Zinc finger protein 139 expression in gastric cancer and its clinical significance

AIM: To investigate the expression of zinc finger protein 139 (ZNF139) in gastric cancer (GC), and to analyze its clinical significance.

胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139与肿瘤细胞凋亡和生存素及B细胞淋巴瘤/白血病-2的关系及意义研究

目的探讨胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139(ZNF139)与肿瘤细胞凋亡、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的关系及意义。方法选取2012年1—6月在河北医科大学第四医院外三科行手术切除的35例进展期胃癌患者为研究对象,收集患者胃癌组织及相应的淋巴结转移组织,采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ZNF139、Survivin、Bcl-2mRNA的相对表达水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平。结果胃癌原发灶AI(10.8±4.7)高于淋巴结转移灶的(8.7±3.0)(t=-2.176,P=0.039)。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均高于胃癌原发灶(P<0.05)。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平均高于胃癌原发灶(P<0.05)。胃癌原发灶Survivin mRNA相对表达水平与AI呈负相关(r=-0.517,P=0.001);淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均与AI呈负相关(r=-0.346、-0.467、-0.511,P=0.042、0.005、0.002)。淋巴结转移灶Bcl-2 mRNA相对表达水平与胃癌原发灶Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关(r=0.791,P<0.001)。在胃癌原发灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关(r=0.482,P=0.003)。在淋巴结转移灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均呈正相关(r=0.436、0.452,P=0.009、0.006);Survivin mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关(r=0.465,P=0.005)。结论胃癌肿瘤细胞在转移过程中抗凋亡能力增强,这可能与ZNF139对部分凋亡相关基因(Survivin、Bcl-2)的调控有关,但这种调控关系在胃癌原发灶和淋巴结转移灶中并不相同。

人胃癌细胞原位移植转移裸鼠原发灶及转移灶中锌指蛋白139的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系研究

目的观察人胃癌细胞原位移植转移裸鼠模型原发灶及转移灶中锌指蛋白139(ZNF139)的表达,探讨其与肿瘤侵袭转移的关系。方法建立人胃癌细胞株SGC7901原位移植转移裸鼠模型,采用逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学S-P法检测ZNF139、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)在原发灶、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、转移淋巴结中的表达情况。结果人胃癌细胞原位移植转移裸鼠模型成瘤率为93.3%(28/30),其中75.0%(21/28)发生肝转移、67.9%(19/28)发生脾转移、85.7%(24/28)发生腹膜种植转移、39.3%(11/28)发生淋巴结转移。ZNF139、MMP-2、MMP-7在肝转移灶、腹膜种植转移灶及转移淋巴结中mRNA表达水平和蛋白表达阳性率均高于原发灶(P<0.05),原发灶、各转移灶中ZNF139 mRNA与MMP-2 mR-NA、MMP-7 mRNA的表达均呈正相关(P<0.05)。结论人胃癌细胞原位移植转移裸鼠模型可很好地模拟胃癌在人体内的侵袭、转移过程。与原发灶比较,转移灶中肿瘤细胞具有更强的侵袭能力,可能与转移过程中ZNF139促进MMP-2、MMP-7的表达有关。

应用蛋白质组学技术筛选鉴定锌指蛋白139调控的胃癌转移相关蛋白质

目的以胃癌SGC7901细胞原位移裸鼠模型为对象,通过荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合液质联用(LC-MS)质谱分析技术鉴定ZNF139调控的胃癌转移相关蛋白质。方法合成针对ZNF139的小干扰RNA(ZNF139-si RNA),以ZNF139-si RNA转染人胃癌细胞株SGC7901,G418筛选。以ZNF139-si RNA质粒转染的胃癌细胞、阴性质粒转染的胃癌细胞及普通胃癌细胞分别进行裸鼠胃癌原位移植。造模成功后取出原位移植瘤及腹腔转移淋巴结。荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术分别分离ZNF139-si RNA各组原位移植瘤及腹腔转移淋巴结蛋白质;选定差异点,胶内酶解后,液质联用(LC-MS)质谱分析技术鉴定蛋白质。蛋白印迹(Western blot)技术验证差异蛋白质的表达。结果转染ZNF139-si RNA质粒后SGC7901细胞中ZNF139的表达受到有效抑制。与阴性质粒组及空白组比较,阳性质粒组原位移植瘤生长更慢(P<0.05),且腹腔淋巴结转移率更低(P<0.05)。蛋白质组学结果发现在阳性质粒组原发灶中Fascin、hn RNPA2/B1表达下调,ANXA1表达上调;阳性质粒组转移淋巴结中ANXA5表达下调(P<0.05)。Western blot验证结果与蛋白质组学结果相符。结论 ZNF139可能通过调节Fascin、hn RNPA2/B1、ANXA1、ANXA5促进胃癌淋巴结转移。

人胃癌耐药细胞株中锌指蛋白139和多药耐药基因表达的关系及意义

背景与目的:研究发现锌指蛋白139(ZNF139)在胃癌中表达异常,但ZNF139与胃癌的多药耐药性(multidrugresistance,MDR)关系尚不明确。本研究检测了人胃癌细胞株SGC7901和耐药细胞株SGC7901/ADR中ZNF139和MRP-1、MDR1/P-gp、GST-π的mRNA和蛋白表达情况,并对其表达关系和意义进行分析。方法:体外培养SGC7901、SGC7901/ADR,逆转录-聚合酶连反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测两种细胞ZNF139和MRP-1、MDR1/P-gp、GST-πmRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)法检测各基因蛋白表达变化情况。合成针对ZNF139的小干扰RNA(siRNA-ZNF139)重组质粒并转染SGC7901/ADR,检测转染前后SGC7901/ADR中MRP-1、MDR1/P-gp、GST-π表达的变化。结果:SGC7901和SGC7901/ADR两种细胞中均有ZNF139、MRP-1、MDR1/P-gp、GST-πmRNA和蛋白阳性表达,SGC7901/ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDR1/P-gp、GST-πmRNA和蛋白表达均明显高于SGC7901细胞(P<0.05)。转染siRNA-ZNF139后SGC7901/ADR细胞中ZNF139表达明显受到抑制,MRP-1、MDR1/P-gp、GST-π表达也明显降低(P<0.05)。结论:ZNF139通过上调MRP-1、MDR1/P-gp、GST-π基因表达而参与胃癌多药耐药形成。

粉防己碱对胃癌耐药细胞ZNF139、MDR1及GST-π mRNA的影响

目的:探讨粉防己碱(TET)对胃癌耐药细胞锌指蛋白139(ZNF139)、多耐药基因1(MDR1)及谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)mRNA的影响。方法:选取胃癌细胞SGC7901以及胃癌耐阿霉素细胞SGC7901/ADR,采用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测两种细胞ZNF139、MDR1、GST-πmRNA及蛋白表达,同时检测2.0!g·ml-1TET处理前后SGC7901/ADR细胞ZNF139、MDR1、GST-πmRNA及蛋白表达。结果:SGC7901/ADR细胞ZNF139、MDR1、GST-πmRNA相对表达量明显高于SGC7901细胞(P<0.05);SGC7901/ADR细胞ZNF139、MDR1、GST-π蛋白相对表达量明显高于SGC7901细胞(P<0.05);TET处理后SGC7901/ADR细胞ZNF139、MDR1、GST-πmRNA及蛋白相对表达量均较处理前明显降低(P<0.05)。结论:TET能下调胃癌耐药细胞ZNF139、MDR1、GST-πmRNA和蛋白表达水平,从而在逆转胃癌多药耐药特性方面有重要作用。

胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白139、血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的研究锌指蛋白139 (ZNF139)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中的表达差异及其临床意义。方法选择2019年2月至2020年8月在西安市长安区医院就诊的78例胃癌患者,共分离出78份癌组织和42份转移淋巴结组织,记录患者临床病理学特征。通过免疫组化法检测患者原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNF139、VEGF表达率,采用Spearman相关性分析原发灶中ZNF139、VEGF表达与临床病理学特征的关系。结果胃癌区域淋巴结转移灶ZNF139和VEGF表达率分别为78.57%、73.81%,明显高于其原发灶表达率的53.85%、50.00%,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌患者原发灶中ZNF139、VEGF表达率在不同肿瘤分化度、不同TNM分期、有无淋巴结转移患者间比较差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,胃癌患者原发灶中ZNF139、VEGF表达阳性率与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移发生呈正相关(P<0.05)。结论 ZNF139、VEGF在区域淋巴结转移灶表达水平较原发灶高,两者表达水平与胃癌病情进展密切相关。

结直肠癌组织中锌指蛋白139(ZNF139)的表达及临床意义研究

目的探究锌指蛋白139(zinc finger protein 139,ZNF139)在结直肠癌(colorectal cancer)组织中的表达及与临床病理参数及预后的关系。方法选取2012年5月~2014年6月就诊于恩施土家族苗族自治州中心医院行手术治疗的67例结直肠癌患者的临床病理资料及癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织进行研究。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法染色检测ZNF139 mRNA及蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析其与结直肠癌患者临床病理因素的关系;采用K-M生存曲线分析ZNF139表达对预后的影响;采用COX回归模型分析影响结直肠癌患者预后的风险因素。结果结直肠癌病灶组织中ZNF139 mRNA(0.651±0.130)表达水平明显高于癌旁组织(0.217±0.070)和正常组织(0.201±0.052),差异有统计学意义(t=24.060,24.947,均P=0.001)。结直肠癌组织中ZNF139蛋白阳性率(52.24%)明显高于癌旁组织(28.36%)和正常黏膜组织(19.40%),差异均有统计学意义(χ^(2)=7.941,15.711;P=0.005,0.000)。结直肠癌组织中ZNF139 mRNA及蛋白表达与肿瘤分化程度、浸润程度、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关(t=4.447~10.964,χ^(2)=16.613~35.850,均P<0.01)。ZNF139阴性表达组患者5年总体生存率为75.0%,优于阳性组患者的51.4%(Log-rankχ^(2)=3.391,P=0.047)。ZNF139表达(HR:2.249,95%CI:1.359~3.712,P=0.003),临床TNM分期(HR:2.016,95%CI:1.230~3.327,P=0.006)和淋巴结转移(HR:2.125,95%CI:1.302~3.469,P=0.002)是影响结直肠癌患者总体预后的独立危险因素。结论ZNF139在结直肠癌组织中高(阳性)表达,与结直肠癌的分化、浸润、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关,是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素之一,可作为临床诊断及评估预后的参考指标。

粉防己碱对人胃癌耐药细胞锌指蛋白139、多药耐药基因表达的影响

目的探讨粉防己碱(tetrandrine,TET)对胃癌细胞及耐药细胞中锌指蛋白139(zinc finger protein139,ZNF139)及多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的影响。方法 MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL)TET对胃癌细胞SGC7901、SGC7901/ADR细胞株的抑制作用;通过RT-PCR法检测TET作用前后SGC7901/ADR细胞内ZNF139、MRP-1、MDR1、GST-π表达情况,以Spearman相关分析检验ZNF139与各多药耐药因子之间关系并计算相关系数。结果 MTT结果显示,2.0μg/mL及以下浓度TET对SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞的抑制率均<10%;在SGC7901/ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDR1、GST-πmRNA表达高于SGC7901细胞(均P<0.05);TET能抑制SGC7901/ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDR1、GST-πmRNA的水平(均P<0.05);TET作用前SGC7901/ADR细胞中ZNF139与MRP-1、MDR1存在相关关系,作用后这种相关性仍存在(均P<0.05)。结论 TET可能通过抑制ZNF139下调、MDR1、MRP1的表达从而逆转胃癌耐药细胞MDR表型。

胃癌区域转移淋巴结中锌指蛋白139与基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-7、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的关系及意义

目的检测锌指蛋白139（ZNF139）与基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-7、基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-1在胃癌原发灶、区域淋巴结转移灶中的表达，并探讨其意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测46例进展期胃癌患者的原发灶和淋巴结转移灶中ZNF139、MMP-2、MMP-7、TIMP-1mRNA和蛋白水平。结果胃癌区域淋巴结转移灶中ZNF139、MMP-2、MMP-7mRNA表达分别为0．63±0．09、0．75±0．11、0．73±0．11，蛋白阳性率分别为80．43％、84．78％、86．96％，均明显高于原发灶的mRNA（0．32±0．05、0．27±0．04、0．21±0．03）和蛋白阳性率（54．35％、52．17％、58．70％）；而转移灶TIMP-1mRNA（0．63±0．09）和蛋白阳性率（43．48％）则明显低于原发灶（1．24±0．18、78．26％，P〈0．05）。ZNF139与MMP-2、ZNF139与MMP-7的在原发灶中mRNA表达均呈正相关（r分别为0．3258、0．3446，P〈0．05），ZNF139与TIMP-1无明显相关（P〉0．05）；ZNF139与MMP-7在淋巴结中mRNA表达水平呈正相关（r=0．3866．P〈0．05），而ZNF139与MMP-2、ZNF139与TIMP-1无明显相关（P〉0．05）。结论ZNF139可能通过调节部分侵袭相关基因的表达参与了胃癌的侵袭转移。

锌指蛋白139对人胃癌细胞株SGC7901增殖及凋亡调控机制探讨

目的探讨抑制锌指蛋白139(zincfinger protein 139,ZNF139)对人胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡的影响及相关机制。方法构建针对ZNF139的siRNA重组质粒并导入SGC7901,逆转录-聚合酶链(RT-PCR)法检测抑制效率;MTT法测定siRNA-ZNF139组、阴性对照组和空白对照组SGC7901细胞活力;流式细胞术观察转染前后细胞周期及凋亡率变化;RT-PCR和蛋白质印迹法检测Cyclin D1、PCNA、Caspase-3和Bcl-2在各组中表达情况。结果0.8μg/mL siRNA-ZNF139质粒转染SGC7901细胞24、48和72h后细胞凋亡率分别为(4.823±0.685)%、(16.827±3.507)%和(20.107±3.305)%,差异有统计学意义,F=24.59,P=0.001 3。转染48h时空白对照组、阴性对照组和siRNA-ZNF139组G0/G1期细胞比例分别为(51.800±1.552)%、(52.633±0.361)%和(62.100±1.908)%,F=25.52,P=0.001 2;转染72h时G0/G1期细胞比例分别为(51.500±1.153)%、(53.567±1.582)%和(60.100±3.365)%,F=11.97,P=0.008。0.8μg/mL siRNA-ZNF139质粒转染SGC7901细胞48h后,siRNA-ZNF139组ZNF139、Cyclin D1、PCNA和Bcl-2mRNA表达分别为0.126±0.032、0.455±0.082、0.300±0.164和0.110±0.032,明显低于空白对照组的0.613±0.119、0.740±0.098、0.523±0.109和0.311±0.133,Caspase-3mRNA表达(0.230±0.028)明显高于空白对照组(0.089±0.018),P=0.001 9;siRNA-ZNF139组ZNF139、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达分别为0.524±0.044 8、0.540±0.052 5、0.535±0.046 1和0.414±0.031,明显低于空白对照组的0.861±0.047、0.750±0.033、0.886±0.058和0.821±0.030,Caspase-3蛋白表达(1.004±0.105)明显高于空白对照组(0.517±0.027),P=0.002 1。结论 ZNF139可通过调节Cyclin D1、PCNA、Caspase-3和Bcl-2基因表达而影响胃癌细胞增殖、凋亡过程。

RNA干扰技术抑制锌指蛋白139对胃癌原位移植裸鼠血清的影响

目的观察抑制人胃癌细胞株SGC7901中锌指蛋白139（ZNFl39）表达对胃癌原位移植裸鼠血清蛋白质的影响，探讨ZNFl39参与胃癌进展的机制。方法构建针对ZNF139的小干扰RNA（siRNA）重组质粒并导入胃癌细胞SGC7901；G418筛选出稳定转染细胞克隆并经皮下瘤鼠间传代6代后应用OB生物胶粘贴法进行原位移植；应用荧光双向差异凝胶电泳（2D—DIGE）及液质联用（LC—MS）技术鉴定差异蛋白点，并应用Westernblot法验证鉴定出的部分蛋白质。结果胃癌原位移植裸鼠成瘤率100％（15／15）。siRNA重组质粒抑制了ZNFl39在SGC7901中的表达，siRNA—ZNFl39组胃癌原位移植裸鼠瘤体生长明显减慢。在转染组和对照组原位移植裸鼠血清中鉴定出5种差异蛋白质，抑制ZNFl39后表达下调的为载脂蛋白E（APOE）、激肽原1（KNGl），表达上调的有α2-巨球蛋白（α2-MG）、线粒体转录终止因子（mTERF）、DIXDCl。Westernblot法对KNG1、mTERF、APOE的表达进行了验证，结果与蛋白质组学一致。结论ZNF139可能通过促进血清APOE、KNGl及抑制mTERF的表达来参与胃癌进展。