Yes相关蛋白(YAP)通过激活PI3K/AKT通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中表达及与cSCC侵袭和迁移中的作用。方法通过免疫组织化学染色法检测cSCC、鲍温病(BD)、癌旁正常皮肤组织中YAP的表达水平,并分析与临床病理参数之间的关系;利用慢病毒转染构建YAP基因敲低的A431稳定细胞株,利用四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽检测A431细胞微丝分布和数量,Transwell TM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测A431细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色法观察敲低YAP后上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的表达;Western blot法检测E-cadherin、Snail、β-catenin、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、核糖体蛋白S6(S6)、磷酸化S6(p-S6)、4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)的表达。结果YAP在cSCC和BD中表达显著高于癌旁正常皮肤组织;cSCC中YAP高表达与肿瘤大小、分化程度、侵袭程度密切相关,与患者的性别、年龄、发病部位、形态类型、是否神经脉管侵犯不相关;敲低A431细胞中YAP后,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力降低,细胞微丝变细、伪足变少;E-cadherin表达增加,Snail和β-catenin蛋白表达降低,p-AKT、p-S6及p-4EBP1蛋白表达降低。结论YAP在cSCC中高表达,YAP激活PI3K/AKT信号通路促进cSCC的侵袭、迁移及EMT过程。

姜黄素调控Yes相关蛋白1对子宫内膜癌Warburg效应及生物学行为的影响

目的:观察姜黄素调控Yes相关蛋白1 (YAP1)对子宫内膜癌糖酵解Warburg效应及生物学行为的影响。方法:将HEC-1B细胞分为对照组、NC-YAP1组、si-YAP1组及低、中、高剂量组。对照组不做任何处理,NC-YAP1组转染NC-YAP1质粒,si-YAP1组转染si-YAP1质粒,低、中、高剂量组细胞分别用20、40、80μmol/L的姜黄素处理。试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞周期与凋亡;划痕法检测各组细胞迁移能力;Transwell法检测各组细胞侵袭能力。蛋白质印迹(Western blot)法检测YAP1、乳酸脱氢酶-A (LDH-A)、己糖激酶2 (HK2)、丙酮酸激酶2 (PKM2)蛋白表达。结果:与对照组比较,NC-YAP1组YAP1蛋白相对表达水平、乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05),si-YAP1组及低、中、高剂量组YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05)。与NC-YAP1组比较,siYAP1组及低、中、高剂量组细胞YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05),且低、中、高剂量组上述指标均呈剂量依赖性(P<0.05)。与si-YAP1组比较,低、中剂量组细胞中YAP1蛋白相对表达水平均增加(P<0.05),而高剂量组差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均增加(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均降低(P<0.05),高剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率增加(P<0.05),而中剂量组乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:姜黄素可能通过抑制YAP1表达抑制子宫内膜癌细胞的Warburg效应、增殖、迁移及侵袭等恶性行为。

基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

目的基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制。方法随机选取8只3周龄雄性肝细胞特异性Yap1基因敲除(基因型为Yap1^(Flox/Flox),Albumin-Cre,简称Yap1^(LKO))小鼠作为Yap1^(LKO)+AAI组,8只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1^(Flox)+AAI组。2组小鼠均按照2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射AAI,连续14 d。采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1蛋白表达情况。采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析。结果(1)AAI诱导14 d,Yap1^(LKO)小鼠的体质量增长低于Yap1^(Flox)小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,与Yap1^(Flox)+AAI组比较,Yap1^(LKO)+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P<0.05),肝脏组织病理损伤明显加重。Yap1^(Flox)小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1^(LKO)小鼠无YAP1蛋白阳性表达。(2)通过代谢组学分析共筛选出139种显著变化(VIP>1且P<0.05)的差异代谢物,与Yap1^(LKO)+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的62种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等。KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等。结论肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤。

Yes相关蛋白在电离辐射后表皮干细胞分化中的作用

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在电离辐射(IR)后表皮干细胞(EPSC)分化中的作用。方法①利用打孔器建立小鼠背部皮肤损伤,随后分为IR组(给予^(60)Coγ射线局部照射),对照组(不照射);照射后0,1,3,6,9和12 d收集创面皮肤组织提取RNA和蛋白,Western印迹法检测创面愈合过程中YAP蛋白变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测创面愈合过程中Yap及其下游靶基因结缔组织生长因子(Ctgf)和富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)的mRNA变化。②将EPSC给予60Coγ射线照射,细胞对照组不照射;4或8 Gy剂量照射后4,12,24和36 h收集细胞提取RNA,RT-qPCR检测YAP mRNA变化。4或8 Gy剂量照射36 h收集细胞提取蛋白,Western印迹法检测YAP蛋白水平;③短发夹RNA(shRNA)构建稳定的YAP基因敲低细胞,Western印迹法验证shYAP的敲低效率;RT-qPCR检测IR后YAP敲低对K1和K10 mRNA的影响。结果①与对照组相比,IR组小鼠在创面愈合过程中YAP蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Yap及其下游靶基因Ctgf和Cyr61的mRNA水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。②与细胞对照组相比,IR组细胞YAP mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.01)。③在shYAP稳转细胞中,YAP蛋白水平显著降低(P<0.01);shYAP在IR后EPSC分化标志物K1和K10的mRNA水平明显降低(P<0.01)。结论YAP调控IR后创面愈合过程中EPSC的分化。

那可丁对肺癌细胞血管生成、Yes相关蛋白及敏感性的作用机制

目的探讨那可丁对肺癌细胞血管生成、Yes相关蛋白(YAP)及敏感性的作用机制。方法A549按照1.5×106/ml接种于96孔板中,分为肺癌组(无干预的A549细胞)、低浓度那可丁组(A549细胞与20μmol/L的那可丁共培养)、中浓度那可丁组(A549细胞与40μmol/L的那可丁共培养)、高浓度那可丁组(A549细胞与80μmol/L的那可丁共培养),顺铂(DDP)组(A549细胞与20μmg/L的DDP共培养),采用Transwell法检测各组A549细胞侵袭数目;划痕实验检测划痕愈合率;观察各组A549细胞体外管腔形成数目;CCK-8检测DDP+那可丁对A549细胞抑制率;免疫印迹分别检测各组A549细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、YAP及磷酸化(p)-YAP。结果与肺癌组相比,不同浓度的那可丁组及DDP组的侵袭数目、划痕愈合率及管腔形成数目均显著降低(P<0.05),低、中及高浓度的那可丁组相互比较存在显著差异(P<0.05),高浓度那可丁组与DDP组相比无统计学意义(P>0.05);DDP组及DDP+那可丁组在DDP浓度为0 mg/L时无统计学意义(P>0.05),在DDP浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 mg/L时DDP+那可丁组的肺癌A549细胞抑制率均显著高于DDP组(P<0.05);与肺癌组相比,不同浓度的那可丁组及DDP组bFGF2、VEGF、MMP-9、YAP及p-YAP均显著降低,低、中及高浓度的那可丁组相互比较存在差异(P<0.05),高浓度那可丁组与DDP组相比无意义(P>0.05)。结论不同浓度的那可丁均可发挥抗肺癌侵袭、转移及血管管腔形成作用,高浓度效果最佳,研究机制可能与抑制YAP表达而降低bFGF2、VEGF、MMP-9水平相关。

情志应激激素受体调控Yes相关蛋白1影响乳腺癌细胞上皮间充质转化进程研究

目的:探究情志应激激素受体(GR)与Yes相关蛋白1(YAP1)对乳腺癌MCF-7细胞转移的调控机制,以期为乳腺癌的治疗提供新思路。方法:通过免疫组化实验分析乳腺癌组织和癌旁组织GR和YAP1的表达;将MCF-7细胞分为:si NC组、si GR组和si YAP1组,分别通过MTT实验、Transwell实验、细胞划痕实验和流式细胞术分析MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力及凋亡率,通过蛋白免疫印迹实验分析细胞GR和YAP1的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织YAP1与GR的表达水平升高。与si NC组比较,si GR组和si YAP1组的MCF-7细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。与si NC组比较,si GR组的MCF-7细胞的YAP1和GR表达水平降低(P<0.05),si YAP1组的MCF-7细胞的YAP1表达水平降低(P<0.05)。结论:乳腺癌患者的癌组织中YAP1与GR的表达水平升高。GR被激活后,通过调控细胞内的YAP1通路影响MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及凋亡率,进而导致乳腺癌MCF-7细胞转移,靶向调节YAP1抑制乳腺癌上皮间充质转化(EMT)发生可为乳腺癌患者提供新的治疗策略。

益肾化湿颗粒对糖尿病肾病小鼠中Yes相关蛋白的调控作用

目的探讨益肾化湿颗粒(Yishen Huashi Granule,YSHS)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)小鼠的保护作用及可能的相关机制。方法建立STZ诱导DN小鼠模型,随机分为模型组、YSHS组及YAP抑制剂维替泊芬组,同时设立对照组。造模成功后8周开始干预,疗程4周。分别检测各组干预前后尿蛋白及干预后血肌酐、尿素氮水平。疗程结束后处死小鼠,行光镜HE染色观察肾小球病理变化,Western blot检测YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达,RT-PCR检测YAP、CTGF及足细胞蛋白nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达。结果YSHS组在生化指标上较模型组均有好转,HE染色显示肾小球病理损伤有所改善。模型组YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达增多,YAP和CTGF的mRNA表达亦增多,而3种足细胞蛋白的mRNA表达减少。经YSHS治疗后,YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达与YAP、CTGF的mRNA表达量均有所下降,而nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达量升高。结论YSHS可降低DN小鼠尿蛋白、保护肾功能并减轻肾小球病理损伤,其机制可能与下调肾组织中YAP,减少CTGF表达水平并上调足细胞蛋白的mRNA表达有关。

激活Yes相关蛋白(YAP)抑制铁死亡减轻小鼠急性肝损伤

目的探索Yes相关蛋白(YAP)可否通过调控铁死亡影响急性肝衰竭的发生发展。方法将8周龄C57BL/6小鼠20只随机分为对照组、急性肝衰竭模型组、YAP激动剂XMU-MP-1干预组和YAP抑制剂维替泊芬(verteporfin)干预组。肝组织HE染色、肝脏生化学检测观察小鼠肝损伤表现;试剂盒检测小鼠肝组织中铁(Fe)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量;透射电镜观察小鼠肝细胞线粒体改变;荧光定量PCR和Western blot法检测YAP及铁死亡关键基因谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、5-脂氧合酶(5-LOX)的表达情况。结果与对照组相比,急性肝衰竭小鼠肝组织严重淤血,可见炎细胞浸润伴肝小叶结构破坏,XMU-MP-1干预组肝损伤减轻。随肝衰竭发生,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高,XMU-MP-1干预组肝功能改善。此外,电镜观察到肝衰竭小鼠肝细胞内线粒体变小,双层膜密度增高,XMU-MP-1减轻线粒体改变。肝衰竭小鼠肝组织内Fe、MDA水平增加,及GPX4蛋白表达降低、5-LOX表达升高均提示铁死亡参与小鼠急性肝衰竭发生,而活化YAP可抑制铁死亡表现。结论活化YAP可通过抑制铁死亡减轻急性肝衰竭小鼠肝损伤。

RNA结合蛋白Aly/REF输出因子通过上调Yes相关蛋白表达促进胃癌细胞的增殖和迁移

胃癌是一种常见的发病率高、起病隐匿、侵袭性强的消化道恶性肿瘤,其发病机制错综复杂。RNA结合蛋白Aly/REF输出因子(RNAbinding protein Aly/REF export factor, ALYREF)作为一种RNA胞嘧啶的5-甲基化修饰(m~5C)后的结合蛋白质,在调控RNA出核及稳定其表达的过程中具有关键作用;Yes相关蛋白(yes-associated protein, YAP)作为Hippo-YAP信号通路中的关键分子,调控各种恶性肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨ALYREF与YAP在促进胃癌细胞增殖和迁移中是否存在相关性,并初步探索这两者之间的作用机制。本文在胃癌细胞AGS和MKN-45中运用RT-PCR和Western印迹方法检测相关基因表达;CCK8试验检测细胞增殖;划痕试验和Trans-well试验分别检测细胞迁移和侵袭。结果显示,过表达ALYREF后YAP的表达增加(P<0.05),并且促进细胞的增殖、迁移和上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)(P<0.05);靶向敲低YAP,细胞的增殖、迁移和EMT能力显著抑制(P<0.05);过表达ALYREF且靶向敲除YAP与单独过表达ALYREF相比,YAP的表达显著降低(P<0.05),且细胞的增殖、迁移和EMT能力同样得到抑制(P<0.05);靶向敲低ALYREF,细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力显著抑制(P<0.01)。综上所述,ALYREF通过上调YAP表达进而促进胃癌细胞的增殖和迁移。

Yes相关蛋白1和散乱蛋白2对Luminal型乳腺癌预后的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)和散乱蛋白2(DVL2)在Luminal型乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法采用Real-Time PCR和免疫组化方法检测202例Luminal型乳腺癌组织中YAP1、DVL2 mRNA和蛋白表达水平,分析YAP1和DVL2与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系;采用Cox回归分析乳腺癌患者无瘤生存时间的影响因素;Kaplan-Meier生存曲线分析乳腺癌患者YAP1、DVL2表达水平与无瘤生存时间的关系。结果DVL2蛋白的表达水平与乳腺癌患者的TNM分期、有无神经侵犯及癌栓有关。YAP1与腋窝淋巴结、TNM分期、有无神经侵犯及癌栓有关。YAP1 mRNA与DVL2 mRNA表达呈正相关,Cox回归分析结果显示DVL2和YAP1是乳腺癌患者无瘤生存时间的独立影响因素。Kaplan-Meier生存曲线显示DVL2高表达的乳腺癌患者无瘤生存时间较短,而YAP1高表达的乳腺癌患者的无瘤生存时间较长,联合DVL2和YAP1蛋白表达水平分析显示DVL2(-)YAP1(+)组中Luminal型乳腺癌患者的无瘤生存时间明显长于其他3组。结论DVL2和YAP1在Luminal型乳腺癌组织及癌旁正常组织中有不同程度的表达,与乳腺癌患者的某些临床病理特征及无瘤生存时间有关,二者在乳腺癌组织中的表达水平有相关性。

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/Yes相关蛋白(YAP)在非酒精性脂肪性肝病中的调控作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是目前最为常见的慢性肝病,并与多种代谢性疾病密切相关,如2型糖尿病、胰岛素抵抗,以及与高血压和血脂异常相关的心脑血管并发症。NAFLD病因和病理机制复杂,微环境因素和基因表达调节异常存在于疾病进展的各个阶段,并通过累加效应促进疾病发展。缺氧诱导因子(HIF)是核转录因子、Yes相关蛋白(YAP)是转录辅助调节因子,二者通过调节肝脂质沉积与氧化应激,促进炎性因子释放,与NAFLD进展密切相关。本文对HIF-1α/YAP在NAFLD及其相关代谢性疾病进展中的作用进行综述,为探索NAFLD疾病进展过程中的相关治疗靶点提供理论依据。

基于Yes相关蛋白/同源异型盒转录因子通路探讨淋巴管新生在高血压心肌重构中的作用

目的 基于Yes相关蛋白(YAP)/同源异型盒转录因子(PROX1)通路探讨淋巴管新生在高血压心肌重构中的作用。方法 将小鼠分为4组,每组10只:假手术(Sham)+YAP-KO组、TAC+YAP-KO组、Sham+WT组和TAC+WT组。通过超声心动图获得小鼠心动图参数。通过免疫组织化学染色分析小鼠心脏组织中淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE1)表达。小鼠淋巴管内皮细胞(LECs)分为以下6组进行:对照(Control)组、AngⅡ+NC组、AngⅡ+si-YAP组、AngⅡ+YAP组、AngⅡ+si-YAP+Vector组和AngⅡ+si-YAP+PROX1组。通过伤口愈合试验和EDU染色检测LECs的迁移、增殖。结果 与TAC+WT组相比,TAC+YAP-KO组小鼠心脏质量比、心肌细胞大小和间质纤维化面积均显著增加(P <0.05),和淋巴微血管密度显著降低(P <0.05)。与对照组相比,AngⅡ+NC组愈合面积、细胞增殖、管形成数量显著下降(P <0.05),并且AngⅡ+si-YAP组下降程度较AngⅡ+NC组更大(P <0.05),而AngⅡ+YAP组的愈合面积、细胞增殖、管形成数量较AngⅡ+NC组显著增加(P <0.05)。与AngⅡ+si-YAP+Vector组相比,AngⅡ+si-YAP+PROX1组LECs的愈合面积、增殖细胞和管形成数量显著增加(P <0.05)。结论 YAP/PROX1信号通路介导的淋巴管新生可能是一种治疗压力过载引起的心脏功能障碍的潜在靶点。

子宫颈癌病理分级与微血管密度、Yes相关蛋白1的相关性研究

目的:探讨子宫颈癌病理分级与微血管密度(MVD)、Yes相关蛋白1(YAP1)的相关性。方法:选择2019年3月-2022年6月临沂市第三人民医院收治的子宫颈癌患者53例为对象,常规采集病灶组织及癌旁组织(距离病灶≥3 cm)。根据子宫颈癌病理分级分为高分化组、中分化组和低分化组;采用免疫组织化学法测定不同组织中、不同病理分级下MVD、YAP1阳性率;采用Spearman相关系数法对子宫颈癌病理分级与MVD、YAP1阳性率进行分析。结果:子宫颈癌病灶组织中MVD、YAP1阳性率均高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化染色结果显示,子宫颈癌病灶组织YAP1表达于细胞质与细胞核;而MVD表达于细胞质,呈棕褐色、棕黄色,着色度较高;而癌旁组织中阳性染色细胞较少,MVD、YAP1着色程度较低;低分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组与中分化组(P<0.05);中分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组(P<0.05);Spearman相关系数法结果显示,子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1表达均呈负相关(rs=-0.692、-0.452)。结论:MVD、YAP1在子宫颈癌病灶组织中呈阳性高表达,其高表达水平与病理分级存在一定相关性,能为临床诊疗提供新方法。

沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。方法通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。结果沉默YAP1后,A549细胞YAP1mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G1期的细胞比例(P<0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P<0.01)。结论沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标。

Hippo通路中Yes相关蛋白在胰腺癌中的表达及意义

目的:检测Hippo-YAP信号通路中主要效应蛋白Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达,探讨其表达强度与临床病理因素之间的关系及意义.方法:应用免疫组织化学EnVision法测定Hippo信号通路中YAP蛋白在45例胰腺癌及15例正常胰腺组织中的表达,应用RT-PCR方法检测YAP mRNA在45例胰腺癌及15例正常胰腺组织中的表达.结果:胰腺癌组织中YAP蛋白主要表达于胰腺导管上皮细胞,45例胰腺癌组织中YAP的阳性表达率为93.33%(42/45),15例正常胰腺组织中YAP阳性表达率为26.67%(4/15),两组间的表达差异具有统计学意义(2=27.95,P<0.01).在胰腺癌组织中YAP的表达与肿瘤分化程度密切相关(P=0.048),与年龄、性别、吸烟、饮酒、肥胖、糖耐量异常、糖尿病、慢性胰腺炎及临床分期等无关(P值分别是0.577、0.565、0.541、0.224、1.000、0.542、0.555、0.571、0.926).胰腺癌患者血清CA19-9水平与胰腺癌组织中YAP阳性程度呈正相关.YAP m R N A在胰腺癌组织中的表达较正常胰腺组织明显升高(0.3682±0.0783 vs 0.0394±0.0091,P<0.01).结论:Hippo-YAP通路可能在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用.并有可能成为胰腺癌治疗中新的靶点.

溶血磷脂酸与Hippo-Yes相关蛋白在促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的信号通路研究

目的三阴性乳腺癌作为乳腺癌的特殊类型,尚缺乏有效的靶向治疗手段。文中旨在观察溶血磷脂酸(LPA)对三阴性乳腺癌的影响,探讨LPA-Hippo-Yes相关蛋白(YAP)信号通路在促进三阴性乳腺癌侵润转移中的作用及机制。方法体外合成YAP序列特异性小干扰RNA,应用质粒转染MDA-MB-231乳腺癌细胞株为实验组,非特异性siRNA转染MDA-MB-231细胞为阳性对照组,未转染MDA-MB-231细胞为空白对照组,每组设2个平行孔。检测各组对Hippo-YAP信号的影响,其作用机制及对Hippo-YAP上、下游信号通路调控。结果实验组总蛋白中YAP含量、细胞转染48h后的侵袭、转移能力[(0.035±0.005)、(2.200±1.000)个、(3.500±0.800)个]较阳性对照组[(0.343±0.012)、(27.600±5.100)个、(22.300±5.000)个]、空白对照组[(0.384±0.017)、(26.500±4.800)个、(22.350±6.000)个]明显降低(P<0.05)。实验组60、120、240 min时YAP表达量较阳性对照组、空白对照组显著降低(P<0.05)。实验组10、20、50μmol/L的YAP相对表达量显著低于阳性对照组、空白对照组(P<0.05)。C3转移酶和Y27632分别干预后,实验组p YAP mRNA含量(0.255±0.052、0.326±0.017)与空白对照组((0.048±0.032、0.534±0.017)、阳性对照组(0.052±0.021、0.528±0.024)比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组YAP m NA、AREG m NA的表达量(0.176±0.032、0.263±0.008)较空白对照组(0.043±0.013、0.051±0.014)、阴性对照组(0.049±0.025、0.057±0.043)显著升高(P<0.05)。结论 LPA诱导乳腺癌细胞侵袭转移,具有YAP蛋白依赖性,并具有时间与浓度依赖的特点;LPA-Hippo-YAP信号传导通路可能是促进三阴性乳腺癌细胞长时间转移的机制之一。

Yes相关蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织、癌旁(pericarcinoma,PC)组织和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中的表达差异及其意义。方法:采用免疫组化技术检测32例PCa,15例PC和15例BPH中YAP的表达情况;采用Western blot技术检测15例PCa和相应PC中YAP的表达水平。结果:32例PCa中YAP阳性表达25例,阳性率为78.13%;15例PC中YAP阳性表达4例,阳性率为26.67%;15例BPH中未发现YAP阳性表达。组间差异有统计学意义(P=0.000);YAP的表达与PCa的临床分期、Gleason评分有关(分别为P=0.019;P=0.012)。临床分期越高,Gleason评分越高,YAP的阳性率越高。Western blot显示15例PCa中YAP表达(0.723±0.084)均高于相应PC(0.455±0.161),差异具有统计学意义(P=0.006)。结论:YAP在PCa中的表达明显高于非肿瘤组织,表现出明显的肿瘤特异性,有望成为PCa临床诊断和治疗的一个新指标。

Hippo通路、Yes相关蛋白及其与肿瘤关系的研究进展

Hippo通路是近年来新发现的一条细胞信号传导通路，可通过调节细胞增殖和凋亡平衡调控器官体积、调节细胞间的接触性抑制［1］，该通路调控异常可导致人体多种疾病的发生。 Yes 相关蛋白（YAP）由Sudol等［2］于1994年首先报道，其因相对分子质量约65 kDa 又被称为YAP65。研究证实， YAP是Hippo通路的核心效应因子，是一种多功能的细胞内连接蛋白和转录共激活因子，在正常机体细胞内发挥信号转导和基因转录调节的作用。现将Hippo 通路、YAP及与肿瘤关系的研究进展综述如下。

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用si RNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Realtime PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用si RNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少,c-Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加,c-Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。

Yes相关蛋白在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及与细胞增殖的相关性分析

目的检测Yes相关蛋白(YAP)在慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSw NP)中的表达情况,初步探讨YAP在CRSw NP发病机制中的作用。方法收集对照组(13例)的下鼻甲黏膜和CRSw NP组(27例)的鼻息肉,采用实时荧光定量PCR的方法检测组织中YAP、TEAD1、TSLP、IL-33和Ki-67mRNA的表达情况,并分析相关性。结果鼻息肉组织中YAP、TEAD1、TSLP、IL-33和Ki-67 mRNA的相对表达量均高于对照组,组间差异有统计学意义(P均<0.05)。YAP mRNA相对表达水平分别与TEAD1、TSLP、IL-33、Ki-67 mRNA相对表达水平呈正相关(r_s=0.568;r_s=0.693;r_s=0.745;r_s=0.561;P均<0.01)。结论 YAP可能参与了CRSwNP的发病机制,并且可能与TSLP、IL-33等上皮因子的表达增加从而介导鼻息肉细胞增殖有关。