斑马鱼外周血液及造血器官血细胞发生的观察

通过对斑马鱼外周血涂片以及肝脏、肾脏和脾脏的组织印迹片进行Wright’s-Giemsa混合染色,光镜观察其中各种血细胞的大小、形态特征,并对血细胞进行分类统计,研究了斑马鱼外周及造血组织血细胞的发生过程。研究发现,斑马鱼的血细胞除红细胞外,还包括单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、少量的嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和血栓细胞。斑马鱼血细胞的发育大致经过3个阶段,即原始阶段、幼稚阶段和成熟阶段。造血母细胞从造血器官释放入外周血中有一个成熟过程。原始红细胞只在肾脏中出现,而肾脏中幼稚型红细胞的数目也最多。原始粒细胞、原单核细胞和原淋巴细胞在3种器官中均有出现,肾脏最多。可见肾脏是斑马鱼主要造血器官,脾脏和肝脏是其辅助造血器官。

斑马鱼促性腺激素释放激素基因的克隆与表达

目的克隆斑马鱼促性腺激素释放激素(GnRH)基因,构建重组质粒pQE30-GnRH并获得表达蛋白。方法从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法获得斑马鱼GnRHcD-NA。将该cDNA插入质粒pQE30中,并使其在大肠杆菌RB791中表达。经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达情况。结果斑马鱼GnRHcDNA长为207bp,编码的GnRH前体为69个氨基酸残基。与鲤鱼、鲫鱼、拟鲤、黑头软口鲦等淡水鲤科鱼类的氨基酸序列同源性比较,分别为74.4%,69.8%,73.3%和73.3%。电泳结果显示一新的分子量约为14.4 kDa的特异蛋白带。结论本研究所克隆的斑马鱼GnRH基因属于GnRH-Ⅱ。构建斑马鱼GnRH原核表达质粒不仅获得大量的GnRH蛋白,还可对该蛋白做进一步分离纯化以及生物活性方面的研究。

斑马鱼早期胚胎神经形成过程中SOD表达特点研究

为了解以超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)为代表的抗氧化酶系统在胚胎发育过程中的建立及其对胚胎发育的影响,通过免疫组化方法,研究了SOD在斑马鱼早期胚胎发育神经系统中的表达特点。结果表明,在体节分化的不同时期,SOD在脊索、神经管、眼等部位呈不同程度的表达;咽弓形成时期,SOD在咽弓中表达微弱,在脑组织中表达较强;至孵化期,SOD在终末器官中的表达程度不尽相同,其在大脑区域的表达略强于间脑区域。说明在斑马鱼早期胚胎神经形成过程中,以SOD为代表的抗氧化酶系统已经开始逐步形成,维持胚胎组织细胞中活性氧(ROS)的正常浓度,确保胚胎正常发育。

斑马鱼孵化期组织形态学研究

为进一步了解斑马鱼孵化阶段的形态结构变化,采用活体观察与组织切片染色相结合的方法,对斑马鱼孵化期胚胎进行形态组织学观察。结果表明,斑马鱼运动器官"鳍芽"的伸长标志着胚胎孵化期的开始,此时可以清楚观察到胚体形态结构,如卵黄、头部、嗅基板、运动纤毛等;至胸鳍形成期,胚胎已经基本孵出卵膜,其内部器官形态发生已经基本形成,摄食器官口和运动器官、循环系统、感觉及其神经系统均进一步完善,为孵出后幼鱼的独立生存做好准备。

斑马鱼GnRH-Ⅱ基因的生物信息学分析

从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法克隆GnRH-ⅡcDNA,其长度为589bp,编码的GnRH-Ⅱ前体为86个氨基酸残基。利用生物信息学方法对克隆得到的斑马鱼GnRH-Ⅱ基因序列、编码蛋白及其理化性质进行分析,并预测其编码蛋白的结构与功能,构建其同源基因的系统进化树。

斑马鱼作为模式动物在鱼类病原学中的研究进展

斑马鱼模型在人类病害的研究上有广泛的应用,其遗传背景较清晰、分子生物学信息资源丰富。该文介绍有关斑马鱼遗传背景的信息资源,以及斑马鱼与水产病害模型的研究进展。

生物柴油与苯对几种环境生物活性的测定

为了评价生物柴油替代苯作为农药助剂的生态风险，室内测定了生物柴油和苯对斑马鱼、蚯蚓及黑麦草的毒性，评价二者对鱼类、土壤环节动物及植物的生态效应。在处理后24～96h，苯对斑马鱼的毒性是生物柴油的3．9～4．8倍。不同剂量生物柴油和苯处理都抑制蚯蚓的生长，苯的抑制作用更明显。生物柴油与苯单独使用对黑麦草基本无活性，0．3％生物柴油与炔草酯混用对黑麦草的鲜质量抑制中浓度（IC50值）为1．22g／hm^2，0．3％苯与炔草酯混用对黑麦苹的IC50。值为7．69g／hm^2，生物柴油对炔草酯的增效作用明显高于苯。综上，生物柴油对鱼类、土壤环节动物的安全性明显高于苯，对植物的毒性较低，但对除草剂的增效作用明显高于苯。

化学品生态毒性测试鱼类模式生物的应用与展望

水生生物毒性测试广泛应用于评估化学品的水生态环境安全,而鱼类生态毒性数据为水生生态风险评估与风险管理提供基础。本文总结了现有的鱼类水生毒性测试标准及常用的物种。阐述了常用水生鱼类模式生物,如斑马鱼Danio rerio、青鳉鱼Oryzias latipes、黑头软口鲦Pimephales promelas等作为模式鱼类的特征及在生态毒性测试中的应用。环保部7号令推荐稀有鮈鲫Gobiocypris rarus作为中国本土生物在水生毒性测试中使用。目前公开发表的利用稀有鮈鲫的水生毒性研究多集中在急性毒性方面,对其他类型的研究如法规毒理相关的长期慢性毒性有待开展。

斑马鱼营养性脂肪肝模型构建

近年来我国集约化水产养殖业发展势头强劲,而水产动物营养性疾病之鱼类脂肪肝的发病也逐渐迅猛起来,逐渐成为制约水产养殖业发展的因素之一,实验拟通过高脂饲料诱导建立斑马鱼营养性脂肪肝模型,为鱼类营养性脂肪肝相关研究工作的开展奠定基础。该实验分别以基础饲料和16%高脂饲料投喂1月龄斑马鱼,在投喂后第14、30、90天3个时间点取样,采用肝脏组织进行H.E染色、透射电镜、masson染色组织切片观察斑马鱼肝脏脂肪变性及纤维化程度;通过荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测斑马鱼肝脏脂合成及脂解相关基因:二酰甘油酰基转移酶基因(DGAT)、过氧化物酶体增殖物激活受体基因(PPAR)、胆固醇调节元件1基因(SREBP1)、脂肪酸合成酶基因(FAS)、诱导细胞死亡脱氧核糖核酸裂解因子样效应因子基因(CIDE)、激素敏感脂肪酶基因(HSL)、甘油三酯水解酶基因(ATGL)的表达水平;采用甲醇–氯仿法提取斑马鱼肝脏脂肪并检测肝脏中甘油三酯的含量。结果显示,在高脂饲料诱导第30天,光镜下可见发生弥漫性肝细胞脂肪变性,脂合成基因显著上调,甘油三脂的含量显著增加;诱导第90天,经透射电镜及masson染色组织切片观察结果证实,斑马鱼肝脏组织由于纤维化病变而使得肝组织功能受损,肝脏的脂合成基因及甘油三脂含量显著降低。研究表明,实验设计的高脂饲料对肝脏的损伤作用显著,30 d的投喂即可诱导发生脂肪肝,90 d投喂斑马鱼肝脏出现肝纤维化,此过程中肝脏脂合成基因表达量及甘油三酯含量先升高后降低,可知斑马鱼肝脏的损伤是由高脂饲料诱导的脂肪大量堆积而引起的,该营养性模型的成功构建在一定程度上弥补了以往构建斑马鱼高脂模型的缺陷,为研究鱼类营养性脂肪肝的发生机制提供了支撑。

单色光对斑马鱼趋光行为的影响

【目的】研究个体和群体斑马鱼对5种单色光的趋光反应。【方法】在无外界光源干扰下,设置红光(625±5)nm、黄光(585±5)nm、绿光(525±5)nm、蓝光(455±5)nm、紫光(400±5)nm等5种人工光源光照环境,利用自制装置研究个体和群体斑马鱼在5种单色光照环境下的趋光反应。【结果】个体斑马鱼在单色光环境下的停留时间比例依次为绿光24.11%、红光15.02%、紫光10.35%、蓝光8.87%、黄光7.96%,绿光显著高于黄光和蓝光(P<0.05),红、黄、蓝和紫四个区之间无显著差异(P>0.05);群体斑马鱼趋光率为紫光(21.31%)、红光(19.96%)、绿光(19.58%)显著高于蓝光(14.07%)和黄光(9.58%)(P<0.05),无论是群体还是个体斑马鱼在黄色光环境下的趋光反应均最不明显;斑马鱼对5种单色光的选择指数表明,个体斑马鱼和群体斑马鱼均趋向蓝、绿光,回避黄光;紫光和红光则表现为个体斑马鱼回避,群体斑马鱼趋向。斑马鱼对5种单色光的瞬间适应能力由强到弱依次为绿光、红光、紫光、蓝光、黄光。【结论】斑马鱼不喜好黄光环境,对紫光、红光、绿光表现强烈的趋向性,对蓝光的喜好程度适中。

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)参与调节斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂的恢复

旨在阐明MAPK的激活在斑马鱼(Danio rerio)卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用。用17α,20β双羟孕酮(17α,20β-DHP)单独作用及17α,20β-DHP与U0126(MAPK上游信号MEK阻断剂)共同作用两种方法,分别培养斑马鱼卵母细胞。采集不同培养时间的卵母细胞,经裂解变性后利用SDS-PAGE电泳和Western Blot蛋白质免疫印迹技术,检测MAPK磷酸化变化,并且观察生发泡破裂(GVBD)发生情况。结果表明,斑马鱼卵母细胞在17α,20β-DHP诱发下6h基本发生GVBD,MAPK活性在2h明显升高,一直到6h都保持在较高水平。而加入U0126后,斑马鱼卵母细胞MAPK活性受到明显抑制,同一时间GVBD发生率均低于对照组斑马鱼卵母细胞。以上结果表明,MAPK参与调节斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂的恢复,是斑马鱼卵母细胞GVBD正常发生所必需的。