血红素氧合酶-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用

背景:前期研究证实血红素氧合酶-1(HO-1)是与人胃癌腹膜高转移细胞株GC9811-P具有亲和力的多肽序列PⅢ的天然配体,两者结合可能抑制胃癌的腹膜转移。目的:探讨HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用及其可能机制。方法:48只BALB/c裸鼠经GC9811-P胃癌组织块胃壁原位种植建立胃癌腹膜转移模型后随机分为3组,于术后1周起分别予ZnPPⅨ、钴原卟啉(CoPPⅨ,HO-1诱导剂)或铜原卟啉(CuPPⅨ,阴性对照)40μg隔日腹腔注射。术后第23d每组取6只裸鼠处死,测定腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量。其余裸鼠用于存活率实验,于出现明显生命衰竭体征时处死,以免疫组化方法检测腹膜转移瘤中CD31标记的肿瘤微血管密度(MVD),以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与CoPPⅨ组和CuPPⅨ组相比,ZnPPⅨ组荷瘤裸鼠腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量均显著减低(P<0.05),生存期延长(P<0.01),腹膜转移瘤MVD和VEGF含量降低(P<0.05)。结论:HO-1参与了胃癌腹膜转移的调控,其抑制剂ZnPPⅨ可能通过抑制肿瘤血管发生而抑制裸鼠胃癌腹膜转移。

CO释放抑制剂ZnPP Ⅸ和NO释放抑制剂L-NAME对大鼠阴茎组织cGMP含量影响的研究

目的:探讨CO释放抑制剂锌卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)和NO释放抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠阴茎组织中cGMP含量的影响。方法:180～220g Wistar大鼠30只,随机均分为3组(正常对照组,ZnPPⅨ组,L-NAME组),ZnPPⅨ组给予ZnPPⅨ[45μmol/(kg.d)],L-NAME组给予L-NAME[50mg/(kg.d)],正常对照组给予生理盐水[1ml/(kg.d)]。用药7d后断头处死大鼠,取阴茎制成匀浆。测定匀浆液中NOS、NO、CO、cGMP含量。结果:与对照组比较,应用CO释放抑制剂ZnPPⅨ后,大鼠阴茎组织中CO、NOS、NO、cGMP含量有一定程度的下降(P<0.05);应用NO释放抑制剂L-NAME后,大鼠阴茎组织中CO、NOS、NO、cGMP含量也较对照组有一定程度的下降(P<0.05)。结论:ZnPPⅨ与L-NAME能够降低大鼠阴茎组织中CO与NO的浓度,同时cGMP的含量也降低。

血红素氧合酶的干预对糖尿病大鼠结肠动力障碍的影响

目的:探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)的干预对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠结肠动力障碍的影响.方法:链脲佐菌素ip建立DM模型,饲养6wk时以碳沫推进实验证实DM大鼠存在胃肠慢传输运动后,所有大鼠分为正常对照组、DM未干预组、DM+Hemin组[予HO诱导剂正铁血红素(Hemin)]及DM+ZnPP组[予HO阻滞剂锌原卟啉(zinc protoporphyrin Ⅸ,ZnPP Ⅸ)];监测体质量、血糖.饲养9wk时再测胃肠推进率,离体肌条实验记录结肠平滑肌条自发收缩反应及对Ach的反应性,Western blot及免疫组化检测近、远端结肠HO的表达.结果:6wk时DM大鼠胃肠慢传输运动模型建立.HO干预对DM大鼠体质量、血糖无影响(P>0.05).9wk时Western blot示DM未干预组(1.20±0.09)、DM+Hemin组(1.08±0.11)及DM+ZnPP组(1.10±0.08)近端结肠HO-2表达无显著差异(P>0.05),但均较正常对照组(1.66±0.14)显著减少(P<0.05);各实验组远端结肠HO-2表达无差异.正常对照组与DM未干预组近、远端结肠HO-1的表达无差异(Western blot示HO-1/α-tubulin:近端结肠0.22±0.02vs0.22±0.03;远端结肠0.23±0.03vs0.23±0.03,P>0.05);DM+Hemin组结肠HO-1的表达(近端结肠0.66±0.09;远端结肠0.47±0.07)较前两组显著增多(P<0.05);DM+ZnPP组结肠HO-1基本无表达.DM+Hemin组胃肠推进指数(54.4%±2.9%vs63.0%±1.2%,P<0.05)、结肠平滑肌条自发收缩频率、波幅和对Ach的反应性较DM未干预组显著下降(P<0.05),而DM+ZnPP组胃肠推进指数(72.5%±2.6%vs63.0%±1.2%,P<0.05)、结肠平滑肌条自发收缩频率、波幅和对Ach的反应性较DM未干预组明显改善(P<0.05).结论:HO干预(诱导或阻断),对DM大鼠体质量、血糖无影响.诱导HO-1使DM大鼠慢传输型结肠动力障碍加重,而阻断HO-1可能改善DM大鼠慢传输型结肠动力障碍.

锌原卟啉-9腹腔注射对脑出血大鼠神经功能的改善作用及其机制

目的探讨锌原卟啉-9(ZPP-Ⅸ)腹腔注射对脑出血(ICH)大鼠神经功能的影响,并探讨其可能机制。方法95只SD大鼠随机分为4组,ZPP-Ⅸ组(30只)、ICH组(30只)、DMSO组(30只)大鼠于脑立体定位仪上缓慢注射自体股动脉血50μL至基底节区,以制备ICH模型;正常组(5只)大鼠于相同部位打孔进针,不注血。ZPP-Ⅸ组在制模后30 min内腹腔注射10 mg/kg ZPP-Ⅸ,DMSO组给予10 mg/kg的35%DMSO,正常组、ICH组均给予等量生理盐水。采用Gareia18分测评法评价大鼠神经功能,Western blotting法检测脑组织Nrf2、结合型Nrf2(bindingNrf2)、HO-1、NF-κB、TNF-α蛋白,RT-PCR法检测脑组织Nrf2、HO-1、NF-κB、TNF-αmRNA,免疫荧光双标法检测脑组织HO-1、Nrf2、NF-κB、TNF-α与CD11b(小胶质细胞标记物)共染的阳性细胞数。结果与正常组比较,ICH组、ZPP-Ⅸ组、DMSO组制模后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d神经功能评分减少(P均<0. 05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组12 h、24 h、48 h、72 h、7 d的神经功能评分减少(P均<0. 05)。与正常组比较,ICH组、DMSO组、ZPP-Ⅸ组各时间点HO-1、Nrf2、NF-κB、TNF-α蛋白表达增加,binding-Nrf2蛋白水平减少(P均<0. 05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组12 h、24 h、48 h、72 h、7 d HO-1蛋白表达减少,binding-Nrf2、NF-κB、TNF-α表达增加(P均<0. 05)。与正常组比较,ICH组和DMSO组HO-1、Nrf2 mRNA表达在制模后各时间点均增加,NF-κB、TNF-αmRNA表达于制模24 h、48 h、72 h、7 d增加(P均<0. 05);与ICH组比较,ZPP-Ⅸ组24 h、48 h、72 h、7 d的HO-1、Nrf2 mRNA表达减少,NF-κB、TNF-αmRNA表达在制模后各时间点均增加(P均<0. 05)。与ZPP-Ⅸ组比较,ICH组制模6 h、12 h、24 h、48 h、72h、7 d的HO-1与CD11b共表达阳性细胞增加,ICH组制模12 h、24 h、48 h、72 h、7 d Nrf2与CD11b共表达阳性细胞增加(P均<0. 05)。结论 ZPP-Ⅸ可能是通过抑制HO-1的表达,从而抑制Nrf2的解离、入核及增加下游炎症因子NF-κB、TNF-α的表达,来加剧ICH大鼠神经功能损伤的作用。