固定化啤酒废酵母吸附Cr^(6+)的特性研究

用啤酒废酵母作吸附剂,以海藻酸钠作包埋剂将酵母固定化制作成小球,分别从吸附时间、温度、酵母小球用量、Cr6+溶液质量浓度、pH值等因素,研究啤酒废酵母菌体对Cr6+的吸附特性。确定固定化啤酒废酵母对Cr6+吸附的最佳条件为:吸附时间1.5h、温度15℃、酵母小球用量3g/20mL、Cr6+溶液质量浓度40mg/L、pH值为3。在该条件下,对Cr6+最大吸附率为27.6%,最大吸附量为10.8mg/g。其中pH值、Cr6+溶液质量浓度、酵母小球用量3个因素对Cr6+吸附特性影响较大,其余因素影响较小。

人源蛋白酶体α亚基6(Proteasome subunit alpha 6)在酿酒酵母表面展示

为构建人源蛋白酶体α亚基6(α6)的酵母展示体系,研制其单克隆抗体用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,建立绕过重组抗原表达及纯化制备、将展示重组抗原直接应用于抗体检测的方法.在酵母展示表达载体pICAS中引入His.tag标签,将编码α6的基因PSA6_HUMAN克隆到酵母表面展示载体pICAS-H上,用流式细胞仪检测其抗原表位活性,以表面展示α6的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫检测技术,建立酵母(yeast)-ELISA检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.酵母细胞培养48h后获得抗原α6的高效表面展示,展示的α6具有良好的抗原活性和特异性,将α6的展示酵母用于yeast-ELISA的初步实验结果显示可有效检测和筛选到抗α6抗体.

猪白细胞介素-6在巴斯德毕氏酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达

白细胞介素6 (Interleukin_6 ,IL_6 )是一种具有多种生物学效应的细胞因子,在疾病诊断与疫苗佐剂领域有广阔的应用前景。在本试验中,猪白细胞介素_6 (pIL_6 )的cDNA序列被克隆入甲醇酵母(Pichiapastoris)分泌表达载体pPIC9K中,并转化入P .pastorisGS115菌株。其重组菌株GS115 pPIC9K_IL6经1%甲醇诱导后,能分泌表达分子量约为2 4 5KD的重组蛋白,Westernblot确证为pIL_6。该酵母表达产物无N端糖基化修饰。用依赖IL6生长的B9细胞株检测提纯后的pIL_6 ,其生物学活性可达8×10 4 IU mg。

固定化酵母细胞生产1,6-二磷酸果糖研究

本文研究了固定化酵母细胞制备果糖1,6二磷酸(FDP)的方法及其生产。用卡拉胶包埋方法固定化酿酒酵母(Sacchromyces cerevisae),对含葡萄糖1.0M,磷酸盐0.8M的糖磷液,pH6.5,在37℃下进行磷酸化反应。反复分批转化20天以上,可达到平均产FDPH_427.58mg/ml,最高为59.94mg/ml。用100ml固定化细胞生物反应器连续运转309h,稀释速率D=0.097h^(-1),平均产FDPH_4 21.51mg/ml。20L反应器连续运转,生产能力达到1.7g/h.L。用层析方法制备FDPNa_3结晶粉,提取收率为72.08％,制备质量达到或超过了国内外同类产品的质量要求。

结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用

目的观察结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10基因,构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109。结果共转染pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10的酵母菌AH109可以在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp培养基上生长,β-半乳糖苷酶活性实验阳性。结论结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白可以相互作用。

碱茅6-磷酸海藻糖合成酶基因的克隆及其耐逆性分析

从碱茅酵母cDNA文库中经过NaCl、NaHCO。筛选，均得到长为1153bp碱茅6一磷酸海藻糖合成酶基因（PutTPS）片段。通过3’End cDNA amplification方法获得基因缺失的3’序列，该基因全长3358 bp，编码882个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明，PutTPS氨基酸序列与水稻、拟南芥、玉米等多种高等植物的TPS蛋白的同源性高达60％～90％。利用Northern blot技术，研究该基因的组织表达模式及NaCl、NaHCO3胁迫处理下基因的表达模式变化；同时对转pYES2-PutTPS基因酵母菌株进行盐、碱、氧化胁迫、渗透胁迫处理，观察其在逆境下的生存表现。结果表明，PutTPS具有组织表达特异性，其中在根和花中表达量最大；NaCl、NaHCO3会诱导PutTPS基因在根和叶中的上调表达；同时重组酵母菌株对盐碱、氧化、渗透胁迫及干旱等逆境的适应能力显著增强。以上研究结果表明，碱茅PutTPS基因与逆境之间具有一定的应答关系，并在植物适应环境逆境过程中起着重要的作用。

啤酒酵母中海藻糖合成酶和海藻糖-6-磷酸合成酶的功能及结构分析

啤酒酵母的海藻糖合成酶复合物由4个亚基(TPS1,TPS2,TPS3和TSL1)组成,这4个亚基具有协同作用。其中海藻糖-6-磷酸合成酶是海藻糖合成酶的功能中心;TPS1除了具有合成海藻糖的功能之外,还具有调节糖代谢和促进酵母孢子形成的功能;tps1大量表达时,有助于细胞增加对高温、高渗和酒精等的耐受性。

人源蛋白酶体α亚基6的酵母表面展示及表达优化(英文)

为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag或抗hPSA6的单克隆抗体和荧光二抗进行免疫荧光染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测到hPSA6已经成功地展示于酿酒酵母表面.通过对培养基中不同初始浓度的葡萄糖和酸水解酪素的诱导培养,发现hPSA6呈现出不同的展示水平,与对照相比,对His.tag进行免疫荧光检测观测到3%酸水解酪素诱导培养可获得超过70%的展示表达率,3%葡萄糖诱导培养可达到50%以上表达率,2%葡萄糖诱导也有接近40%表达率.考虑到葡萄糖效应和灭菌过程中高浓度的葡萄糖易碳化,采用2%葡萄糖进行诱导表达较3%更适合于hPSA6的展示表达.

三种改变酵母细胞透性方法对1,6-二磷酸果糖生产的影响

目的:研究不同方法改变酵母细胞透性对1,6-二磷酸果糖生产的影响。方法:采用反复冻融、甲苯处理、活化培养这 三种方法改变酵母细胞透性并测定这些改变了细胞透性和生理状态的酵母的1,6-二磷酸果糖生产能力。结论:三种方法均 使1,6.二磷酸果糖的发酵产量提高,其中活化培养方法使1,6-二磷酸的发酵产量达40 mg/mL。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化

报道了葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶的分离纯化 .在 0 .1 mol/L的碳酸氢钠溶液中 ,以溶胀法从酵母中提取胞内酶 .粗抽提液经过 6 0 %～ 75 %饱和度的硫酸铵盐析 ,Sephadex G- 1 0 0凝胶柱层析 .葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶的收得率为 1 2 .4 % ,纯化倍数达 5 1 .

黑酵母β1,3-1,6葡聚糖对大鼠全身电离辐射损伤的保护作用

目的观察黑酵母β1,3-1,6葡聚糖对大鼠全身辐射损伤的保护作用。方法将35只SD大鼠随机分为6组:正常对照组(c组),单纯给药组(m组),5 Gy单纯照射组(5 Gy组),5 Gy照射并给药组(5 Gy+m组),0.5 Gy单纯照射组(0.5 Gy组),0.5 Gy照射并给药组(0.5 Gy+m组)。各组均行自身对照。大鼠自照射前2周给予黑酵母β1,3-1,6葡聚糖灌胃[1 g·(100 g)-1,qd]。对大剂量辐射组,检测照射前、照射后3,7,14 d体质量、外周血常规、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及照射后14 d骨髓细胞微核率和脾脏指数;对小剂量辐射组,检测照射后2,4,8,24 h,外周血淋巴细胞DNA损伤免疫荧光焦点数。结果黑酵母β1,3-1,6葡聚糖可促进照射后大鼠体质量恢复,减轻骨髓抑制,延迟SOD活力降低和MDA升高,差异有统计学意义,降低微核率增加,差异有统计学意义,抑制脾脏缩小;对接受小剂量照射的大鼠表现出DNA断裂位点修复的作用。结论黑酵母β1,3-1,6葡聚糖对SD大鼠全身辐射损伤有一定的保护作用。

精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨

目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/p GADT7、Tac1/p EGFP-N2重组质粒,将Tac1/p EGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/p GADT7与Spag6/p GBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。

酵母细胞催化(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯的不对称还原

通过实验筛选出了对(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯具有较强还原能力的菌株。利用热预处理的方法提高了反应的立体选择性,并以稳定期的菌株为催化剂,考察菌龄、底物的加入量、菌体浓度、转化时间、转化温度和pH值对该反应的影响,得到较佳的反应条件是30℃,pH值6.0,底物浓度1 g/L,湿菌体浓度100 g/L,转化48 h。在此条件下进行反应,产物的收率和d.e.值可分别达到68.3%和95.1%。

啤酒酵母融合株QSB-Ⅺ_6中试研究

将新选育的酵母融合株ＳａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＱＳＢ－Ⅺ６，同本厂生产中使用的酵母菌种ＳａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＬＱ１６在２３０Ｌ发酵罐中做对比性发酵试验。试验酒的各项理化指标均已达到国家优质酒标准，其中双乙酰值在００８ｍｇ／ｌ以下，真正发酵度平均为７０２０％，酒体泡沫丰富，清亮透明。口味纯正，风味独特，为使该菌种能更好地应用于生产，奠定了基础。

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤酵母中的融合表达及其活性研究

为了获得结核分枝杆菌ESAT 6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达 ,将人α 2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat 6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点 ,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽 ,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K ,将重组表达质粒pPIC9K α2a esat6用SalⅠ单酶切之后 ,电击转入PichiapastorisSMD116 8中 ,采用G4 18梯度筛选获得高抗性转化子。以甲醇作为诱导物 ,发酵 4d后取上清 ,进行SDS PAGE和Westernblot鉴定并分析表达产物的干扰素活性。结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为 30kD的融合蛋白 ,表达产物不仅具有较高的干扰素活性 ,而且可以和结核病人血清发生特异性结合 。

精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨

目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。

产几丁质酶酵母菌的筛选与鉴定

从番茄果实表面筛选到1株产几丁质酶酵母菌株CY-6,该菌株产生的几丁质酶对番茄镰刀菌果腐病菌(Fusarium oxysporum)有较强的抗菌活性并具有较广的抗菌谱。形态及生理生化特征测定结果表明:菌株CY-6与伊萨酵母属(Issatchenkia)中的陆生伊萨酵母(I.terricola)种的特征基本一致;测定了该菌株的26S rDNAD1/D2区域序列并根据26S rDNA构建了系统发育树;在系统发育树中,菌株CY-6与陆生伊萨酵母形成一个类群,序列同源性高达99.6%。因此,将菌株CY-6鉴定为陆生伊萨酵母。

莲藕醋的研制

该文详细介绍了莲藕醋的生产工艺 ,相关的优良菌种的选育以及产品的感官、理化指标 ,为莲藕的深加工开创了一条新途径。

酵母葡聚糖的制备及理化性质

建立了一种用碱提取面包酵母中葡聚糖的方法，该法制得的酵母葡聚糖是以 β（１３） Ｄ葡聚糖为主链，有约 １２％ 的β（１６）分枝的均一性多糖，乙酸能作用 β（１６）键，使粘度增加；葡聚糖酶能作用β（１３）键，使粘度下降。

百脉根结瘤因子受体NFR5及其相互作用蛋白的研究

以豆科植物百脉根的mRNA为模板,利用RT-PCR方法,扩增到1.0kb结瘤因子受体5(nod factorreceptor NFR5)蛋白激酶结构域的DNA片段(nfr5-pk),并将该片段克隆到酵母双杂交BD载体pGBKT7上。通过酵母双杂交技术,筛选接种根瘤菌的百脉根AD-cDNA酵母双杂交文库,从文库中分离到与nfr5-pk相互作用的221个阳性克隆。从这些阳性克隆酵母中分离AD质粒经反复验证,对26个确定阳性克隆的外源片段进行测序和同源性分析。通过NCBI数据库比对分析鉴定出小G蛋白Rop6等6个与NFR5-PK相互作用的不同蛋白,为进一步研究NFR5基因的功能和调控机制提供了材料。