新蒲饮联合质子泵抑制剂对幽门螺杆菌感染相关性胃炎中TLR-2/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)相关性胃炎小鼠模型,探讨新蒲饮与奥美拉唑联用对幽门螺杆菌的根除效果以及对Toll样受体2(Toll-liκe receptor-2,TLR-2)/髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κappaB(Nuclear Factorκappa B,NF-κB)信号通路和下游的炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(Interleuκin-1β,IL-1β)的干预机制。方法50只6-8周龄SPF级C57BL/6小鼠(雌雄各半)为研究对象,按随机数字表法标记并按不同性别分笼造模。共分为5组:对照组(正常组、模型组)、新蒲饮组、新蒲饮加奥美拉唑(PPI)组、西药三联组(阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑)。模型组、新蒲饮组、新蒲饮加PPI组、西药三联组进行幽门螺杆菌相关性胃炎造模:适应性饲养1周之后接种幽门螺杆菌菌液,灌胃3次(隔日一次)。定植4周后随机从各组中抽取1只雄鼠和1只雌鼠,用快速尿素酶法以及Giemsa染色法检验造模是否成功。第42天给药组予相应浓度药物灌胃,对照组给予生理盐水灌胃,2次/日,连续2周。灌胃结束4周以后处死所有小鼠。用快速尿素酶法以及Giemsa染色法检测幽门螺杆菌根除率,并在光镜下观察HE染色胃黏膜炎症情况;应用免疫组化技术检测胃组织中TLR-2、MyD88、NF-κB的蛋白含量表达;Western-Blot技术检测胃组织中TLR-2、MyD88、NF-κB、IκB激酶-α(IκK-α)、磷酸化IκB-α(p-IκB-α)蛋白含量表达;qPCR技术检测胃组织中TLR-2、MyD88、NF-κB的mRNA表达水平;最后应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β的表达变化。结果与正常组比较,模型组小鼠幽门螺杆菌根除率降低,胃黏膜组织炎症情况严重,蛋白表达TLR2、MyD88、NF-κB、IκK-α、p-IκB-α以及基因表达TLR2、MyD88、NF-κB和下游炎症因子TNF-α、IL-1β含量升高(P<0.05);与模型组比较,新蒲饮组、新蒲饮加PPI组及西药三联组的幽门螺杆菌根除率升高,胃粘膜组织炎症情况改善,TLR2、MyD88、NF-κB、IκK-α、p-IκB-α以及下游炎症因子TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.05);与新蒲饮组相比,新蒲饮+PPI组、西药三联组的幽门螺杆菌根除率升高,但差异无统计学意义;胃黏膜组织炎症改善,TLR2、MyD88、NF-κB、IκK-α、p-IκB-α以及下游炎症因子TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.05);新蒲饮加PPI组与西药三联组幽门螺杆菌根除率差异无统计学意义(P>0.05),胃黏膜组织炎症情况大致相同,TLR2、MyD88、NF-κB、IκK-α、p-IκB-α以及下游炎症因子TNF-α、IL-1β含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论1、幽门螺杆菌相关性胃炎发生的机制可能与TLR-2/MyD88/NF-κB信号通路的激活及下游炎症因子TNF-α、IL-1β释放相关;2、新蒲饮具有杀幽功效,与PPI合用杀幽效果更佳,堪比西药三联,初步猜测可能与PPI抑酸功能有关。3、新蒲饮以及新蒲饮加PPI可能通过抑制TLR-2/MyD88/NF-κB信号通路的激活及TNF-α、IL-1β的释放而发挥其抗炎作用,而新蒲饮联合PPI效果更加显著。

新蒲饮联合奥美拉唑对Hp相关性胃炎及TLR4/JAK2/STAT3通路的影响

目的探讨新蒲饮联合奥美拉唑对Hp相关性胃炎的疗效研究及对TLR4/JAK2/STAT3通路影响。方法本研究将50只C57BL/6(B6)小鼠随机分成对照组(10只)和造模组(40只)。利用快速尿素酶法及吉姆萨染色证实Hp感染小鼠模型建立后,将40只造模组小鼠随机分成模型组、新蒲饮组(纯中药组)、新蒲饮联合奥美拉唑组(中西结合组)、阿莫西林+克拉霉素+奥美拉唑肠溶片组(西药组),各组小鼠分别给予相应生理盐水或药物14天。提取小鼠胃组织蛋白做免疫组化和Western Blotting,通过检测TLR4、JAK2及STAT3的表达变化情况,分析不同药物的治疗效果。结果通过Hp连续灌胃后,吉姆萨染色发现模型组明显有Hp堆积成簇,提示造模成功。同时,本研究发现模型组相比对照组而言,TLR4、p-JAK2和p-STAT3表达均明显升高。用药后,与模型组相比,纯中药组、中西结合组和西药组Hp感染明显下降,且Western Blotting和免疫组化均提示TLR4、p-JAK2和p-STAT3表达有不同程度下降,JAK2和STAT3总蛋白在上述几组中未发现有明显改变。结论新蒲饮联合奥美拉唑可以通过TLR4/JAK2/STAT3通路治疗Hp相关性胃炎。