犊牦牛肾周棕色脂肪组织的发育及其产热相关基因的表达分析

棕色脂肪组织(BAT)作为非震颤性产热(NST)的主要产热器官,在新生动物的寒冷适应中发挥重要的作用。为探究犊牦牛肾周BAT的发育及其产热相关基因的表达,本试验采集1日龄、7日龄和30日龄犊牦牛肾周脂肪组织,利用苏木精-伊红染色观察脂肪细胞,利用透射电子显微镜观察脂滴和线粒体的超微结构,利用免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测解偶联蛋白1(UCP1)在脂肪细胞的定位、mRNA和蛋白表达水平,以及脂肪转化因子过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)和过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)基因mRNA表达水平。结果显示,犊牦牛肾周存在2种类型的脂肪细胞,即含有小脂滴和大量线粒体的棕色脂肪细胞以及含有大脂滴和少量线粒体的白色脂肪细胞;与1日龄犊牦牛相比,7日龄和30日龄犊牦牛肾周白色脂肪细胞的面积和密度均显著增加(P<0.05),棕色脂肪细胞的面积和密度均显著降低(P<0.05);不同日龄犊牦牛肾周棕色脂肪细胞和白色脂肪细胞质膜上均有UCP1阳性表达,与1日龄犊牦牛相比,7日龄和30日龄犊牦牛肾周脂肪细胞中UCP1阳性表达强度均显著降低(P<0.05);与1日龄犊牦牛相比,30日龄犊牦牛肾周脂肪组织中BAT产热相关基因(UCP1、PPARα和PGC-1α)mRNA表达水平均显著降低(P<0.05);与1日龄犊牦牛相比,7日龄和30日龄犊牦牛肾周脂肪组织中UCP1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结果表明,出生后犊牦牛肾周棕色脂肪细胞数量逐渐减少而白色脂肪细胞数量逐渐增加,且产热相关基因表达水平逐渐降低。该结果为深入探究犊牦牛寒冷适应机制提供了参考资料。

围产期母体营养调控对犊牦牛生长发育、血清生化及免疫功能的影响

本研究基于高寒牧区牦牛产业母犊培育现状,旨在探究围产期母体营养均衡供给与早期断奶的营养调控方式对犊牛生长发育、血清生化及免疫功能的影响,为牦牛高效养殖提供科学基础。研究选取18头健康、体重相近、胎次为2~4次、预产期相近的妊娠后期麦洼牦牛,随机分为放牧对照组(GF)、营养供给组(SF)、早期断奶组(SW)3个组(n=6),GF组牦牛产前及产后阶段均于天然牧场自然放牧,SF组牦牛在产前30 d至产后90 d按妊娠后期、泌乳早期营养需要以“精料+青干草+放牧”方式给予营养均衡供给,SW组牦牛在营养均衡供给基础上,于产后60 d对犊牛进行早期断奶处理。对GF、SF、SW组牦牛所产犊牛初生重、90 d体重及体尺指标进行测定,并采集犊牛90日龄血清样本,分析不同母体营养调控方式下犊牦牛血清生化、生长相关激素分泌及免疫功能差异。结果表明,SF和SW组犊牛的初生重显著高于GF组(P<0.05);90日龄时,SF和SW组犊牦牛的体重、体高以及胸围均显著高于GF组(P<0.05),SW与SF组之间犊牛体重、体尺无显著差异(P>0.05)。与GF组相比,SF和SW组犊牛血清葡萄糖(GLU)、球蛋白(GLB)、胆固醇(CHO)浓度显著上升(P<0.05);SF组TP水平显著高于GF组(P<0.05)。生长相关激素方面,SF和SW组胰岛素样生长因子I(IGF-Ⅰ)水平显著高于GF组(P<0.05);SW组生长激素(GH)浓度显著高于GF组(P<0.05)。SF、GF组犊牦牛血清分泌型免疫球蛋白A(sIgA)浓度显著高于SW组(P<0.05)。相较于GF组,SF、SW组血清免疫球蛋白A(IgA)水平显著升高(P<0.05),SF组血清免疫球蛋白G(IgG)浓度显著高于GF组(P<0.05)。综上所述,营养均衡供给为妊娠后期和泌乳前期牦牛母体提供了充足的养分,通过增加犊牦牛养分摄入,提升了犊牛初生重、血清糖、氮营养代谢物水平,增加了生长相关激素及免疫球蛋白水平,从而促进了犊牦牛生长发育;早期断奶搭配营养均衡供给方式对犊牦牛生长发育、免疫功能无显著负面影响,并进一步促进生长激素分泌。

青藏高原地区犊牦牛腹泻病原检测与分析

为调查青藏高原地区引起犊牦牛腹泻的主要病原,2021年6月—2022年8月采集青海省、西藏自治区、四川省共21个场的239份腹泻犊牦牛粪便,采用实时荧光PCR方法对A群牛轮状病毒(bovine rotavirus A,BRVA)、牛病毒性腹泻病毒1型(bovine viral diarrhea virus of genotype 1,BVDV-1)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛传染性鼻气管病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、沙门氏菌6种腹泻病原进行了检测。结果显示:239份腹泻样品的个体阳性率为64.44%,场阳性率为42.86%~90.48%;BRVA、BVDV-1、BCoV、IBRV、ETEC、沙门氏菌的个体阳性率分别为28.87%、26.78%、5.44%、28.45%、17.57%、16.32%,青海省样品中BRVA(35.29%)与BVDV-1(30.88%)个体阳性率较高,西藏自治区样品中IBRV(93.75%)与ETEC(75.00%)个体阳性率较高,四川省样品中BRVA(24.46%)、IBRV(22.30%)与BVDV-1(27.34%)个体阳性率较高;混合感染率为62.99%,二重、三重、四重感染率分别为42.86%、15.58%、4.55%,未见五重及以上混合感染,以BRVA、BVDV-1、IBRV与其他病原混合感染为主。结果表明:上述6种病原在青藏高原地区腹泻犊牦牛中广泛流行,不同地区的病原流行情况存在差异,混合感染现象较为普遍,建议加强青藏高原地区BRVA的检测与控制,推进BVDV-1和IBRV灭活疫苗在牦牛中的推广应用。

口服麻杏石甘散对BRD犊牦牛血清指标的影响

研究探讨了麻杏石甘散灌服对犊牦牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的治疗效果及血清中氧化应激指标和炎性指标的影响,为其在临床应用提供理论依据。选择12头表现BRD症状的犊牦牛,以0.75 g/kg剂量温热水冲调灌服麻杏石甘散,每天1次,连用6 d,以5头健康犊牛正常饲喂作为空白对照,用药前(第0天),药后第3、6天记录犊牦牛临床症状并根据WI评分表进行打分评价,颈静脉采血测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LTF)、血清淀粉样蛋白A(SAA)等5种抗炎及抗氧化应激指标水平。结果表明,用药后第6天,WI评分较第3天显著性降低(P<0.05),治愈率为83.3%。通过6 d治疗,患病组犊牛血清中TNF-α、LZM、IL-6、LTF、SAA等抗炎及抗氧化指标浓度与健康组差异不显著(P>0.05)。可见,在本试验条件下,麻杏石甘散能有效改善犊牦牛BRD症状,缓解炎性反应及氧化应激症状,对治疗牦牛BRD具有一定的价值,可用于高寒地区牦牛及相关草食动物呼吸道疾病治疗。

牦牛犊大肠杆菌病的诊断和治疗

牦牛养殖是目前畜牧经济发展重要组成部分,保证牦牛养殖业稳定发展意义重大。牦牛犊养殖时,受到诸多因素的影响,极易发生大肠杆菌病,其会对牦牛犊的生长产生较大的影响,严重时会致死,做好牦牛犊大肠杆菌病的诊治工作尤为重要。着重对牦牛犊大肠杆菌病的诊治方法展开了深入研究。

牦牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为鉴定青海省某牦牛养殖合作社犊牦牛死亡病因,采集死亡犊牦牛的病料进行细菌分离鉴定及药敏试验。结果显示,从病死犊牦牛中分离获得1株A型多杀性巴氏杆菌;该分离株对呋喃唑酮等18种药物敏感,对磺胺甲基异噁唑和万古霉素耐药;耐药基因检测显示,该分离株携带磺胺类耐药基因sul1、四环素类耐药基因tetA与tetB及喹诺酮类耐药基因gyrA;动物致病性试验结果显示,该分离株具有较强毒力。研究结果可为牛巴氏杆菌病的防控提供参考。

自拟中药复方与牦牛源地衣芽孢杆菌联合治疗犊牛腹泻的效果

为了调查陕西某肉牛场犊牛腹泻病因以及探讨自拟中药复方(TCM)和牦牛源地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis,BL)对犊牛腹泻的治疗效果,对18份犊牛腹泻样本进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等常见腹泻病原进行PCR检测;将20头10日龄至30日龄中度及以上腹泻犊牛平均分成4个组,另选择同期的5头健康犊牛作为健康对照,NC组和DC组常规饲养,TCM组、BL组和TCM+BL组给与相应治疗药物,共治疗5 d。结果表明,引起场区犊牛腹泻的病原主要是BRV和BCoV;自拟复方和牦牛源地衣芽孢杆菌可降低腹泻犊牛的临床评分,改善或恢复腹泻犊牛血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素(UREA)以及钙(Ca)、镁(Mg)、无机磷(P)等离子浓度的异常变化。说明自拟复方和牦牛源地衣芽孢杆菌对犊牛腹泻具有良好的治疗效果。

带犊牦牛同期发情与自然发情繁殖效果比较

[目的]为了对比带犊牦牛同期发情与自然发情繁殖效果的差异,作者根据实施的科研项目进行了两组试验,以便为甘南牦牛产业高质量发展提供参考资料。[方法]于繁殖季节在试验组母牦牛阴道内放置“孕激素阴道栓”并肌肉注射“氯前列稀醇”(CIDR+PG)诱发牦牛集中发情。[结果]结果表明,甘南牦牛在当年生产后,通过犊牛统一断奶,改变营养供给,产后3个月试验组和对照组母牦牛自然发情率分别为8%和19.2%。试验组母牦牛应用“放置孕激素阴道栓+肌肉注射氯前列稀醇”方法诱导发情后,总发情率达89.1%。试验组带犊母牦牛激素处理后受胎率为89.1%,对照组母牦牛自然发情率较低,自然交配后受胎率为100%。试验组和对照组母牦牛繁殖率、犊牛成活率分别为86.9%和19.2%、97.6%和100%,试验组犊牛的平均初生重、断奶重、6月龄重分别比对照组高1.51 kg、2.37 kg、3.28 kg,经差异显著性检验,试验组犊牛相关年龄段体重与对照组犊牛对应指标相比,初生体重差异显著(P<0.05),断奶重和6月龄体重差异极显著(P<0.01)。[结论]使用外源性激素诱发带犊母牦牛当年集中发情,母牦牛当年产犊率可以提高67.2%;同时开展同期发情和人工授精仍然是提高牦牛受配率、受胎率、繁殖率,缩短配种间隔,降低乏情率和养殖成本,推动牦牛产业高质量发展的有效技术手段。

日粮组成对牦犊牛消化和能量代谢的影响

在海拔3 980m的果洛州大武乡对3头牦犊牛分别饲喂100%的青贮披碱草(A)、40%精料+60%青贮披碱草(B)、60%精料+40%青贮披碱草(C)3种不同日粮,按3×3拉丁方设计了消化代谢试验。结果表明,1)日粮干物质、有机质、粗蛋白和能量消化率差异显著(P<0.05),粗灰分消化率差异不显著(P>0.05),且随日粮中精料比例的增加,各营养成分的消化率逐渐降低;2)日粮C的能量代谢率显著低于日粮A和日粮B(P<0.05),但消化能转化为代谢能的效率差异不显著(P>0.05),其平均转化效率为0.78;3)粪和尿中排出钙差异显著(P<0.05),粪中排出磷差异不显著(P>0.05),而尿中排出磷差异显著(P<0.05);钙存留量随日粮中精料比例的增加而减小,磷存留量在A日粮下最大。以上结果说明牦犊牛对日粮的消化和能量代谢与其组成密切相关,而且表观消化率随日粮水平的提高而降低,其能量转化率低于生长牦牛和成年牦牛。因此,该结果可为牦犊牛的补饲和快速育肥提供科学依据。

青海牦犊牛肉脂肪酸组成分析

分析青海牦犊牛与成年牦牛肌肉脂肪酸组成特点,将肌肉提取脂肪后进行甲酯化,以脂肪酸酯标样作为标准品,采用气相色谱仪对试样的脂肪酸甲酯进行定性与定量。结果显示,牦犊牛的MUFA、PUFA相对含量极显著高于成年牦牛(P<0·01),分别占到总量的32·38%和11·59%,其中油酸、亚油酸含量尤为突出,分别为29·52%、5·72%,而SFA相对含量为53·54%显著低于成年牦牛的61·04%(P<0·05)。牦犊牛PUFA/SFA与n-6/n-3值分别为0·98%、0·22%均极显著高于成年牦牛(P<0·01)。青海牦犊牛肉脂肪酸营养价值更高、更均衡,对牦犊牛的选育、肉品深加工具有一定意义。

精料补充料能量水平对早期断奶犊牦牛生产性能和营养物质表观消化率的影响

本试验旨在研究精料补充料能量水平对早期断奶犊牦牛生产性能、血清生化指标和营养物质表观消化率的影响。选取体况良好、平均体重为(56.27±4.70)kg的3月龄犊牦牛18头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复2头牛。饲喂粗蛋白质水平为17.00%,增重净能分别为5.60、6.50、7.40 MJ/kg的3种精料补充料。试验共39 d,其中预试期7 d,饲养试验28 d,消化试验4 d。结果表明:1)6.50、7.40 MJ/kg组犊牦牛平均日增重显著高于5.60 MJ/kg组(P<0.05);5.60 MJ/kg组料重比显著高于其他2组(P<0.05)。2)6.50 MJ/kg组犊牦牛血清葡萄糖、甘油三酯含量显著高于5.60 MJ/kg组(P<0.05),与7.40 MJ/kg组差异不显著(P>0.05)。3)6.50 MJ/kg组犊牦牛干物质、有机物、总能表观消化率显著高于5.60 MJ/kg组(P<0.05)。随能量水平升高,钙(P=0.06)、磷(P=0.10)表观消化率有降低的趋势。综上所述,牦牛可在3月龄断奶舍饲饲养,精料补充料增重净能为6.50 MJ/kg时,更有利于舍饲的3月龄断奶犊牦牛的营养物质消化,促进生长。

基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用

轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根据BRV和牦牛RVVP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系,配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒,建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法。结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV,不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原;检测下限为96.6copies·μL-1,重复性好;对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明,本方法对BRV的检出率是33.33%,对牦牛RV的检出率为73.33%,与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100%;对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,既可用于BRV检测,又可用于牦牛RV的检测;从核酸提取到报告检测结果仅需1h,操作方便,可现场使用,为BRV的现场快速诊断提供有力的工具。

全哺乳饲养方式麦洼牦牛公犊肉的营养及品质分析

为了解全哺乳饲养方式麦洼牦牛公犊肉的营养及肉质性状,对6月龄和18月龄麦洼牦牛公犊进行了屠宰测定。结果表明:6月龄和18月龄牦牛公犊的脂肪含量分别为1.43%、1.25%,蛋白质含量分别为22.92%、22.59%,其间均无显著性差异;水分含量6月龄为77.28%,显著低于18月龄(78.30%)。矿物质元素锰含量6月龄为0.20mg/kg,显著高于18月龄(0.13mg/kg),其他矿物元素间均无显著性差异。氨基酸各指标含量间均无显著性差异。6月龄牦牛公犊的饱和脂肪酸(SFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸(EAA)分别为64.53%、1.61%、19.95%、7.75%,均高于18月龄;单不饱和脂肪酸(MUFA)、PUFA/SFA分别为33.85%和0.02,均低于18月龄,但其间均无显著性差异。重金属镉、铬、砷、铅和汞含量均远低于国家标准(GB2762-2005)的限量值,均未检测到六六六、滴滴涕、五氯硝基苯、金霉素、土霉素和磺胺类药物残留。6月龄和18月龄牦牛公犊肉具有高蛋白、低脂肪的特点,且矿物质及氨基酸含量丰富,属于优质蛋白质食物,是绿色、安全、环保、无污染的优质肉食品。

幼龄家牦牛及野、家牦牛的杂种公牛血液中INS、P_4、T、LH、17β—E_2

采用放射免疫分析法对幼龄耗牛及其杂种公牛一昼夜血液中胰岛素（ＩＮＳ）、孕酮（Ｐ_４）、睾酮（Ｔ）、黄体生成素（ＬＨ）、雌二醇（１７β—Ｅ_２）的含量变化进行了研究，并对昼夜间激素含量进行ｔ检验，对杂交组合或各类型间各激素含量进行单因子方差分析。结果表明，１／２野牛与１／４野牛ＩＮＳ含量差异极显著；１／２野牛与家牦牛差异显著；家牦牛与３／４野牛差异极显著；家牦牛与１／４野牛、１／４野牛与３／４野牛差异不显著。３／４野牛Ｐ＿４极显著高于家牦牛、１／２野牛、１／４野牛，其余３个品种差异不及著。１／４野牛Ｔ含量极显著高于３／４野牛、１／２野牛、家牦牛；３／４野牛显著高于家牦牛；３／４野牛与１／２野牛，１／２野牛与家牦牛之间差异均不显著。４个类型或杂交组合间ＬＨ差异不显著。家牦牛、１／２野牛、１／４野牛间１７β—Ｅ＿２差异不及著。

大通犊牦牛肉食用品质研究

从肉色、大理石纹、pH、失水率、系水力、熟肉率、肌纤维直径、剪切力来比较成年牦牛肉与犊牛肉品质差异,结果表明犊牛的肉色、大理石纹均低于成年牦牛。犊牛的系水力、熟肉率均高于成年牦牛,并且失水率、肌纤维直径、剪切力均低于成年牦牛,说明犊牛肉比成年牦牛肉食用品质高。同时测定犊牦牛肉和成年牦牛肉中重金属残留均远低于标准要求,磺胺类、呋喃唑酮在成年牦牛和犊牦牛肉中也均未检出,说明大通牦牛肉是安全优质的。

2.5岁及3.5岁麦洼犊牦牛屠宰试验

为研究经全哺乳饲养后,2.5岁及3.5岁麦洼公犊牦牛的生长发育及肉质特性。对2.5及3.5岁麦洼公犊牦牛进行屠宰试验研究。结果表明,2.5岁和3.5岁犊牦牛的宰前重、体高和体斜长存在极显著差异,管围具有显著差异,而胸围无显著差异。头、蹄、皮重均具有极显著差异,而生殖器睾丸重无显著差异。心脏、肝脏和肾脏重具有极显著差异,肺脏重具有显著差异,而脾脏无显著差异。2.5岁和3.5岁犊牦牛的胴体重、净骨重、净肉重、净肉率、胴体产肉率和骨肉比均具有极显著差异,眼肌面积具有显著差异,而屠宰率无显著差异。全哺乳方式对2.5岁及3.5岁犊牦牛,生长发育补充效果明显,均有较高的宰前重,且产肉性能良好。

青海大通牦牛犊胸腺的形态学观测

以5头青海大通牦牛犊为研究对象,对其胸腺构造进行了形态学观测。表明:青海牦牛胸腺呈微黄色,质地柔软,发达。胸腺可分为颈胸两部分,颈部胸腺大于胸部胸腺。1月龄牦牛犊胸腺的总重量相当于体重的0．32％。

牦牛犊补饲试验初探

21头哺乳期高原型牦牛犊用于补饲试验。试验末期试验组体高、体斜长、胸围和体重分别达到83.83±2.64cm,86.17±3.87cm,102.50±4.72cm和70.92±6.38kg,比对照组分别提高2.19cm,3.10cm,1.93cm和7.56kg。试验结果表明:通过人工补饲来补充牦牛犊生长发育营养需求的方法在传统的牦牛生产系统中具有一定的可行性。

牦犊牛冷季暖棚补饲试验

在海拔高度３４００～３７００ｍ的冬春草地上，修建牦犊牛暖棚舍，制作氨化秸秆，于１９９４年１２月到１９９５年２月对４６头１／４野血牦犊牛进行冷季夜间暖棚舍保温和补饲试验。试验群犊牛平均每天每头补饲氨化秸秆０．５８３ｋｇ。试验结果：经７６天试验，试验群犊牛体重平均增重６．４ｋｇ，日增重８４．７ｇ，对照群犊牛平均增重－３．５ｋｇ，日增重－４６．２ｇ，试验群犊牛比对照群多增重９．９ｋｇ，日增重多１３０．９ｇ，经ｔ检验，两组间日增重差异极显著（Ｐ＜０．０１）。每头可获经济效益３１．６１元。

犊牛断乳对产后母牦牛发情周期恢复的研究

本研究旨在考察断乳及短期断乳后对产后母牦牛发情周期恢复及怀孕率的影响。18头初产母牦牛和24头经产母牦牛进行单纯的断乳后发现卵巢周期的恢复率分别达到55.56%和87.5%,怀孕率分别达到55.56%和66.67%;对照组仅为6.67%和0%。12头母牦牛在同期排卵处理方案的第7～9天中进行短期断乳,24头母牦牛作对照,发现短期断乳组人工授精的妊娠率分别为41.67%,高于对照组37.5%,但是二者在统计学上没有显著性差异。试验表明,产后母牦牛在发情配种期进行犊牛断乳,可以极大的提高产后母牦牛产后发情周期的恢复,提高其怀孕率。