MiR-192对结直肠癌细胞ZEB2表达及迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-192对结直肠癌SW480和SW620细胞ZEB2(zinc-finger E-box binding homeobox2)表达及迁移和侵袭能力的影响。方法:将miR-192模拟物(miR-192 mimics)分别转染SW480和SW620细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后SW480和SW620细胞中miR-192、ZEB2 mRNA和ZEB2蛋白的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测转染后SW480和SW620细胞迁移和侵袭能力的改变。将重组载体pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染入SW480细胞,应用双荧光素酶报告基因验证ZEB2基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)是否有miR-192的结合位点。结果:与转染miR-192模拟物阴性对照组比较,miR-192 mimics转染后SW480和SW620细胞中miR-192的表达水平上调(P<0.05),ZEB2mRNA及其蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),细胞的迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证结果显示,pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染后,SW480细胞中荧光素酶活性下降(P<0.05),ZEB2基因3'-UTR存在miR-192的结合位点。结论:ZEB2可能是miR-192的靶基因之一,上调SW480和SW620细胞中miR-192的表达可抑制ZEB2的表达,发挥抑制细胞迁移和侵袭的作用。

基于蛋白组学尿道下裂患儿的差异蛋白特点分析及相关蛋白ZEB1的表达

目的:基于蛋白组学观察尿道下裂患儿的差异蛋白特点,并分析相关蛋白ZEB1的表达。方法:收集我院2018年6月—2019年12月泌尿外科44例尿道下裂患儿外周血标本,同时收集44例健康体检儿童血液样本。取两组患儿血浆样本,提取总蛋白,进行二位凝胶电泳分离和图像分析,筛选出差异蛋白,利用质谱技术进行鉴定,并运用RT-PCR方法测定相关蛋白ZEB1mRNA的表达。结果:共筛选出44个差异表达蛋白,通过质谱分析和数据库检索论证,其中上调32个蛋白,下调12个蛋白;上调前5的蛋白有转录因子HES-1、膜联蛋白A3、E盒结合锌指蛋白1、锌指蛋白12和蓬乱蛋白,下调前5的蛋白则有锌转运蛋白10、肌球蛋白9、重组人碱性成纤维细胞生长因子受体2、胰岛素样生长因子2及肌球蛋白12。GO功能分析显示,差异蛋白主要参与了碱基化合物合成、细胞代谢、DNA转录、RNA代谢等生物学过程。KEGG通路分析表明这些蛋白主要集中在信号通路Th17细胞、Jak-STAT信号通路、Wnt信号通路等。通过STRING数据库构建差异蛋白相互作网络分析发现,差异蛋白ZEB1与STAT3、STAT6、CDH1、EB2、CDH2、CTBP1、SUMO1和TP53BP1关系较为密切。尿道下裂患儿血浆中ZEB1 mRNA表达量为(1.04±0.14),显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:运用蛋白组学方法明确了尿道下裂患儿血清差异蛋白质的表达,ZEB1在尿道下裂发生过程中具有重要作用。