Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p<0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p<0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。

2-甲氧基雌二醇诱导骨髓瘤细胞分化的分子机制研究

目的研究2-甲氧基雌二醇(2ME2)诱导骨髓瘤细胞系分化的分子机制。方法应用细胞形态学方法、流式细胞术分析、ELISA法和RT-PCR方法,观察2ME2对于骨髓瘤细胞系LP-1、CZ-1、NCI-H929细胞分化的影响,同时检测细胞分化时X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA的改变情况。继而采用XBP-1、Blimp-1、pax-5硫代反义寡核苷酸(ASODN)作为干预手段,观察其对于2ME2诱导骨髓瘤细胞系分化作用的影响及mRNA水平的变化。结果2ME2可诱导骨髓瘤细胞系LP-1、CZ-1、NCI-H929细胞向成熟阶段分化,伴随着细胞分化的过程XBP-1mRNA的表达水平上调。XBP-1ASODN和Blimp-1ASODN可以部分抑制2ME2促骨髓瘤细胞系分化作用,而pax-5ASODN可以加强2ME2促骨髓瘤细胞系分化作用。经pax-5ASODN作用72h,经形态学观察,细胞向成熟阶段分化,表现为细胞胞核缩小,胞浆丰富,核浆比例下降,核仁减少或消失,核染色质变粗、变密;细胞表面标志CD49e表达率增高;同时细胞分泌轻链蛋白升高。经Blimp-1ASODN作用72h后,pax-5mRNA水平显著升高;而XBP-1mRNA水平下降。结论2ME2可诱导骨髓瘤细胞系LP-1、CZ-1、NCI-H929细胞向成熟阶段分化,伴随着细胞的分化XBP-1mRNA的表达水平上调。Blimp-1可通过抑制pax-5mRNA的表达上调XBP-1mRNA的表达水平,促进骨髓瘤细胞分化。