羟基红花黄色素(HSYA)纯化条件的影响

目的探讨纯化羟基红花黄色素A(HSYA)的影响因素。方法用HPLC法测定,以HSYA百分含量为指标,考查醇沉浓度,药液浓度及pH值对HSYA纯化的影响。结果醇沉浓度对HSYA的纯化影响较大,其次为药液浓度和pH值,而且先调pH值后醇沉得到的HSYA含量更高。结论80%的乙醇沉淀,药液浓度为料液比2∶1,pH值为6.5,是最佳工艺条件。

HSYA与芍药苷联用对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区脑组织与血浆CD62P的影响

目的 HSYA与芍药苷联合用药对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织与血小板活化的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠,随机分为HSYA组(5.0 mg·kg^(-1))、芍药苷组(5.0 mg·kg^(-1))HSYA与芍药苷联合用药组(合用组)(各5.0 mg·kg^(-1))、银杏内酯组(5.0 mg·kg^(-1))、模型组和假手术组。大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血1 h再灌注6 h后尾静脉注射给药7 d,末次给药2 h后收集相应标本保存;苏木精-伊红(HE)染色法观察海马区神经细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)法检测全血中P-选择素(CD62P)含量。结果 HE染色结果提示,与模型组比较,HSYA、芍药苷及合用组均能明显改善急性脑缺血再灌注大鼠海马区神经细胞的损伤程度,以合用组尤为明显。FCM结果提示,与假手术组比较,模型组大鼠全血中CD62P的活化程度显著增加(p<0.01);与模型组相比,合用组与银杏内酯组均能显著抑制全血中CD62P的活化程度(p<0.05);与合用组相比,芍药苷组全血中CD62P的活化程度显著增加(p<0.01),但HSYA组与合用组之间抑制作用无显著性差异。结论 HSYA与芍药苷联合用药对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的的海马区神经细胞保护机制可能与抑制CD62P表达有关。

HSYA与芍药苷联用对脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K、Akt mRNA表达的影响

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)与芍药苷联合用药对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K/Akt信号通路中PI3K、Akt mRNA表达的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为模型组、假手术组、HSYA组、芍药苷组、银杏内酯组、合用组。复制脑缺血再灌注模型。脑缺血1 h再灌注6 h后尾静脉注射相应的药物7天,每天1次。HSYA组灌胃HSYA溶液5.0 mg/(kg·d);芍药苷组灌胃芍药苷溶液5.0 mg/(kg·d);合用组是HSYA与芍药苷联合用药,灌胃HSYA溶液和芍药苷溶液各5.0 mg/(kg·d);银杏内酯组灌胃银杏内酯注射液5.0 mg/(kg·d);模型组和假手术组灌胃等量生理盐水。末次给药2 h后采集相应标本保存,qRT-PCR法检测大鼠海马组织PI3K、Akt mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠PI3K mRNA表达量显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,HSYA组、芍药苷组、合用组、银杏内酯组大鼠海马组织中PI3K mRNA的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与合用组比较,HSYA组、银杏内酯组大鼠PI3K mRNA的表达量较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HSYA与芍药苷联合用药对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护机制可能与显著调节PI3K/Akt信号通路中PI3K mRNA过表达,微调Akt mRNA过表达有关。

羟基红花黄素A拮抗IL-1β诱导软骨终板细胞凋亡的作用机制

目的探讨羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)对IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞凋亡的拮抗作用。方法用10μg.L-1的IL-1β诱导正常软骨终板细胞退变,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因的表达水平。采用Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达量,细胞免疫荧光分析各组Bax、Bcl-2细胞内定位。结果不同浓度的HSYA培养基均能拮抗IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。流式细胞分析结果显示各浓度HSYA可以降低IL-1β诱导的小鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果显示各浓度HSYA可拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达作用;细胞免疫荧光结果显示HSYA 10-5 mol.L-1给药组可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;Western blot结果显示HSYA 10-5 mol.L-1和HSYA10-6 mol.L-1均可以拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达作用。结论羟基红花黄素A具有拮抗IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的作用。

羟基红花黄色素A对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,观察HSYA对大鼠心肌梗死面积(MIS),血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)和血管紧张素(Ang)的影响。结果与模型组比较,HSYA明显减小急性心肌梗死大鼠MIS,显著提高血清NOS活性,明显增加NO及6-Keto-PGF1α的量,显著降低血清CK-MB、LDH、TXB2及Ang水平。结论HSYA对急性缺血心肌具有保护作用,其机制与HSYA调节NO、6-Keto-PGF1α、TXB2和Ang的水平,从而增加心肌供血供氧,减轻心肌细胞损伤、凋亡有关。

羟基红花黄色素A促内皮细胞增殖的机制研究

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对低氧条件下犬血管内皮细胞(VEC)血管内皮生长因子(VEGF)相关信号传导通路的影响。方法在低氧条件下以ELISA法观察VEGF抗体及其两种酪氨酸受体(Flt-1和KDR)的抗体对HSYA促VEC增殖作用及分泌VEGF水平的影响;生物分子相互作用分析法检测HSYA与VEGF、Flt-1和KDR的相互作用;硝酸还原酶法测定VEC培养液中NO、NOS的量。结果10μg/mLVEGF、Flt-1和KDR的抗体均能明显抑制HSYA的促VEC分泌VEGF作用;生物分子相互作用分析结果证实,HSYA与VEGF、Flt-1及KDR均无明显结合;HSYA在1mmol/L浓度下能够明显促进低氧条件下VEC培养液中的NO水平,而对NOS水平没有明显影响。结论在低氧条件下,HSYA促VEC增殖的作用与VEGF及其相关信号传导通路有关,但HSYA与VEGF及其受体无明显结合,提示可能存在与VEGF及其相关信号传导通路相关的HSYA作用靶点。

HPLC测定红花中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法同时测定红花中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用Kromasil C18(200mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈∶0.1%H3PO4=10∶90,流速1.0ml/min,检测波长403nm,柱温为30℃。结果:羟基红花黄色素A在0.89～10.68μg/ml的范围内呈良好的线性关系(r=0.9990)。结论:本测定方法快捷,简便,准确,重现性好。

红花花色与羟基红花黄色素A的相关性初探

利用PANTONE国际通用比色卡对红花花色进行划分,紫外-可见光谱对红花总黄酮及高效液相色谱法(HPLC)对不同色差红花的羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)的测定。结果表明:HSYA与FW(总黄酮)表现趋势呈正相关;红花花色的深浅程度与羟基红花黄色素A的含量无相关性;花色差异与总黄酮含量间无明显规律。该文可以为红花新品种选育提供参考。

红花提取工艺探讨

目的优选红花提取工艺。方法用HPLC法测定,以羟基红花黄色素A的提取转移率为指标,采用正交试验设计考察加水量、提取时间、和提取次数对提取效果的影响。结果加14倍量水提取30min,可使红花中羟基红花黄色素A提取完全,其提取转移率达95.62%。结论本方法简单可行,可用于工业大生产。

羟基红花黄色素A对脑缺血大鼠皮层炎症信号转导途径相关因子的抑制作用

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是红花中的单体有效成分。本研究采用线栓法制备大鼠永久性脑缺血模型,观察HSYA对永久性脑缺血大鼠炎症信号转导途径相关因子的抑制作用。于缺血后3、6、12和24 h取大脑皮层。Western blotting检测细胞核及胞浆核转录因子κB(NF-κB)p65及胞浆磷酸化IκB-α(pIκB-α)蛋白水平表达;Trans AM试剂盒检测NF-κB DNA结合活性;RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10转录水平表达。结果表明,大鼠脑缺血后多次静脉注射HSYA(10 mg.kg-1),能显著抑制p65核转位以及IκB-α的磷酸化,降低NF-κB DNA结合活性,并降低促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达,升高抗炎因子IL-10 mRNA表达水平。提示HSYA的抗脑缺血作用可能与其抑制炎症信号途径中NF-κB激活及炎性因子转录水平表达有关。

高效液相色谱法测定葛根、红花和山楂混合提取物中葛根素、羟基红花黄色素A的含量

目的建立一种反相高效液相色谱方法，测定葛根、山楂、红花混合提取物中葛根素和羟基红花黄色素A的含量。方法采用Hypersil ODS4．6mm（i．．d．）×250mm，5μm，以0．2％（v／v）磷酸水溶液：甲醇：乙腈（81：16：3）为流动相，流速1．2ml／min，柱温25℃，检测波长分别为250，403nm，测葛根素和羟基红花黄色素A。结果葛根素和羟基红花黄色素A线性范围分别为0．032406-0．16208mg/ml和0．0294～0．147mg／ml；平均加样回收率分别为98．3％，98．0％；RSD分别为1．2％，1．6％。结论该方法快速、简便、准确，可为评价该提取物的质量提供依据。

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素 (safflor yellow,SY)及有效成分羟基红花黄色素 A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上 D- 4 0 2 0型非极性大孔树脂柱 ,水洗脱糖类等杂质 ,以 30 %和 10 %乙醇洗脱分别得 SY和 HSYA;采用分光光度法和 HPL C法分析水洗脱除糖过程中 SY和 HSYA的损失率及醇洗脱 SY和 HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示 SY和 HSYA洗脱液分别可见 4～ 5个和 1个黄色荧光斑点。 HPL C分析结果表明 ,两洗脱液中所含 SY和 HSYA纯度分别为92 .4 %和 83.0 %。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中 ,损失率和回收率分别为 SY:7.5 %和 80 .6 % ,HSYA:1.6 4 %和77.3%。结论 本法适于大规模制备 SY和 HSYA。

羟基红花黄色素A与芍药苷联合用药对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与芍药苷联合用药对急性局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠的协同保护作用,并探讨其作用机制。方法 110只雄性SD大鼠,随机分为6组:HSYA组(5.0 mg/kg)、芍药苷组(5.0 mg/kg)、HSYA与芍药苷联合用药组(合用组,各5.0 mg/kg)、银杏内酯组(5 mg/kg)、模型组和假手术组。采用改良线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型。脑缺血1 h再灌注6 h后进行神经功能缺失评分及尾静脉注射给药;给药7 d后进行神经功能缺失评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死面积;免疫组化(IHC)法检测磷酸化Akt1蛋白的表达量的变化情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠治疗前评分明显高于假手术组,差异具有统计学意义(P<0.01),说明造模成功;与模型组比较,银杏内酯组、合用组、芍药苷组和HSYA组能不同程度地抑制大鼠体质量下降(P<0.05,P<0.01),改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺失症状(P<0.05,P<0.01),降低皮质区神经细胞的损伤程度,减小脑梗死面积(P<0.05,P<0.01),促进磷酸化Akt1蛋白的表达(P<0.01);HSYA组、芍药苷组、银杏内酯组磷酸化Akt1蛋白的表达较合用组低(P<0.01)。结论 HSYA与芍药苷联合用药对脑缺血再灌注大鼠的脑损伤具有一定的协同保护作用,二者联合用药的作用优于单独用药,可能与二者联合用药发挥活血化瘀与神经保护作用有关。

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。

氮素形态及配比对红花苗菜产量和品质的影响

在盆栽条件下,以3个红花株系为试验材料,研究不同氮素形态及配比对红花幼苗生物学性状及品质的影响.结果表明：随硝态氮比例的增加,红花幼苗叶片数目、叶片长度和幼苗单株鲜质量和生物学产量呈先上升后下降的趋势,其中以处理N3（50％铵态氮＋50％硝态氮）对红花苗菜增产幅度（23.98％～40.06％）最大.铵态氮比例的增加有利于红花幼苗多糖的合成,而硝态氮比例的增加有利于可溶性蛋白的累积,处理N1至N4与N0相比,‘1-12’红花幼苗多糖质量分数增加21.78％～51.49％,而其可溶性蛋白N4、N5比N0分别增加4.91％、12.14％.施氮降低红花幼苗中黄酮和羟基红花黄色素A质量分数,而与氮素形态无直接关系;施氮会提高红花苗菜中硝酸盐质量分数,随硝态氮比例的增加,红花幼苗中硝酸盐质量分数增加幅度较大;全铵态氮（N1）时硝酸盐质量分数增加0.72％～4.57％,全硝态氮（N5）时硝酸盐质量分数增加23.43％～59.71％.苗菜中维生素C表现下降趋势,但维生素C下降幅度低于铵态氮.因此,红花苗菜生产以100％铵态氮（N1）或75％铵态氮＋25％硝态氮（N3）为宜,既提高苗菜产量又可保证品质.

羟基红花黄色素A对常氧／低氧犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对常氧/低氧两种条件下体外培养的犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响。方法采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;在常氧(21%)/低氧(10%)两种条件下,分别以噻唑蓝(MTT)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,血管内皮生长因子(VEGF)作为阳性对照。结果常氧条件下HYSA1、0.1mmol/L在72、96、120h时对VEC有明显促增殖作用;低氧条件下HYSA1、0.1、0.01mmol/L在24、48h时对VEC有明显促增殖作用,且具有浓度和时间依赖性。HYSA1mmol/L与VEGF2.6×10-7mol/L在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当。结论在常氧/低氧两种条件下,HSYA均具有明显促VEC增殖作用,且在低氧条件更为明显。

温度对红花芽菜生长特性及有效成分的影响

以红花株系农家品种、‘B-1’‘1-3’‘3-10’为材料,研究不同温度(20、25、30和35℃)对红花芽菜生长特性及有效成分的影响。结果表明:25℃时4种红花种子出苗率最高且分别为95.67%、90.00%、99.00%和96.33%,红花芽菜幼苗的生长状况最好,芽菜的单株鲜质量最大分别为0.41、0.41、0.49和0.45g,百株生物学产量分别为41.00、37.49、45.56和37.40g,百株净产量分别为32.79、31.08、36.84和29.84g,20℃时红花芽菜中的功效成分黄酮和羟基红花黄色素A质量分数最高,分别为24.72和19.05mg/g,多糖质量分数较低;随着温度的升高,红花芽菜黄酮和羟基红花黄色素A质量分数呈下降趋势,多糖质量分数增加。20~25℃为红花芽菜生长的适宜温度。

注射用羟基红花黄色素A对家兔血小板聚集、超微结构及血小板活化因子诱导后富血小板血浆中GMP-140含量的影响

目的:观察注射用羟基红花黄色素A(HSYA)对家兔血小板聚集功能及超微结构的影响。方法:采用体内实验法,观察3种剂量的注射用HSYA(10、5和2.5mg/kg)对由花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)和血小板活化因子(PAF)(3.6nmol/L)诱导的家兔血小板聚集作用的影响,以及血小板超微结构的变化;并单独研究了以PAF为诱导剂的情况下,富血小板血浆(PRP)中α-颗粒膜蛋白-140(GMP-140)的含量。结果:各剂量HSYA注射剂能抑制AA、PAF诱导的家兔血小板聚集(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示:各剂量HSYA注射剂能减少AA和PAF诱导后的聚集型血小板数量并使树突型血小板突起变少变短(P<0.05,P<0.01);另外,各剂量HSYA注射剂还能降低经PAF诱导后GMP-140的含量(P<0.01)。结论:注射用羟基红花黄色素A具有显著的抗PAF诱导的血小板聚集作用,抑制血小板的活化,从而为临床抗血小板聚集药物的使用提供更多选择。

大孔树脂使用次数对羟基红花黄色素A吸附率的影响

目的:考察D101大孔吸附树脂使用次数对羟基红花黄色素A吸附率的影响,为产业化生产提供依据。方法:采用静态吸附法,对反复再生后的D101大孔吸附树脂衰减规律进行了研究,并采用高效液相色谱法对羟基红花黄色素A含量进行了定量分析。结果:D101大孔吸附树脂在经过乙醇、2%盐酸、5%氢氧化钠反复再生后,使用16次吸附率下降约27%。结论:D101大孔吸附树脂在活化再生使用16次以后,不宜再用。

羟基红花黄色素A磷脂复合物的制备及理化性质研究

目的:确定羟基红花黄色素A与大豆磷脂形成复合物的最佳工艺,并对其理化性质进行研究。方法:以羟基红花黄色素A与大豆磷脂的复合率为评估标准,采用单因素考察进行系统研究,对所制得的复合物进行UV、DSC、IR等分析,并考察其在正辛醇中的溶解性能。结果:该制备方法的复合率达98.7%,研究表明羟基红花黄色素A磷脂复合物是以非共价键结合;羟基红花黄色素A磷脂复合物明显改善羟基红花黄色素A在正辛醇中的溶解性能。结论:羟基红花黄色素A磷脂复合物的形成受反应溶剂和反应物料比例的影响较大;复合物的脂溶性有较大提高。