磁共振扩散峰度成像评估荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤乏氧及放疗效果

目的探讨磁共振扩散峰度成像(DKI)参数评估鼻咽癌裸鼠移植瘤乏氧和放疗疗效的应用价值。材料与方法构建裸鼠CNE-1(放射不敏感)和CNE-2(放射敏感)系鼻咽癌移植瘤模型,并分组进行分割照射,对每组进行MRI-DKI扫描。检测移植瘤乏氧相关因子(HIF-1α和VEGF)的表达,并测量DKI参数(D和K)值,观察并比较不同放射敏感性移植瘤放疗过程中各参数的变化以及DKI参数与乏氧相关因子之间的相关性。结果CNE-1和CNE-2移植瘤在放疗期间D值增高[(1.42±0.21)~(1.70±0.02)×10^(-3)mm^(2)/s、(1.32±0.07)~(2.24±0.10)×10^(-3)mm^(2)/s;F=4.647、162.360,均P<0.01],而K值降低(0.86±0.06~0.65±0.05、0.95±0.04~0.29±0.02;F=18.903、261.487,均P<0.001)。CNE-1系移植瘤中HIF-1α和VEGF的表达均增加(HIF-1α:1.0±0~5.79±2.35、60.52±4.55~166.20±24.55,VEGF:1.0±0~4.17±1.88、77.47±6.03~165.51±39.37;F=173.432、265.687、198.682、152.419,均P<0.001),CNE-2系移植瘤HIF-1α和VEGF表达先增加,中间下降,最后再增加。CNE-1中D值的变化与HIF-1α、VEGF呈正相关(r=0.598~0.618,均P<0.001);而CNE-2与HIF-1α和VEGF的相关性较弱(r=0.193~0.582);K值的变化与HIF-1α和VEGF水平呈负相关(r=-0.837~-0.477,均P<0.01)。CNE-2中仅K值与HIF-1α和VEGF相关。结论DKI具有早期检测肿瘤乏氧和放疗疗效的潜在能力,其中K值比D值的应用价值更大。

应用于牙槽嵴保存术的常用生物材料研究进展

拔牙后,拔牙窝的牙槽骨吸收可能为后期的种植或修复治疗带来一定的困难。牙槽嵴保存术(alveolar ridge preservation,ARP)是保存牙槽嵴骨量的重要技术之一,能最大限度地减少拔牙后牙槽嵴和软组织的萎缩,降低后期种植体植入时进一步软硬组织增量的概率,从而改善修复效果。近年来应用于ARP的生物材料不断增多,因此归纳总结常用生物材料的类型、特性、研究现状、优缺点、临床疗效等,对其临床应用具有指导意义。目前异种骨、可吸收屏障膜和自体血小板浓缩物在ARP中应用较多,总体上具有较好的临床效果。也有多种材料联合应用的报道。随着新材料、新技术的不断发展,需要高质量的临床试验来进一步验证各种生物材料应用于ARP的长期效果。

新绿原酸抑制血管生成的研究

目的考察新绿原酸(5-caffeoylquinic acid,5-CQA)对血管生成的影响。方法应用人脐内皮细胞(HUVEC)、大鼠动脉环模型和转基因血管荧光斑马鱼模型考察5-CQA对血管生成的抑制作用。同时建立肿瘤细胞斑马鱼移植瘤模型,考察5-CQA对肠下静脉(subintestinal vein,SIV)生成的作用。结果5-CQA在320μmol·L^(-1)及以下浓度对HUVEC的增殖无明显影响,5-CQA能够抑制HUVEC体外迁移及细胞中VEGF、bFGF mRNA的表达;与对照组比较,56和112μmol·L^(-1)的5-CQA具有显著抑制大鼠动脉环微血管生成的作用(P<0.05);在斑马鱼血管荧光模型中56和112μmol·L^(-1)的5-CQA具有显著抑制24 h斑马鱼节间血管(intersegmental vessel,ISV)生成的作用;同时5-CQA对斑马鱼移植瘤的肠下静脉生成具有明显抑制作用(P<0.05)。结论5-CQA具有抑制血管生成的作用,其作用机制与抑制VEGFR2受体的表达有关。

患者源性非小细胞肺癌异种移植模型的建立及个体化治疗策略研究

目的通过将患者非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床手术标本接种于BALB/c裸小鼠,建立相应的移植瘤模型,为肺癌患者个体化治疗药物的筛查和临床前疗效的评估提供理想的动物模型。方法收集患者非小细胞肺癌手术标本并将其植入裸鼠体内建立患者源性异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,分析病理组织学形态,检测人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,以及潜在靶标单胺氧化酶A(monoamineoxidase A,MAOA)的表达。进一步在此患者源性NSCLC异种移植模型中评估靶向药、临床一线化疗药物顺铂的抗肿瘤功效。结果成功建立了患者源性的NSCLC异种移植瘤模型,该模型保留了源肿瘤组织病理学形态,且EGFR、MAOA呈阳性表达。使用EGFR抑制剂奥希替尼联合顺铂体现出良好的治疗效果;此外,MAOA抑制剂氯吉林也具有良好的抗肿瘤潜能,与顺铂联合治疗效果更加显著。结论建立了NSCLC异种移植模型,保留了原发肺癌的分子特征,可以作为探索肿瘤个体化治疗方案的有效工具。

沙利度胺联合三氧化二砷腹腔注射对肝癌细胞SMMC7721移植瘤生长的影响及机制

目的观察沙利度胺(Tha)联合三氧化二砷(AsT)对肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能作用机制。方法将35只雄性BALB/c裸鼠随机分为7组各5只,均于颈部皮下接种人肝癌细胞株SMMC7721细胞悬液(密度为5×107/mL)0.2 mL,其后按如下方法处理:高、低剂量Tha组分别腹腔注射Tha 25、2.5 mg/kg,AsT组腹腔注射AsT 2.5 mg/kg,高、低剂量Tha联合AsT组分别同前联合给予Tha、AsT,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(CTX)20 mg/kg,阴性对照组腹腔注射生理盐水20 mL/kg,均连续给药4周。观察各组裸鼠皮下移植瘤体积变化及裸鼠行动、对外界刺激的反应;用药结束后处死裸鼠,取部分瘤组织采用RT-PCR法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,免疫组化法检测Bax、Caspase-3表达。结果裸鼠移植瘤成瘤率100%,瘤体积在高剂量Tha联合AsT组<低剂量Tha联合AsT组<高剂量Tha组<低剂量Tha组<AsT单药组<阳性对照组<阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05);移植瘤组织VEGF mRNA表达变化规律同上;移植瘤组织Bax、Caspase-3表达在高剂量Tha联合AsT组>低剂量Tha联合AsT组>AsT单药组>高剂量Tha组>低剂量Tha组>阳性对照组>阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 Tha联合AsT对SMMC 7721移植瘤的生长具有显著抑制作用,效果优于两单药;机制分别与通过下调VEGF mRNA表达抑制肿瘤血管生成、上调Bax及Caspase-3蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡相关。

解毒消癥饮和扶正抑瘤方对肝癌移植瘤小鼠外周血中VEGF的影响

目的:探讨解毒消癥饮和扶正抑瘤方对小鼠肝癌移植瘤血管生成的抑制作用。方法:40只ICR小鼠随机分为A组、B组、C组及D组,造模给药后20d采瘤、取血,计算抑瘤率及测定外周血中VEGF表达。结果:B组瘤重明显小于A组(P<0.05),抑瘤率为19%;A组和B组VEGF表达量均高于C、D两组,四组比较差异具有显著性(P<0.01):进一步两两比较表明,B组与A、C、D组之间差异显著(P<0.01);A与C、D组之间差异显著(P<0.01)。结论:解毒消癥饮和扶正抑瘤方影响小鼠肝癌移植瘤的VEGF表达。

RNA干扰Tb人舌癌细胞整合素连接激酶基因表达可抑制移植瘤生长

目的研究对Tb舌癌细胞的整合素连接激酶(ILK)进行特异性siRNA沉默后,下游信号分子Akt、GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的变化。方法建立特异性si ILK表达载体和无同源性的对照载体,通过Lipofectamine 2000介导稳定转染人舌鳞癌Tb细胞,然后将Tb、Tb vector和Tb silk 3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤大小和质量,对裸鼠肺及瘤组织行常规病理学检查,用免疫荧光技术检测癌细胞的p-Akt和p-GSK3β等的表达,并对瘤组织内血管生成情况进行观察。结果 Tb组、Tb vector组肺组织均发现自发性转移瘤,Tb si ILK组肺组织未发现自发性转移瘤;Tb si ILK组移植瘤细胞形态较其他二组体积减小,核分裂相较少,核质比例缩小;Tb si ILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他二组均明显下降;Tb si ILK组移植瘤质量(1.68±1.35)g较Tb组(3.58±1.04)g与Tb vector组(3.64±0.65)g分别降低了53.0%和53.8%(P<0.05);Tb si ILK组移植瘤血管[(5.6±2.2)/视野]生成较Tb组[(15.3±2.3)/视野]和Tb vector组[(14.6±1.4)/视野]也明显减少(P<0.05)。结论特异性ILK表达沉默抑制Tb舌癌移植瘤的血管生成和瘤细胞增殖,可能与其抑制下游信号传导分子Akt及GSK3β的磷酸化有关,提示ILK有望成为肿瘤治疗的靶基因。

奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究

背景与目的:生长抑素类似物奥曲肽可抑制肝癌的生长,但能否使其坏死、获得更好的抗肿瘤效果呢?本研究旨在观察奥曲肽在体内、外对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨其致肿瘤坏死的机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测体外HepG2细胞的增殖,建立裸鼠肝癌HepG2细胞原位移植瘤模型,奥曲肽组裸鼠皮下注射奥曲肽100μg/(kg·d);对照组皮下注射相同体积的生理盐水,连续用药8周。组织学评估肿瘤坏死程度,免疫组化检测移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,Westernblot和免疫组化检测生长抑素受体2(SSTR2)的表达。结果:奥曲肽(0.1～1000nmol/L)作用24h,不影响HepG2细胞增殖。奥曲肽组裸鼠肝癌移植瘤重[(7.15±2.96)g]高于对照组[(4.21±3.11)g],移植瘤坏死体积[(81.86%±0.05)%]大于对照组[(43.75±0.06)%],两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组明显不同的是,奥曲肽组移植瘤中未见VEGF表达。两组移植瘤组织血窦中SSTR2表达无显著性差异(P>0.05)。结论:在肝癌细胞活跃增殖条件下,奥曲肽通过移植瘤血窦中SSTR2介导,仅仅抑制肿瘤血管生成,可致裸鼠肝癌显著坏死的良好效应。

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。

腺病毒介导的ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

表皮生长因子受体信号通路在人子宫内膜癌移植瘤孕激素耐药机制中的作用

目的建立人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型,探讨表皮生长因子受体(EGFR)下游信号通路在子宫内膜癌孕激素耐药机制中的作用。方法分别利用人子宫内膜癌孕激素敏感型Ishikawa细胞株和孕激素不敏感型Ishikawa-pLWERNL细胞株制备裸鼠皮下移植瘤模型(每组18只);成瘤后,分别将接种Ishikawa细胞株和接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠各自分成3组(每组6只),分别给予甲羟孕酮(MPA组)、吉非替尼(吉非替尼组)、生理盐水(对照组)。疗程结束后称取各组肿瘤湿重,采用Western blotting法检测肿瘤组织中EGFR、孕激素受体B(PR-B)、ERK1/2、p-ERK1/2、AKT及p-AKT蛋白的表达。结果在接种Ishikawa细胞株的裸鼠中,MPA组、吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,分别减轻43.0%和31.5%,差异有统计学意义(P均<0.05)。在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠中,吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,减轻35.7%,差异有统计学意义(P<0.05);而MPA组移植瘤湿重与对照组相比,减轻2.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤EGFR蛋白表达明显高于接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤(P<0.05),而PR-B蛋白表达则明显低于接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤(P=0.000)。接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中,MPA组PR-B蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),而吉非替尼组与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤中,各组PR-B蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中,吉非替尼组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达均低于对照组和MPA组,差异有统计学意义(P<0.05);而在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤中,吉非替尼组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达低于对照组,MPA组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论在接种孕激素不敏感型Ishikawa-pLWERNL细胞株产生的移植瘤中,过表达的EGFR可下调PR-B蛋白表达,而对MPA不敏感;EGFR受体酪氨酸激酶拮抗剂吉非替尼可有效抑制p-ERK1/2和p-AKT的表达,尤其对接种Ishikawa-pLWERNL细胞株产生的移植瘤效果更显著。

苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织VEGF、CD31表达的影响和意义

目的分析苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达的影响及临床意义。方法建立40只人肝癌裸鼠模型,随机分为4组(对照组、苦参素组、顺铂组、联合组),采用腹腔注射方式给药,给予对照组裸鼠注射生理盐水,给予苦参素组裸鼠注射苦参素,给予顺铂组大鼠注射顺铂,给予联合组裸鼠注射苦参素和顺铂,给药结束后第15天将4组裸鼠处死,取皮下移植瘤组织,对比4组抑瘤率,采用免疫组织化学染色法检测4组裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达情况。结果联合组裸鼠的肿瘤体积小于其他3组裸鼠,差异具有统计学意义(P<0.05)。VEGF阳性率检出率为20.00%,低于苦参素组的80.00%、顺铂组的70.00%、对照组的100.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。联合组裸鼠的CD31阳性率检出率为30.00%,低于苦参素组的90.00%、顺铂组的70.00%、对照组的100.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苦参素与顺铂合用能够抑制人肝癌皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达,延缓肿瘤生长。

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响。方法将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6+27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6+27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型。通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(mi-crovessel density,MVD)改变。结果C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P<0·05)。A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色。C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P<0·05)。C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P<0·05)。VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0·810,P<0·01)。结论应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关。

温郁金对VEGF和MVD在人胃癌裸小鼠移植瘤中表达的研究

目的 研究温郁金对人胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用和对血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD)的影响。方法 采用人胃癌SGC7901细胞株种植裸小鼠皮下建立胃癌移植瘤模型。自肿瘤种植后,待肿瘤生长到2mm时开始给药,每日2次,连续7周,每周测量瘤体的大小。第7周处死动物,测定肿瘤重量,免疫组化ElivisionTMplus法测定VEGF及肿瘤内MVD。结果 温郁金治疗组瘤重和体积明显低于对照组,VEGF表达的程度和MVD计数明显低于对照组。结论 温郁金对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,可下调瘤灶中VEGF的表达,减少肿瘤灶内的MVD。

天然14肽生长抑素联合5-Fu对胃癌移植瘤的抑制作用

目的观察14肽生长抑素(SST-14)及其联合5-Fu对BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤生长抑制及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法构建BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤模型,随机分为对照组、SST-14组、5-Fu组、联合组,腹腔注射药物治疗3周后处死裸鼠获取肿瘤组织。测量瘤体重量,计算抑瘤率;免疫组化及Western blot检测瘤组织VEGF的表达。结果其他三组较对照组均可抑制肿瘤生长,联合组较SST-14、5-Fu单纯用药组抑制作用显著(P<0.05)。免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,其他三组瘤组织VEGF表达下降(P<0.05);其中联合组较SST-14组、5-Fu组显著下降(P<0.05)。结论 14肽生长抑素联合5-Fu能够有效抑制不同分化程度胃癌细胞移植瘤生长,且优于单纯用药组,两药具有协同抑制作用,可能通过下调VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成。

贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤免疫功能及血管内皮细胞生长因子的影响

目的探究不同剂量贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤免疫功能及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)的影响。方法选择雌性Balb/c裸鼠40只为研究对象,随机分为对照组、模型组、贝伐单抗高剂量组、贝伐单抗低剂量组各10只。模型组、贝伐单抗高剂量组、贝伐单抗低剂量组采用人胃癌细胞BGC-823接种到实验鼠皮下组织建立裸鼠模型,高剂量组用10 mg/kg贝伐单抗腹腔注射治疗,低剂量组用5 mg/kg腹腔注射,模型组与对照组注射等量生理盐水,4周后脱颈处死小鼠,比较肿瘤组织重量与抑瘤率、免疫功能、VEGF与微血管密度。结果贝伐单抗干预组平均瘤重明显低于模型组(P<0.05);贝伐单抗高剂量组平均瘤重明显低于模型组,抑瘤率明显高于低剂量组(P<0.05);贝伐单抗干预组血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量明显高于模型组(P<0.05);高剂量贝伐单抗组血清IL-1、IL-2、TNF-α明显高于低剂量贝伐单抗组(P<0.05);贝伐单抗干预组VEGF、微血管密度(MVD)明显低于模型组(P<0.05);贝伐单抗高剂量组VEGF、MVD明显低于低剂量组(P<0.05)。结论贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤有明显的抑制作用,可能与增强免疫功能、抑制抗VEGF等机制相关,并呈现一定的剂量依赖性。

hVEGF siRNA抑制A549细胞在裸鼠移植瘤的早期生长及血管新生

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(human vascular endothelial growth factor,hVEGF)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对A549细胞裸鼠移植肿瘤生长以及对鸡胚尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)上诱导新生血管的影响。方法:分别构建3个表达不同特异性hVEGF siRNA序列的质粒载体,与表达无关序列siRNA质粒载体分别转染A549细胞,用ELISA与realtime RT-PCR选出抑制hVEGF效果最佳的hVEGF siRNA质粒。G418筛选出稳定表达抑制效果最佳的hVEGF siRNA和表达无关序列siRNA的A549细胞,与未转染的A549细胞分别注射于裸鼠皮下,观察3组细胞在裸鼠皮下成瘤及肿瘤生长的速度。鸡胚尿囊实验:孵育至第9天的白皮受精种蛋随机分为4组,分别在鸡胚尿囊膜表面加未培养过A549细胞的DMEM培养液(阴性对照组),未转染的A549细胞培养上清液(阳性对照组),转染hVEGF siRNA的A549细胞培养上清液(hVEGF siRNA组),转染无关序列siRNA的A549细胞培养上清液(无关序列siRNA组),继续孵育48h,取固定后的鸡胚绒毛尿囊膜于显微镜下计数血管分支点和血管分支长度。结果:hVEGF siRNA使A549细胞表达mRNA水平最大下降70%,分泌hVEGF水平最大下降48%。在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA组比无关序列siRNA组肿瘤平均体积减少58%,肿瘤生长到50mm3的平均时间延迟5.4d,移植肿瘤组织匀浆hVEGF含量降低54%;而肿瘤的倍增时间与肿瘤生长速率差异不显著。在鸡胚尿囊膜实验中,阴性对照组加样液的hVEGF含量为0,hVEGF siRNA组加样液的hVEGF含量约占无关序列siRNA组和阳性对照组的40%～44%;血管分支点计数,hVEGF siRNA组,无关序列siRNA组与阳性对照组比阴性对照组增加45%～55%;血管分支总长度hVEGF siRNA组比阴性对照组增加约53%,无关序列siRNA组和阳性对照组比阴性对照组分别增加约97%及99%。CAM血管图上与阴性对照组比较VEGF siRNA组可见增多的血管分支,阳性对照组和无关序列siRNA组上还可以见血管分支增粗、增长。结论:构建并证实质粒介导的hVEGF siRNA能抑制A549细胞分泌VEGF,从而抑制A549细胞诱导鸡胚尿囊膜的血管新生。在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA能抑制肿瘤早期生长,对肿瘤后期的生长速率无显著抑制。

熊果酸对荷人骨肉瘤裸小鼠移植瘤生长的影响

目的:研究熊果酸(ursolic acid,UA)对荷人骨肉瘤裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制探讨。方法:采用裸小鼠背部皮下注射接种人骨肉瘤MG-63细胞的方法建立荷人骨肉瘤裸小鼠模型并给予不同剂量熊果酸[5、10、20mg/(kg·d)]和顺铂[2mg/(kg·d)]进行干预治疗,疗程5天。称取瘤重并计算抑瘤率,HE染色观察肿瘤组织形态结构改变。TUNEL染色检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)观察肿瘤组织中caspase-3、Bax、bcl-2蛋白表达并进行半定量分析。结果:较模型组,熊果酸干预组荷人骨肉瘤裸小鼠移植瘤呈现细胞皱缩、片状坏死等病理性改变,凋亡细胞数量明显增多、AI显著升高,瘤体重量显著减轻、抑瘤率显著升高,caspase-3和Bax蛋白表达显著上调,bcl-2蛋白表达显著下调,Bax/bcl-2比值显著升高,熊果酸上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:熊果酸可能通过促进肿瘤细胞凋亡而对荷人骨肉瘤裸小鼠移植瘤生长起到一定的抑制作用,其作用机制可能与熊果酸能够调节凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、bcl-2)并提高Bax/bcl-2比值有关。

眼睑鳞状细胞癌移植瘤模型建立及其VEGF的表达研究

目的建立眼睑鳞状细胞癌(SCC)移植瘤模型并研究其血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法BALB/c裸鼠40只,随机平均分为实验组和对照组,实验组裸鼠右上睑皮下接种Tca8113细胞建立眼睑SCC移植瘤,接种后第15、30 d,应用酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测所有裸鼠血清中VEGF蛋白水平,并采用免疫组织化学法检测实验组移植瘤组织和对照组正常眼睑组织中VEGF的表达。结果实验组裸鼠右上睑均有SCC移植瘤形成,接种后第15、30 d,实验组裸鼠血清中VEGF质量浓度(188.6 pg/m l±79.93 pg/m l和200 pg/m l±75.28 pg/m l)均显著高于对照组(94.8 pg/m l±31.41 pg/m l和90.4 pg/m l±28.62 pg/m l)(P<0.01),两组间VEGF染色分数经统计学分析也存在显著差异(2.6±0.16和2.38±0.19,0.64±0.18和0.52±0.15)(P<0.01)。结论Tca8113细胞裸鼠眼睑皮下接种是建立眼睑SCC移植瘤的可行方法,靶向VEGF的基因治疗可望为眼睑SCC治疗提供新的途径。

碱性成纤维细胞生长因子/重组异种骨临床应用研究的初步报告

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和重组异种骨 (RBX)复合 (bFGF/RBX)后的临床应用。方法 :将bFGF/RBX用于脊柱后路融合 2例、股骨骨不连 2例、骨缺损修复 5例、成骨不全弯曲畸形截骨矫形 1例 ;于术前和术后 10d、 4、 8、 12周查静脉血Ca2 + 、p3 - 、AKP及摄片。结果 :(1)除 2例AKP值于术前、后变化显著外 ,其余 8例病例的AKP值及全部病例的Ca2 + 、p3 - 值均正常 ;(2 )X线平片显示 :骨痂生长丰富、愈合时间提前 ;(3 )无排异反应、感染 ,术后热均于术后 4～ 5d至正常。结论 :bFGF/RBX的成骨能力强 ,能缩短愈合时间 ,是组织相容性好、骨源丰富且安全的生物复合材料。