(XAT≥5μg/kg)检出占20%.结论:当年该地区部分市售酱油存在着黄曲霉毒素及花椒毒素的污染.

芸香药材中花椒毒素的HPLC测定方法研究

目的:筛选出在芸香中提取花椒毒素的方法,建立HPLC法测定花椒毒素的含量。方法:在避光条件下,利用花椒毒素在二氯甲烷和乙酸溶液中均有较好溶解度,通过二氯甲烷提取,挥干,残渣加5%乙酸溶液溶解,过滤,进样。采用C_(18)色谱柱,流动相为乙腈:0.02 mol·L^(-1)乙酸铵(45∶55),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长300 nm,柱温35℃。结果:花椒毒素在0.804~80.4μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为96.4%,RSD=4.0%。不同产地的10批样品测定结果为:0.04%~0.31%,RSD(n=3)为0.85%~1.96%。结论:本实验建立的芸香中提取花椒毒素的方法及HPLC法能有效地测定芸香中花椒毒素的含量,本法已列入芸香药材质量标准(草案)。

花椒毒素纳米微粒概述

针对花椒毒素纳米微粒进行概述。

超高效液相色谱法测定北沙参中花椒毒素含量

为建立北沙参中花椒毒素含量的测定方法,采用超高效液相色谱,色谱柱为ACQUITY UPLC^(®)HSS T31.8μm(2.1×100 mm×1.8μm),流动相为50%甲醇乙腈-0.1%磷酸溶液,流速0.3 mL/min,柱温30℃,检测波长323 nm,进样量为1μL。在该色谱条件下,在2.005~80.217μg/mL范围内,北沙参中花椒毒素浓度与峰面积线性关系良好(R=0.9998)。方法精密度RSD为0.23%、重复性RSD为0.87%、稳定性RSD为0.91%、加样回收率在97.0%~105.5%(RSD=2.6%)。该方法快速、准确、便捷,可应用于北沙参中花椒毒素含量的测定。

花椒毒酚对大鼠脊髓型颈椎病的治疗作用及机制

目的探讨花椒毒酚对脊髓型颈椎病(CSM)大鼠的影响及其作用机制。方法将50只无特定病原级成年Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=12)、模型组(n=13)、低剂量花椒毒酚组(n=12)和高剂量花椒毒酚组(n=13)。模型组、低剂量花椒毒酚组和高剂量花椒毒酚组大鼠于第4和第5颈椎椎间隙注入0.2 mL骨形态发生蛋白(BMP)混悬液制备CSM模型,假手术组大鼠注射0.2 mL生理盐水。造模后第3天,低剂量花椒毒酚组和高剂量花椒毒酚组大鼠分别给予腹腔注射5、10 mg·kg^(-1)花椒毒酚溶液,假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等量生理盐水,所有大鼠均隔日注射1次,连续注射7次。造模后第4周,采用苏木精-伊红染色法观察4组大鼠颈椎间盘滑膜组织病理学情况。采用改良Rivlin斜板实验观察4组大鼠造模前及造模后第4周的运动功能。采用酶联免疫吸附试验法检测4组大鼠血清及颈椎间盘关节液中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用Western blot法检测4组大鼠颈椎间盘滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白相对表达量,并计算p-NF-κB p65/NF-κB p65比值。结果造模后第4周,共3只大鼠死亡(假手术组1只、低剂量花椒毒酚组2只),其余大鼠的总体生长状态良好。模型组大鼠活动量略少,动作不如其他3组敏捷,呼吸幅度略显急促。假手术组大鼠的椎间盘滑膜组织结构完整,滑膜细胞排列整齐,未见显著炎症细胞浸润、充血及水肿;模型组大鼠可见滑膜组织结构显著增生、肿胀,表层细胞呈栅栏样排列,广泛存在炎症细胞浸润及脂肪组织填充;低剂量花椒毒酚组大鼠滑膜组织内炎症细胞浸润程度较模型组显著减轻,可见纤维化改变,间质内可见脂肪组织填充;高剂量花椒毒酚组未见明显炎症细胞浸润,增生及肿胀程度较低剂量花椒毒酚组进一步缓解,纤维化不明显,间质内填充脂肪组织减少。造模前4组大鼠的改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度比较差异无统计学意义(F=2.785,P>0.05)。造模后第4周,假手术组大鼠改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度与造模前比较差异无统计学意义(P>0.05),模型组、低剂量花椒毒酚组、高剂量花椒毒酚组大鼠改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度均显著低于造模前(P<0.05);模型组、低剂量花椒毒酚组、高剂量花椒毒酚组大鼠改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度均显著低于假手术组(P<0.05);低剂量花椒毒酚组、高剂量花椒毒酚组大鼠改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度均显著高于模型组(P<0.05);低剂量花椒毒酚组与高剂量花椒毒酚组大鼠改良Rivlin斜板实验最大倾斜角度比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、低剂量花椒毒酚组、高剂量花椒毒酚组大鼠血清及颈椎间盘关节液中IL-6水平均显著高于假手术组(P<0.05)。模型组、低剂量花椒毒酚组大鼠血清及颈椎间盘关节液中IL-1β水平均显著高于假手术组(P<0.05);低剂量花椒毒酚组大鼠血清中IL-1β水平显著低于模型组(P<0.05);高剂量花椒毒酚组大鼠血清及颈椎间盘关节液中IL-1β水平均显著低于低剂量花椒毒酚组(P<0.05)。模型组大鼠血清及颈椎间盘关节液中TNF-α水平均显著高于假手术组(P<0.05);低剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘关节液中TNF-α水平显著高于假手术组(P<0.05);高剂量花椒毒酚组大鼠椎间盘关节液中TNF-α水平显著低于假手术组(P<0.05);低剂量花椒毒酚组、高剂量花椒毒酚组大鼠血清及颈椎间盘关节液中TNF-α水平均显著低于模型组(P<0.05);高剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘关节液中TNF-α水平显著低于低剂量花椒毒酚组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组和低剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘滑膜组织中NLRP3蛋白相对表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著升高(P<0.05),高剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘滑膜组织中NLRP3蛋白相对表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P<0.05);低剂量花椒毒酚组和高剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘滑膜组织中NLRP3蛋白相对表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著低于模型组(P<0.05);高剂量花椒毒酚组大鼠颈椎间盘滑膜组织中NLRP3蛋白相对表达量显著低于低剂量花椒毒酚组(P<0.05)。结论花椒毒酚可通过抑制大鼠血清及颈椎间盘关节液中的炎症因子IL-1β、TNF-α水平缓解CSM病理进程,减轻CSM症状,其机制可能与抑制大鼠颈椎间盘滑膜组织中NLRP3蛋白水平及下调NF-κB信号通路磷酸化有关。

川芎嗪与丁苯酞及花椒毒醇拼合衍生物的合成及抗凝活性研究

为获得具有优异抗血小板凝集活性的新化合物,以丁苯酞、川芎嗪为起始原料,经硝化、还原、桑德迈尔反应、酯化和醚化反应合成了9个川芎嗪与丁苯酞、花椒毒酚拼合衍生物。目标化合物结构经~1H-NMR、C-NMR和HRMS确证。并采用Born比浊法初步测试了化合物对二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)所诱导的血小板凝集的抑制活性,结果显示化合物2f(IC_(50)=1.39 mmol·L^(-1))、2g(IC_(50)=1.15 mmol·L^(-1))、2h(IC_(50)=1.06 mmol·L^(-1))和2i(IC_(50)=1.13 mmol·L^(-1))对ADP诱导的血小板凝集具有一定的抑制活性,优于先导化合物川芎嗪(IC_(50)=3.37 mmol·L^(-1))和丁苯酞(IC_(50)=1.67 mmol·L^(-1))。化合物2f(IC_(50)=0.81 mmol·L^(-1))、2g(IC_(50)=0.54 mmol·L^(-1))、2h(IC_(50)=0.35 mmol·L^(-1))和2i(IC_(50)=0.99 mmol·L^(-1))对AA诱导的血小板凝集具有优良的抑制活性。可见,将川芎嗪与丁苯酞、花椒毒酚通过酯/酰胺键拼接可显著提高其抗血小板凝集活性。

花椒毒素通过死亡受体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨花椒毒素对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖抑制作用,并从死亡受体途径对其进行机制研究。方法:不同浓度花椒毒素作用于胃癌SGC-7901细胞48h后,MTT法检测花椒毒素对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258染色及Annexin V-FITC/PI双染法观察花椒毒素诱导细胞凋亡的形态学变化和早中晚期凋亡的区别;流式细胞术检测死亡受体及其配体Fas/Fas L、DR5/TRAIL及Bid蛋白,Caspase-8检测试剂盒检测Caspase-8活性。结果:花椒毒素呈剂量依赖性抑制SGC-7901细胞的增殖,IC50为75.6μg/ml;花椒毒素作用后贴壁细胞减少,凋亡小体的数量增加,且呈剂量依赖性;给药48h后,DR5/TRAIL的表达升高,在一定浓度范围内Fas/Fas L蛋白的表达升高,Caspase-8的活性增强,Bid蛋白活化增多。结论:花椒毒素通过上调DR5/TRAIL的表达,在一定浓度范围内上调Fas/Fas L蛋白的表达,启动死亡受体途径,促进Caspase-8的活化,进而激活下游效应因子;活化的Caspase-8可激活Bid蛋白,进入线粒体发挥作用,可能是花椒毒素诱导SGC-7901细胞凋亡的途径之一。

花椒毒素纳米球对PUVA疗法光反应毒性影响的研究

目的设计制备皮肤外用花椒毒素纳米球,探讨花椒毒素纳米球对PUVA疗法光反应毒性的影响,以期优化外用PUVA疗法。方法采用溶剂置换-界面聚合物沉积法制备花椒毒素纳米球,筛选并优化花椒毒素纳米球的处方组成,优化后的纳米球在人工半透膜中考察其体外释放特性,并采用补骨脂素类化合物与DNA的反应模型考察其光反应效率。结果制备并优化后的花椒毒素纳米球其平均粒径为109nm,粒径分布度小于0.1,Zeta电位<-20mV,包封率为65.8%。在体外人工半透膜中的释放特性表明,相比Meladinine溶液,该花椒毒素纳米球具有良好的释放性能。花椒毒素制备成纳米球后,在与胸腺嘧啶的混合反应体系中的光反应速率明显有所降低,能起到控释的效应。结论花椒毒素纳米球有望能降低PUVA疗法的光反应毒性,从而成为改善PUVA疗法的新型制剂。

基于计算机虚拟技术研究花椒毒素及其同分异构体对细胞色素P450的抑制作用差异

目的研究花椒毒素及其同分异构体对药物代谢酶细胞色素P450(CYPs)的抑制差异。方法采用计算机虚拟技术研究花椒毒素及其同分异构体香柑内酯、异佛手柑内酯与6种CYPs酶(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6)的相互作用;采用Amber(ff99SB)软件进行花椒毒素、香柑内酯、异佛手柑内酯与CYP2A6的动力学模拟研究;采用"Cocktail"药物探针法进行验证,分别测定这3种同分异构体对人肝微粒CYPs酶活性的影响,以及对CYP2A6与CYP1A2的半数抑制浓度(IC50)。结果计算机模拟技术结果显示,花椒毒素、香柑内酯、异佛手柑内酯对6种CYPs结合能力不同,对CYP2A6的结合能力差异明显。分子对接、分子动力学结果表明,花椒毒素与CYP2A6形成的氢键ASN297∶HD22-M∶O4是花椒毒素与CYP2A6结合过程中最重要的且稳定的氢键,香柑内酯与ASN297产生的分子间氢键稳定性低于花椒毒素体系,异佛手柑内酯在动力学中所产生的氢键均不稳定;受体活性口袋中疏水性氨基酸与口袋形状互补是促成配体受体结合的重要因素。"Cocktail"药物探针法表明,花椒毒素、香柑内酯、异佛手柑内酯对CYPs均具有不同程度的抑制作用,其中对CYP1A2具有显著抑制作用,相对剩余酶活力分别为2.67%、4.64%、13.58%,其IC50分别为1.42、2.29、5.12μmol/L;对CYP2A6的抑制作用存在差异,相对剩余酶活力分别为8.10%、38.91%、74.98%,其IC50值分别为3.89、44.03、103.30μmol/L。结论花椒毒素、香柑内酯、异佛手柑内酯对CYP1A2具有明显的抑制作用,对CYP2A6的抑制效果存在明显差异。甲氧基的取代位置与呋喃环骈合的位置对3种化合物与CYP2A6结合影响较大,其中CYP2A6活性口袋中ASN297是蛋白受体与配体结合的关键氨基酸残基。

LC-MS/MS技术同时测定滋心阴口服液中6种化学成分

目的:建立HPLC-ESI-MS方法同时测定滋心阴口服液(北沙参、赤芍、麦冬、三七)中6种化学成分。方法:采用多反应监测(MRM)模式同时监测4种香豆素类和2种苷类成分。ESI源,正、负离子同时检测,源喷射电压分别为5 500 V和-4 500 V,离子源温度为650℃。6种被测成分的监测离子对分别为479.1/121.0(芍药内酯苷)、525.2/449.1(芍药苷)、217.1/202.1(花椒毒素)、187.2/131.1(补骨脂素)、247.1/217.0(异茴芹内酯)和217.1/202.1(佛手柑内酯)。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱,流动相为甲醇-0.1‰甲酸,梯度洗脱,分析时间7.5 min。采用所建立的方法对4批滋心阴口服液进行了测定。结果:6种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,平均加样回收率为91.7%～108.7%,精密度RSD为1.1%～3.0%。结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于滋心阴口服液中芍药内酯苷、芍药苷、花椒毒素、补骨脂素、异茴芹内酯和佛手柑内酯的含量测定。除芍药苷外,其它5种成分均为滋心阴口服液中首次测定。

明日叶中5种成分同时测定和挥发性成分分析

目的通过HPLC法测定明日叶Angelica keiskei Koidzumi中异补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、异虎耳草素、北美芹素和花椒毒素的含有量,固相微萃取（SPME）-GC-MS法分析其中挥发性成分。方法该植物甲醇提取液的HPLC分析采用GL Sciences色谱柱（5μm,4.6 mm×250 mm）;流动相乙腈-水,梯度洗脱;检测波长314 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温28℃。GC-MS分析采用Agilent 19091S-433：93.92873 HP-5MS 5%Phenyl Methyl silox-60℃-325℃（325℃）色谱柱（30 m×250μm×0.25μm）;柱温50℃;进样口温度250℃;载气体积流量1.0 m L/min;扫描范围15~500 amu。结果 5种成分在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.997 2）,平均加样回收率为97.78%~102.25%（RSD〈2.25%）。明日叶中有11种挥发性成分,9种是萜烯类,总相对含有量达96.45%。结论该方法准确可靠,可为明日叶的质量控制提供参考。

8-甲氧基补骨脂素的结构简化类似物的合成

鉴于花椒毒素有钙离子拮抗作用,根据结构特征,我们对其结构进行了简化,合成了5个化合物。有待药理筛选之后,对其构效关系进行研究。

8-甲氧基补骨脂素合成工艺的改进

8-甲氧基补骨脂素是我们首次从白花前胡中分离得到的化合物,经药理实验证明有钙离子拮抗作用。我们以邻苯三酚为原料,对其全合成进行了研究,在考查有关文献条件的基础上,对一些反应进行了工艺改进。

蛇床子化学成分的研究(Ⅱ)

从蛇床Caidium monnieri(L. )Cuss.果实的醇提物中又分得2个化合物,鉴定为花椒毒素(xanthotoxin)和欧芹属素乙(imperatorin)。动物试验均有平喘作用。