牛肾上腺皮质细胞合成蛋白多糖的研究

我们利用基础培养下的牛肾上腺皮质束、网状带细胞,通过代谢性标记、特异性酶或化学降解、离子交换色谱、凝胶滤过、免疫沉淀分析等方法,研究了该细胞合成蛋白多糖的性质和分子大小。结果表明该细胞在基础培养条件下合成的^(35)S-标记分子是硫酸乙酰肝素蛋白多糖。这种蛋白多糖表现出明显的不均一性。因为三种分子硫酸乙酰肝素蛋白多糖的分子量分别是230、8.3和330kDa。用链霉蛋白酶水解去角蛋白后,它们各自释放的相应的氨基葡聚糖链为30,2.2,150kDa。

转化生长因子β_1刺激蛋白多糖的合成

本文检查了转化生长因子β_1(TGFβ_1)对基础培养下的牛肾上腺皮质细胞硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)合成的调节作用,发现TGFβ_1对HSPG的合成具有强大的刺激作用。在该细胞合成的三种不均一的HSPG中,尤以对大分子HSPG合成的刺激作用为著。因这种大分子HSPG同碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)具有很强的亲合力,且牛肾上腺皮质细胞存在有TGFβ_1和bFGF两种因子的靶部位,故本结果提示该细胞生理生化机能的发挥可能有赖于这两种因子的相互作用。

次声对小鼠肾上腺皮质束状带多边形细胞3-β羟甾脱氢酶和酸性磷酸酶的影响

目的研究次声对小鼠肾上腺皮质束状带多边形细胞酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）、3-β羟甾脱氢酶（3-β hydroxysteroid dehydrogenase，3-βHSDH）的生物学效应。方法观察小鼠在频率8、16Hz，不同声压级80、90、100、110、120、130dB次声第1、7、14天暴露和停止暴露的14天后对肾上腺皮质束状带多边形细胞ACP、3-βHSDH的影响。结果单次1h暴露，8Hz组随声压级的升高。3-βHSDH活力增强，至130dB时，出现酶活力异常降低，同时提示100dB时出现多边形细胞损伤；16Hz组，80dB时小鼠3-βHSDH活力与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05），但已提示存在细胞损伤，100dB时开始出现3-βHSDH活力增强，细胞损伤持续存在。持续次声暴露，8Hz中、低声压级随暴露时间延长。3-βHSDH活力先增强后降低，高声压级时酶活力持续为低水平，中、高声压级均提示出现细胞损伤；16Hz低声压级暴露表现同8Hz低声压级，中、高声压级3-βHSDH活力持续降低，同时提示存在细胞损伤。8Hz、90dB及130dB次声连续暴露14d后停止暴露，经14d间隔，多边形细胞表现为从有局部损伤迹象到有一定程度恢复，但原来暴露声压级越高，恢复程度越差。结论次声对小鼠肾上腺皮质束状带多边形细胞的生物学效应在一定作用强度范围内，可较明显地反映其频率作用特性；高强度、大剂量次声作用时，其特性常被严重的损伤效应所掩盖。脱离次声一段时间后，肾上腺皮质束状带的细胞有一定程度恢复，但原来暴露的声压级越高，恢复的程度越差。

肾上腺皮质束状带特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的构建

肾上腺是人体重要的内分泌器官。由于缺乏肾上腺皮质束状带特异性表达Cre酶的工具鼠,目前对肾上腺皮质束状带细胞中特异表达基因的功能缺乏深入的解析。CYP11B1基因编码类固醇11β-羟化酶,该酶是糖皮质激素合成的关键酶,在肾上腺皮质束状带中特异性表达。本研究旨在利用CYP11B1基因在束状带特异性表达的特点,构建在肾上腺皮质束状带中特异性表达Cre重组酶的转基因动物。采用CRISPR/Cas9技术在CYP11B1基因终止密码子位点定点敲入2A-GfpCre表达框,获得CYP11B1-2A-GfpCre同源重组载体,进而构建CYP11B1Cre小鼠,并通过mTmG和LacZ染色确定Cre酶主要表达在小鼠肾上腺皮质束状带。在此基础上,本研究还用该工具鼠与胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase, CTH)条件性敲除鼠交配,获得了肾上腺皮质束状带CTH特异性敲除的小鼠,并证实了该动物肾上腺皮质束状带中CTH表达缺失。以上结果充分说明肾上腺皮质束状带特异性表达Cre重组酶小鼠构建成功。该工具鼠的成功构建,为深入研究肾上腺皮质束状带相关功能提供了有力工具。