Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。

民猪Y-box结合蛋白基因的克隆、表达以及冷刺激对其表达方式的影响

为了探讨Y-box结合蛋白(YB1)是否参与哺乳动物的冷适应反应,本研究采用RT-PCR和Real-time PCR的方法克隆测序了民猪YB1基因的序列,检测了该基因在大肠、腿肌、肺脏、脂肪、心脏、脾脏和肝脏组织的表达情况,比较了该基因在冷刺激13d后常温组((10±2)℃)和冷刺激组((-20±3)℃)个体的骨骼肌组织内的表达变化。结果表明,民猪的YB1基因完整的CDS区长975bp,编码325个氨基酸,具有1个高度保守的冷休克域,存在多个磷酸化位点,不包含任何跨膜区域,是一种存在于细胞质中的蛋白质。组织表达谱表明YB1基因在所检测的7种组织内均高水平表达。该基因在被冷刺激13d后,在腿肌内的表达水平出现显著下降(P<0.05)。冷刺激造成了YB1基因转录发生了变化。

Y-box结合蛋白-1在胃癌组织中的表达及意义

目的研究Y-box结合蛋白-1(YB-1)在胃癌的不同发展阶段中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学和原位杂交方法检测正常胃组织、肠化生组织、早期胃癌和进展期胃癌组织中YB-1蛋白和mRNA的表达变化。结果在正常胃组织中YB-1蛋白和mRNA无表达;在肠化生组织中可见YB-1阳性染色于胃黏膜上皮细胞中,但表达较弱;在早期胃癌中YB-1表达于全层胃黏膜上皮细胞中,染色较肠化生组织重,而在进展期胃癌中其表达较在早期胃癌中下降。结论 YB-1的升高可能在胃癌的早期发生和发展中起作用。

Y-box结合蛋白功能及对肿瘤发生的影响

Y-box结合蛋白家族成员是一类高度保守的顺式作用元件,广泛存在于原核及真核生物细胞中。它是一种多功能蛋白,与转录调节、翻译调控、mRNA选择性剪接、DNA的修复、细胞增殖和再生等有关。Y-box结合蛋白的氨基酸序列包含3个结构域:氨基酸N末端,亲水结构域C末端,冷休克结构域(coldshockdomainCSD),保守的冷休克结构域决定了Y-box结合蛋白的大部分功能。最近研究发现,定位于细胞核中的YB-1蛋白在局部晚期非小细胞肺癌的预防上可作为新的靶位点,YB-1蛋白还可通过对抑癌基因p53启动子抑制起负调控作用,此外,YB-1蛋白在PI3K/Akt信号通路中也起到重要的作用,这些研究都为肿瘤的治疗提供了新的线索和启示。文章就Y-box结合蛋白功能及其对肿瘤发生的影响等方面进行概述。

Y-box结合蛋白1在肿瘤发生发展进程中的作用

YB-1（Y-boxbinding protein-1）蛋白是Y-box蛋白家族成员之一,YB-1作为一种多功能蛋白,调控多种基因表达,对细胞多种重要功能产生影响。YB-1在转录调控、翻译调节、

Y-box结合蛋白对mRNA的隐蔽作用

本文介绍了Y-box结合蛋白与RNA的结合特征、影响因素以及mRNA隐蔽作用的调节等,分析了Y-box结合蛋白翻译抑制作用的原理和意义。由于Y-box结合蛋白特殊的、高度保守的结构,决定了它们与RNA(或DNA)的结合特征。任何影响Y-box结合蛋白结构的因素都将不同程度地影响其功能。Y-box结合蛋白被认为是生殖细胞和早胚细胞中含量最丰富的蛋白质之一,为“母系”和“父系”mRNP颗粒中的主要成分,在隐蔽mRNA中起重要作用。因而,对Y-box结合蛋白的研究,将对生殖细胞的成熟、早胚发育的分子机制以及母型向台子型过渡等一系列问题的解释都会有帮助。另外,研究范围著扩展到体细胞领域,也将对相关的研究有促进作用。

Y-box结合蛋白的研究进展

Y-box元件是指存在于一些基因的启动子或增强子中的一类顺式调控元件。其核心序列为“CCAAT”。对一些基因启动子中的CCAAT序列进行点突变和基因缺失的实验,证实这个顺式调控元件在基因转录调控中扮演重要角色。自1987年以来,人们从不同种类细胞核内检测到多种能与CCAAT元件结合的因子,如人类组织细胞中的CTF、NPI、YB1、CBP、CP1、CP2、dbp1、dbpB;

Y-box结合蛋白1调控凋亡相关基因在胃癌发生发展中的作用

目的:通过生物信息学分析Y-box结合蛋白(YB)-1在胃癌组织表达水平与相关凋亡基因中的关联,同时分析两者间的调控关系,揭示YB-1在胃癌发生发展中的作用机制。方法:通过Oncomine肿瘤数据库分析YB-1在多个肿瘤类型中的表达情况,并着重分析其在胃癌组织中的水平及预后影响;利用“Cancer Cell Line Encyclopedia, CCLE”数据库分析YB-1共表达基因。通过siRNA技术靶向敲减胃癌细胞中YB-1与相关共表达基因后,流式检测细胞凋亡水平;同时分析细胞增殖侵袭能力。结果:YB-1在多个肿瘤类型中呈高表达状态,且高表达与不良预后存在正相关关系。siRNA抑制YB-1后,细胞凋亡水平升高,增殖能力减弱。结论:胃癌中YB-1水平异常升高,且YB-1可能通过调控共表达相关基因水平影响胃癌的发生、发展。

Y-box结合蛋白-1与增殖细胞核抗原在胃癌组织的表达及与其临床病理特征的相关性

目的探讨Y-box结合蛋白-1(YB-1)与增殖细胞核抗原(PCNA)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化法检测并比较116例胃癌组织(实验组)以及20例癌旁组织(对照组)中YB-1和PCNA的表达,并分析YB-1和PCNA表达与其临床病理特征的相关性。结果实验组YB-1表达阳性81例(69. 83%),PCNA表达阳性72例(62. 07%),另外对照组中YB-1表达阳性4例(20. 00%),PCNA表达阳性3例(15. 00%),2组间YB-1、PCNA的阳性表达差异均有统计学意义(P <0. 01)。胃癌组织中YB-1和PCNA阳性表达与患者年龄、性别无关(P>0. 05),与AJCC分期、分化程度、淋巴结转移及肌层浸润深度有相关性(P <0. 01)。经Spearman相关分析结果显示:YB-1表达与PCNA表达呈正相关性(γ=0. 478,P <0. 05)。结论 YB-1和PCNA均可作为胃癌的肿瘤标志物,联合检测可为胃癌的早期诊断、病理分级提供重要参考依据,也为临床抗肿瘤治疗提供新方向。

Y-box结合蛋白-1和细胞周期蛋白D1在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨Y-box结合蛋白-1(YB-1)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在前列腺组织中的表达水平及临床意义。方法收集122例前列腺癌标本及60例良性前列腺增生标本,采用免疫组化S-P法检测YB-1和cyclin D1蛋白的表达水平;并分析两者与前列腺癌患者临床病理参数的相关性。结果前列腺癌组织中YB-1、cyclin D1表达的阳性率均高于前列腺增生组织,差异有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中YB-1、cyclin D1的表达与PSA水平、临床分期、Gleason评分有关,差异有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中YB-1与cyclin D1的表达呈正相关(r=0.459,P<0.05)。结论前列腺癌组织中YB-1、cyclin D1高表达,且与PSA水平、临床分期、Gleason评分有关。

抗Y-box结合蛋白冷休克域单克隆抗体的制备及其初步应用

固相法合成Y -box结合蛋白冷休克域部分片段“14肽”(H2 N NGYGFINRNDTKED COOH ,简称ND) ,用不同载体蛋白经戊二醛一步法偶联得到免疫抗原 (BSA ND)和检测抗原 (OVA ND) .用免疫抗原免疫BLAB c小鼠 ,经间接法ELISA检测 ,得到对ND有足够免疫应答的小鼠 .采用常规单克隆抗体制备的方法 ,得到 3株能稳定产生和分泌抗ND单抗的克隆细胞株 ,单抗的亚型均为IgM .WesternBlotting结果显示 :该单抗能识别中华大蟾蜍 (Bufobufogar garizans)Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的热稳定Y box结合蛋白p5 4 ,并能识别中华大蟾蜍高、低温卵中一种分子量约为 80kD的蛋白 (简称p80 ) .由于p80在低温卵中含量高于高温卵中 ,推测可能是高温卵和低温卵中差异表达的Y box结合蛋白之一 .

Y-box结合蛋白1与人肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM P糖蛋白的相关性

目的研究Y-box结合蛋白1(YB-1)与人肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM中P糖蛋白(P-gp)的关系,推测其诱导癌细胞产生耐药性的相关机制。方法以浓度梯度递增联合大剂量间断冲击诱导法建立人肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM;运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测YB-1、P-gp在人肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM和相应敏感株mRNA含量;采用Western blotting检测YB-1、P-gp在两种细胞株的表达量;将YB-1 siRNA转染耐药细胞,检测转染前后YB-1和MDR1在mRNA水平和蛋白水平的变化。结果多柔比星对Bel-7402和Bel-7402/ADM的半数抑制浓度(IC50)值分别为(2.23±0.07)和(7.02±0.03)μmol·L^(-1)。耐药组MDR1 mRNA的表达量高于亲本细胞(P<0.01),YB-1 mRNA的表达量也显著高于亲本细胞(P<0.01)。耐药组P-gp表达量高于亲本细胞(P<0.05),YB-1表达量也显著高于亲本细胞(P<0.01)。耐药细胞转染siRNA后YB-1 mRNA、MDR1 mRNA的表达显著降低(P<0.01),YB-1、MDR1蛋白水平较转染前显著降低(均P<0.05)。结论 YB-1表达与P-gp表达密切相关,YB-1与人肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM多药耐药相关。

Y-box结合蛋白1通过细胞外调节蛋白激酶信号通路介导肝癌细胞对索拉非尼耐药

目的探讨Y-box结合蛋白1(YB-1)在肝癌细胞对索拉非尼耐药中的作用及其可能的机制。方法分别构建过表达及敲低YB-1的慢病毒载体,单独或联合索拉非尼刺激人肝癌细胞株HepG2、Huh7细胞。过表达部分实验共计分为4组:过表达对照组(Lv-NC)、YB-1过表达组(Lv-YB-1)、过表达对照联合索拉非尼孵育组(Lv-NC+sorafenib)、YB-1过表达联合索拉非尼孵育组(Lv-YB-1+sorafenib)。敲低部分实验也分为4组:敲低对照组(Lv-shNC)、YB-1敲低组(Lv-shYB-1)、敲低对照联合索拉非尼孵育组(Lv-shNC+sorafenib)、YB-1敲低联合索拉非尼孵育组(Lv-shYB-1+sorafenib)。末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记染色检测细胞凋亡的发生情况,蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的关键蛋白磷酸化(p)-ERK、ERK的蛋白表达水平,并通过ImageJ软件进行定量分析。进行裸鼠皮下成瘤实验,并予索拉非尼治疗,在体内验证YB-1对索拉非尼疗效的影响。2组数据之间的比较采用独立样本t检验;3组及以上数据间的比较应用单因素方差分析。结果索拉非尼可以促进肝癌细胞凋亡的发生,而过表达YB-1抑制细胞凋亡,同时还可以抵抗索拉非尼对凋亡的促进作用;相反,敲低YB-1可促进细胞凋亡,还可以增强索拉非尼对细胞凋亡的诱导作用。此外,索拉非尼孵育可下调p-ERK的水平(HepG2:Lv-NC 0.685±0.143,Lv-NC+sorafenib 0.315±0.168,P<0.05;Huh7:Lv-NC 0.576±0.078,Lv-NC+sorafenib 0.150±0.131,P<0.01),过表达YB-1可抵抗索拉非尼所诱导的p-ERK的降低(HepG2:Lv-NC+sorafenib 0.315±0.168,Lv-YB-1+sorafenib 0.688±0.042,P<0.05;Huh7:Lv-NC+sorafenib 0.150±0.131,Lv-YB-1+sorafenib 0.553±0.041,P<0.05);而敲低YB-1可进一步增强索拉非尼引起的p-ERK下调(HepG2:Lv-shNC+sorafenib 0.911±0.252,Lv-shYB-1+sorafenib 0.500±0.201,P<0.05;Huh7:Lv-shNC+sorafenib 0.577±0.082,Lv-shYB-1+sorafenib 0.350±0.143,P<0.05),并在裸鼠体内得到进一步证实(Lv-shNC+sorafenib 0.812±0.279,Lv-shYB-1+sorafenib 0.352±0.109,P<0.05)。结论YB-1通过ERK信号通路介导肝癌细胞对索拉非尼耐药性的发生。

Y-Box结合蛋白1/锌指蛋白转录因子5轴对前列腺癌细胞成瘤性的影响及其机制

目的探讨Y-Box结合蛋白1(YB-1)通过调控锌指蛋白转录因子5(KLF5)对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。方法采用对照和YB-1短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染感染人前列腺癌细胞株LNCaP,构建对照组和YB-1 KD组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8),EdU染色、克隆形成实验和体内移植瘤实验分析两组细胞的增殖和生长能力。采用荧光定量和蛋白质印迹法(Western blot)分析YB-1的靶基因KLF5 mRNA和蛋白表达水平。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组细胞吸光度(A)值(2.04±0.11)明显高于YB-1 KD组(1.36±0.11),差异有统计学意义(t=10.930,P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(85.41±4.13)%]明显高于YB-1 KD组[(63.34±5.70)%],差异有统计学意义(t=7.680,P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(76.72±5.51)%]明显高于YB-1 KD组[(53.30±4.93)%],差异有统计学意义(t=7.759,P<0.05)。对照组体内成瘤体积[(806.90±60.26)mm3]明显高于YB-1 KD组[(507.39±64.94)mm3],差异有统计学意义(t=10.690,P<0.05)。对照组成瘤重量[(7.01±0.92)g]明显高于YB-1 KD组[(4.80±0.73)g],差异有统计学意义(t=5.942,P<0.05)。对照组细胞KLF5 mRNA和蛋白表达水平(1.27±0.05、1.08±0.14)明显高于YB-1 KD组(0.56±0.11、0.53±0.09),差异有统计学意义(t=14.100、8.191,P<0.05)。结论YB-1蛋白参与前列腺癌细胞的增殖和成瘤效应,主要通过调节KLF5的表达水平来实现。

昆虫y-box蛋白的研究进展

为了全面认识昆虫y-box结合蛋白及其在昆虫上的研究情况,分析了近20年来有关昆虫ybox结合蛋白的研究概况,提供了昆虫y-box结合蛋白的生物学信息,并在昆虫y-box结合蛋白的结构特点、与核酸的结合作用、转录翻译调控等的研究成果基础上,展望y-box结合蛋白今后在昆虫上的可能研究热点或方向。

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P<0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P<0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P<0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。

人类YB-1蛋白在肿瘤研究中的进展

YB-1是一类高度保守的顺式作用调控元件,结合于人类MHC ClassⅡ基因的启动子区,具有诸多功能。目前,越来越多的研究表明,它在恶性肿瘤的形成、发展、预后及治疗中发挥着重要作用。

YB-1与肿瘤发生及治疗

Y-box结合蛋白(Y-box binding protein,YB)是一类广泛存在于从低等到高等多种生物中的蛋白质家族,在体内行使多种生物学功能.大量研究表明,YB-1作为该家族成员之一,与许多重要的生物大分子存在密切联系,并对细胞、组织和机体的生理机能产生重大影响.更为重要的是,YB-1在多种疾病,尤其是恶性肿瘤的发生和发展中也起到十分关键的作用,对癌细胞表型的维持及肿瘤多药耐药性(MDR)的产生具有全方位的影响.以YB-1为作用靶点的新型肿瘤治疗策略可望有效控制癌症患者病情恶化,改善耐药状况.现就对YB-1与肿瘤发生和发展之间关系的研究进展,以及针对YB-1治疗策略的制定作一评述和展望.

PI_3K-Akt信号通路阻抑对结肠癌细胞LS-174T顺铂耐药逆转机制的研究

目的:观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1(Y-Box binding protein-1,YB-1)的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法:采用顺铂(cisplatin,DDP)药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的顺铂耐药细胞系LS-174T/DDP,药物Ly294002阻断PI3K-Akt信号通路传导后,采用Western Blot方法检测耐药肿瘤细胞磷酸化Akt表达水平,电泳迁移改变分析(EMSA)方法检测其核中转录因子YB-1活性的改变,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阻断PI3K-Akt信号通路后,顺铂耐药细胞株中磷酸化Akt蛋白表达水平显著下降,同时其细胞核中YB-1的活性明显降低,且细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:阻断PI3K-Akt信号通路能够提高顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,PI3K-Akt信号通路可能通过激活YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中发挥重要作用.

获得性顺铂耐药的大肠腺癌LS-174T细胞核中YB-1的活性改变及其对P-gp和PCNA转录表达的影响

目的:观察耐药细胞株LS-174T核中YB-1的活性改变及其对P-gp和PCNA转录表达水平的影响,探讨YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中的作用。方法:采用顺铂药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的多重耐药细胞系LS-174T;用EMSA检测耐药肿瘤细胞核中转录因子YB-1活性的改变,半定量RT-PCR检测P-gp和PCNA mRNA表达水平的改变。结果:耐药细胞株核中YB-1的活性明显增加,且P-gp mRNA和PCNA mRNA的表达水平均较非耐药细胞株明显增高(P<0.01)。结论:顺铂耐药细胞株细胞核内YB-1活性增高促进了P-gp和PCNA转录表达水平,它们可能共同参与顺铂导致DNA损伤的修复,在肿瘤耐药机制中发挥重要作用。