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题名基于红色荧光蛋白的酵母双分子荧光互补技术的建立
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作者
宓庆坤
商立民
金超智
原艳芝
王建
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机构
军事科学院军事医学研究院生命组学研究所
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出处
《军事医学》
CAS
CSCD
2023年第3期210-216,222,共8页
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基金
国家重点研发计划项目(2017YFA0505700)。
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文摘
目的在酵母细胞中建立基于酵母增强型红色荧光蛋白(yEmRFP)的双分子荧光互补技术,用于直观地检测蛋白质相互作用。方法利用分子克隆技术将yEmRFP的N端片段(1~159 aa,RN159)和C端片段(160~236 aa,RC160)分别与转录因子Jun和Fos的碱性亮氨酸拉链结构域(bZIP)—bJun和bFos或其缺失突变体bFosΔZip相融合,构建重组质粒,其中bFosΔZip与bJun不存在相互作用,可作为阴性对照组,将重组质粒转化酵母细胞后,通过营养缺陷培养基筛选转化成功的酵母菌落,利用荧光显微镜和流式细胞仪检测酵母中重组yEmRFP蛋白质的荧光信号,判定该技术是否可用于检测蛋白质相互作用。结果成功构建了RN159和RC160与bJun和bFos或bFosΔZip相融合的重组质粒。酵母表达体系中bJun和bFos的相互作用使yEmRFP重新组装为完整荧光蛋白质,通过荧光显微镜检测到强的红色荧光信号,利用流式细胞仪藻红蛋白(PE)通道计数20000个酵母细胞,其中约有25%酵母细胞具有红色荧光;而阴性对照组未检测到荧光信号,同样在流式细胞仪PE通道中未检测到明显的红色荧光信号,表明此体系无自发激活现象。结论成功开发了基于yEmRFP的酵母双分子荧光互补技术,可用于直观、快速检测和筛选蛋白质相互作用。
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关键词
双分子荧光互补
蛋白质相互作用
酵母增强型红色荧光蛋白
酵母
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Keywords
bimolecular fluorescence complementation
protein-protein interaction
yemrfp
yeast
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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