下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

HPV16和Krt7表达在子宫颈癌及癌前病变中的临床意义

目的:探讨人乳头瘤病毒16型(HPV16)、角蛋白7(Krt7)在子宫颈癌前病变中的临床意义。方法:选取2021年1月—2022年12月遂宁市中心医院病理科进行病理检查的宫颈癌患者的病理组织样本50例、不典型增生子宫颈上皮内瘤变(CIN)病理组织样本50例以及慢性宫颈炎病理组织样本50例,分为宫颈癌组(n=50)、CIN组(n=50)以及慢性宫颈炎组(n=50)。采用免疫组织化学法对以上三组的样本的HPV16、Krt7表达量进行检测,统计学分析三组患者的HPV16、Krt7的表达量,分析HPV16、Krt7与宫颈癌组、CIN组、慢性宫颈炎组患者病情发展的相关性。结果:宫颈癌组HPV16阳性表达率(100.00%)高于CIN组(58.00%)及慢性宫颈炎组(36.00%),三组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组Krt7阳性表达率(86.00%)高于CIN组(54.00%)及慢性宫颈炎组(22.00%),三组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组HPV16与Krt7均阳性表达率(90.00%)高于CIN组(44.00%)及慢性宫颈炎组(2.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV16、Krt7的阳性表达可能是宫颈癌的潜在标志物,在宫颈癌病情发展过程中发挥重要作用。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向升高miR-143及抑制Hedgehog信号通路可降低HPV16/18感染的宫颈癌细胞的增殖并诱导凋亡。

HPV16/18型阳性且TCT正常患者发生HSIL+风险预测模型的构建

目的探究HPV16/18阳性且薄层细胞学检测(thinprep cytologic test,TCT)正常患者发生宫颈高级别上皮内病变及以上(high-GRADE squamous intraepithelial lesion or worse,HSIL+)病变的风险因素并构建风险预测模型,以期为临床医生提供一种转诊阴道镜及宫颈活检的辅助评估工具。方法收集2021年6月至2023年6月就诊于内蒙古自治区人民医院门诊,HPV16/18型阳性且TCT正常并行阴道镜+宫颈活组织病理学检查的患者,共207例,通过Logistic回归分析筛选独立风险因素,构建预测模型,建立连线图,并评估模型的预测性能、符合度、准确度及临床实用性。结果(1)单因素卡方检验显示,BMI(χ^(2)=12.13,P<0.001)、吸烟(χ^(2)=15.28,P<0.001)、阴道微生态(χ^(2)=10.074,P=0.002)、感染时间(χ^(2)=82.444,P<0.001)、阴道状态(χ^(2)=66.458,P<0.001)为HPV16/18阳性且TCT正常患者发生HSIL+的独立风险因素;(2)风险预测模型的AUC为0.94(95%CI=0.89~0.98);(3)列线图模型进行内部验证后,其一致性指数(C-index)为0.937。结论本研究基于BMI、阴道微生态、吸烟、感染时间及阴道状态等影响因素建立的预测模型预测HPV16/18型阳性且TCT正常患者发生HSIL+具有较好的区分度、准确度及临床实用性,可为临床医生面对HPV16/18型阳性且TCT正常患者是否行阴道镜+宫颈活组织病理学检查提供参考意见。

HPV16 E5多表位肽免疫原性研究

目的筛选人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白多表位肽段,并评估其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫的免疫原性反应。方法通过Uniprot获得HPV16 E5蛋白的氨基酸序列,采用EXPASY和SYFPEITHI等软件预测HPV16 E5蛋白的表位,筛选出富含B细胞和CTL表位的氨基酸肽段——HPV16 E5蛋白N端处aa28-46(LIRPLLLSVSTYTSLIILV),进一步用该多表位肽免疫C57BL/6小鼠,评估其诱导产生特异性体液免疫和细胞免疫的反应。结果该肽段可诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,且抗体滴度随着免疫次数增加而升高,同时可诱导小鼠产生特异性的CTL反应,在效靶比为40∶1时,对靶细胞产生显著的特异性杀伤作用。结论HPV16 E5蛋白多表位肽aa28-46(LIRPLLLSVSTYTSLIILV)具有良好的免疫原性,可为基于HPV16 E5蛋白的疫苗研究提供基础。

cAMP/PKA通路在HPV16/18相关宫颈癌中的表达情况及临床意义

目的探讨cAMP/PKA通路在HPV16/18相关宫颈癌中的表达情况及临床意义。方法选取86例宫颈癌患者作为研究组,取同期患有妇科其他良性病变行宫颈切除手术患者75例作为对照组。将研究组患者术后切除的宫颈病变组织进行收集,同时收集对照组患者术后切取的宫颈组织标本于液氮中保存。对两组研究对象组织标本中cAMP/PKA通路的表达水平进行比较,采用PCR扩增及膜杂交法对cAMP/PKA阳性组与阴性组标本进行HPV检测。对cAMP/PKA阳性组与阴性组进行免疫组化法检测血管内皮生长因子表达水平情况。采用Spearman相关性分析,对cAMP/PKA通路表达与VEGF表达及宫颈癌HPV16/18感染情况进行相关性分析。结果研究组标本中cAMP/PKA通路阳性率明显高于对照组(P<0.05)。cAMP/PKA通路阳性组患者HPV16/18总阳性率为93.59%,阴性组HPV16/18总阳性率为50.00%,cAMP/PKA通路阳性组中HPV16/18阳性率明显高于阴性组(P<0.05)。cAMP/PKA通路阳性组中VEGF表达水平呈阳性表达有70例(89.74%),阳性率为89.74%;在阴性组中呈阳性表达为3例(37.50%),阳性率为37.50%,cAMP/PKA通路阳性组中VEGF阳性率明显高于阴性组(P<0.05)。经Spearman相关性分析可知,cAMP/PKA通路与VEGF表达水平呈正相关性(P<0.05),cAMP/PKA通路表达水平越高,VEGF的表达水平越高。cAMP/PKA通路与宫颈癌HPV16/18感染情况呈正相关性(P<0.05),cAMP/PKA通路表达水平越高,患者感染HPV16/18的概率越大。结论cAMP/PKA通路的表达与VEGF表达水平及患者感染HPV16/18呈正相关性,cAMP/PKA通路的表达水平升高,可以促进VEGF的表达,同时患者感染HPV16/18的风险也升高。

HPV16感染患者临床特点分析

目的探讨感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)的临床特点。方法选择2013-01至2021-12北京京煤集团总医院行HPV分子检测中HPV16阳性患者542例,分析患者合并感染其他HPV情况、不同年龄段感染情况及HPV16转阴情况。结果(1)542例中,单一阳性330例,占60.9%;合并其他高危感染173例,占31.9%;合并低危感染39例,占7.2%;合并其他高危组宫颈活检CINⅡ及以上患病率(44.2%)高于合并低危组(21.4%,χ^(2)=4.880,P=0.027)。(2)≤29岁、30~39岁、40~49岁、50~59岁、≥60岁各年龄组患者三种感染情况的总体分布差异无统计学意义(χ^(2)=11.185,P=0.191);≤29岁年龄组与30~49岁年龄组相比宫颈活检构成比差异无统计学意义(χ^(2)=3.369,P=0.338);30~49年龄组宫颈鳞状上皮内病变CINⅢ级检出率高于其他年龄组(χ^(2)=4.566,P=0.033);50岁以下组上皮内瘤变检出率更高(χ^(2)=10.313,P<0.001)。(3)183例随诊中,134例HPV16转阴,转阴时间2~75个月,中位数16个月;359例宫颈活检患者,随诊152例HPV16转阴,转阴时间1~39个月,中位数8个月,差异有统计学意义(U=6681,P<0.0001)。结论对年龄小于50岁,且合并其他高危型感染的HPV16感染患者,应积极行阴道镜活组织病理检查。

HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌中的分布及对IRF9的影响

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级的关系;收集67例维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本、21例维吾尔族CIN1标本,68例汉族子宫颈鳞状细胞癌标本和28例汉族CIN1标本,从收集的标本中提取DNA,PCR扩增E6和E7基因,PCR产物纯化后测序。将HPV16感染阳性标本进行免疫组化检测。结果维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为31例(46.27%)和7例(10.45%),CIN1标本中变异均为7例(33.33%)。汉族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为12例(17.65%)和37例(54.41%),CIN1变异分别为8例(28.57%)和13例(46.43%)。维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中E6-295T/G的变异率高于汉族,汉族子宫颈鳞状细胞癌中E7-647A/G的变异率高于维吾尔族,差异有统计学意义(P<0.05)。CIN1标本中两民族间E6-295T/G和E7-647A/G的变异,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,IRF9在子宫颈鳞状细胞癌中的表达高于CIN1(P<0.05),子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295G/E7-647A变异组IRF9的表达高于E6-295T/E7-647G变异组和E6-295T/E7-647A未变异组(P<0.05)。E6-295T/E7-647G变异组与E6-295T/E7-647A未变异组的IRF9蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中HPV16 E6-295T/G变异高于汉族,汉族E7-647A/G变异高于维吾尔族。HPV16 E6-295T/G变异的子宫颈鳞状细胞癌组织中IRF9蛋白表达水平增高,可能在子宫颈癌的发生中起作用。

CRISPR/Cas9敲除内源TCR增强TCR-T细胞对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的杀伤

目的:基于CRISPR/Cas9基因编辑技术制备无内源TCR的TCR-T细胞并鉴定其在体外杀伤HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的功能。方法:培养健康志愿者外周血CD8^(+)T细胞和Jurkat细胞,CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CD8+T、Jurkat细胞的TCR基因,制备过表达转基因TCR的重组慢病毒,在敲除内源性TCR的CD8^(+)T和Jurkat细胞中用慢病毒过表达转基因TCR制备TCR-T细胞,多色FCM检测TCR-T细胞中TCR和CD3的表达水平,荧光素酶活性实验检测TCR-T细胞对HPV16阳性SiHa细胞的杀伤效率。结果:CRIPSR/Cas9基因编辑技术高效地敲除了外周血CD8^(+)T细胞和Jurkat细胞中的TRAC和TRBC基因,敲除效率分别为(81.4±4.5)%、(98.5±0.07)%,制备的无内源TCR的TCR-T细胞高效表达转基因TCR,在外周血CD8^(+)T和Jurkat细胞中表达率为(66.0±17.8)%、(97.3±2.6)%,敲除内源TRAC和TRBC基因有效增强CD8^(+)T和Jurkat细胞膜表达转基因TCR(均P<0.01),敲除内源TCR增强TCR-T细胞特异性杀伤HPV16阳性的SiHa细胞[(71.4±1.0)%vs(35.1±2.0)%,P<0.01)]。结论:无内源TCR的TCR-T细胞显著增强转基因TCR的表达和对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的靶向杀伤能力,为提高TCR-T细胞的临床疗效提供了实验依据。

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响,伤口愈合试验检测细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平,Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象,在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤,验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同,对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用,对HeLa细胞增殖无显著影响,对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组CaSki和HeLa细胞中HPV16 E6 mRNA表达水平降低,p53和p21 mRNA表达水平在3种细胞中均升高(P<0.05)。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组3种细胞波形蛋白表达量降低,E-钙黏蛋白、p53和p21表达量增加(P<0.05)。结论:β-D-葡聚糖抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6表达并上调p53和p21表达,抑制HPV16阳性宫颈癌细胞的增殖、迁移,调节细胞周期,促进细胞凋亡,并在体内发挥抗肿瘤作用。

聚焦超声技术用于宫颈感染HPV16、18转阴治疗的临床研究

目的 探讨超短聚焦超声技术对宫颈感染HPV16、18转阴治疗的可行性。方法 选取我院门诊自,HPV-DNA检测示有16和(或)18(+),病理提示低级别鳞状上皮内病变(LSIL)及以下者共110例,随机分入HIFU(聚焦超声)组(n=41)、LEEP组(n=39)、药物组(n=30)进行治疗,观察治疗后并发症的情况及治疗后6、12个月HPV转阴情况。结果 HIFU组和LEEP组转阴率高于药物组,差异有统计学意义(P<0.05)。HIFU组和LEEP组间差异无统计学意义(P=0.065>0.05)。Normal组和宫颈炎组转阴率高于LSIL组,差异有统计学意义(P<0.001),Normal和宫颈炎组转阴率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPV-mRNA阳性组无论采取哪种治疗方式,转阴率均低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.01)。HIFU组治疗后并发症发生明显低于LEEP组,创面愈合时间短于LEEP组(P<0.05)。结论 利于病毒清除HPV转阴,同时自内向外的治疗,保留了组织完整,并发症低,对于育龄女性尤其有生育要求的女性,作为高危HPV感染的治疗方式更值得推荐。

HPV宫颈癌检出率影响因素及阴道体外定性HPV-DNA检测在HPV16/18分流筛查中的应用

目的探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)宫颈癌检出率影响因素及阴道体外定性HPV-DNA检测在HPV16/18分流筛查中的应用。方法采用分层整群随机抽样的横断面调查方法对5217例体外定性HPV-DNA核酸检测患者检测结果进行分析。记录患者临床资料,分析影响HPV宫颈癌阳性检出率的危险因素。基于危险因素构建列线图模型并利用受试工作者(receiver operating characteristic,ROC)曲线和校准曲线评价模型的应用效果。结果5217例患者经阴道体外定性HPV宫颈癌筛查并经阴道镜病理诊断检查,结果显示,HPV真阳性2187例,真阴性2248例,假阳性495例,假阴性287例;准确性为85.01%,敏感性为88.40%,特异性为81.95%,阳性预测值为81.54%,阴性预测值为88.68%。年龄>45岁,伴有糖尿病、高血压、高血脂、子宫内膜炎、乳腺增生、阴道炎、卵巢囊肿、乳腺炎的阳性检出率较高,是HPV-DNA宫颈癌结果阳性检出率的影响因素。ROC曲线下和校准曲线显示模型应用效果良好。结论阴道体外定性阴道体外定性HPV-DNA宫颈癌筛查具有较高的准确性,可应用于分流筛查HPV16/18分型。

HPV感染病例与P16^(INK4a)表达的关联研究

目的:研究P16^(INK4a)在宫颈炎症与宫颈鳞状上皮内病变以及癌组织中的免疫表达及其与临床病理特征和HPV-DNA分型的相关性。方法:收集商丘市第一人民医院2020年4月至2023年4月404例宫颈病变组织病理活检,包括炎症组织、宫颈鳞状上皮内病变以及鳞状细胞癌(SCC);统计所有病例的P16^(INK4a)免疫组化染色与HPV-DNA分型结果,并分析各病变组织中的P16^(INK4a)与HPV分型关系。结果:P16^(INK4a)的表达在各种宫颈病变组织中存在显著差异(P<0.05),且P16^(INK4a)的阳性率与表达强度随宫颈病变程度的加深而增加;宫颈组织中P16^(INK4a)的表达在低危型与高危型HPV间有显著差异(P<0.05),P16^(INK4a)的表达强度与高危型HPV有相关性(P<0.001)。结论:P16^(INK4a)免疫染色结合HPV-DNA分型能有助于鉴别高级别CIN和宫颈癌,以及区分这些病变与低级别CIN和正常宫颈组织。

高危型人乳头瘤病毒a9组感染女性不同程度宫颈病变的阴道微生物菌群特征

目的 研究不同程度宫颈病变女性阴道微生物菌群特征,探讨通过改变阴道菌群,阻止宫颈癌变的可能性。方法选取2021年10月至2023年5月首都医科大学附属北京朝阳医院阴道镜门诊就诊的单一亚型高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)α9组感染的患者,按宫颈组织病理学诊断结果分为低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)或正常者(LSIL-组)207例和高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)及宫颈浸润癌者(HSIL+组)117例。应用16S r RNA V4区基因测序技术鉴定并比较两组受试者阴道微生物群特征。应用秩和检验、卡方检验、曲线拟合、线性判别分析效应(Linear discriminant analysis Effect Size,LEf Se)分析HPVα9组感染不同程度宫颈病变女性阴道微生物菌群特征与宫颈病变的关系。结果 HSIL+组与LSIL-组女性感染HPV亚型的差异有统计学意义(P<0.05),两组阴道微生物群的物种数目、香农指数差异无统计学意义(P>0.05)。在不同程度宫颈病变女性,阴道菌群动态改变,其变化趋势与宫颈病变的结局有关。LEf Se分析发现HSIL+组葡萄球菌属显著高于LSIL-组,LSIL-组普雷沃氏菌属的相对丰度高于HSIL+组(Z=2.59,P<0.05),普雷沃氏菌、假单胞菌与乳杆菌联合降低HSIL的发生。分层分析发现初次性生活年龄≤20岁、产次<3次、无恶性肿瘤家族史、教育程度≥本科、体质量指数<24 kg/m2时,普雷沃氏菌属相对丰度不同,发生高级别病变的风险不等,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 不同程度宫颈病变阴道微生物群的构成不同,多个菌属间可能存在内在平衡。高度宫颈病变时葡萄球菌属丰度高,普雷沃氏菌属丰度增加与正常宫颈及低级别病变密切相关,并受多种因素影响。

新疆维、汉族宫颈鳞癌病变中HPV16 E6基因变异分析

目的分析新疆地区维、汉族妇女宫颈鳞癌组织中HPV16型E6基因的变异情况。方法从新疆地区5例维吾尔族妇女和5例汉族妇女宫颈活检组织中提取病毒基因组DNA,经反向膜杂交检测确定为HPV16单一感染。采用PCR技术扩增HPV16E6基因片段,克隆到pUC18-T载体中进行DNA测序。结果成功克隆了HPV16E6基因,DNA测序结果表明,与德国标准株相比,10例宫颈鳞癌组织中共检出12种E6基因突变类型,包括107(T→C)、133(A→C)、168(C→G)、178(T→G)、310(T→C)、321(T→C)、341(T→C)、350(T→G)、375(A→G)、410(T→A)、499(G→T)和548(A→G),其中178(T→G)和350(T→G)的突变频率较高,均为30%(3/10)。汉族和维吾尔族标本中共有的突变包括178(T→G)和350(T→G),仅存在于汉族标本的突变为107(T→C)、133(A→C)、168(C→G)、310(T→C)和499(G→T),仅发生在维吾尔族标本的突变为321(T→C)、341(T→C)、375(A→G)、410(T→A)和548(A→G)。结论与德国标准株比较,新疆维吾尔族、汉族宫颈癌患者中HPV16E6基因存在新的变异,其中178(T→G)和350(T→G)型基因变异为热点突变;新疆地区宫颈癌的高发可能与HPV16E6基因突变有关。

HPV16感染p53及MDM2蛋白表达在宫颈癌中的意义

目的:检测新疆维吾尔族(维族)宫颈癌中HPV16感染、p53和MDM2蛋白表达情况,探讨三者在宫颈癌致癌机制中的相互作用及意义。方法:应用半巢式PCR及免疫组化方法检测79例宫颈鳞癌(实验组)、40例正常宫颈组织(对照组)中HPV16DNA和p53、MDM2蛋白表达。结果:1)实验组中HPV16DNA检出率为81.0%(64/79),高于对照组7.5%(3/40),两组比较有显著性差异(χ2=58.328,P=0.000)。2)实验组中p53蛋白表达率为68.4%(54/79),高于对照组12.5%(5/40),两组比较有显著性差异(χ2=33.140,P=0.000)。3)实验组中MDM2蛋白表达率为39.2%(31/79),高于对照组10.0%(4/40),差异有显著性(χ2=10.936,P=0.001)。结论:对HPV感染和p53、MDM2蛋白表达关系的分析显示,在大多数HPV阳性的宫颈癌中p53和MDM2蛋白表达一致,其相互作用在宫颈癌的发生、发展中具有重要意义;在HPV阴性的宫颈癌中,可能主要由MDM2基因通过p53依赖和p53非依赖两条途径发挥致癌作用。另外,HPV、p53和MDM2也可能各自具有独立的致癌作用。

葡甘露聚糖抑菌护理凝胶的制备、抗HPV 16活性以及分子对接研究

葡甘露聚糖抑菌护理凝胶(Glucomannan antibacteria care gel,GACG)是本课题组开发的一款已上市的治疗女性阴道炎症的抑菌护理剂。本文介绍了GACG的制备工艺,通过建立高危型HPV 16假病毒感染人胚肾293FT细胞模型,重点研究GACG的主要活性成分白芨葡甘露聚糖、积雪草总苷和蛇床子精油对高危型人乳头瘤病毒16(Human papillomavirus type 16,HPV 16)的抗病毒作用。研究发现积雪草总苷和蛇床子精油对高危型HPV 16假病毒具有明显的抗病毒活性,分子对接进一步探究了积雪草苷、羟基积雪草苷以及蛇床子素对HPV 16抑制的可能机制。

纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响

目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度（6.25,12.5,25,50 mg.L^-1）的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间（12,24,48,72 h）,光镜和透射电镜观察实验组（不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组）和对照组（不加药物的细胞）细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达。结果：纳米雄黄混悬液25~50 mg.L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0.01）,且细胞呈G0-G1期阻滞。RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制。结论：纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关。