精子发生障碍的遗传学研究进展

不孕不育影响着约10%～15%的夫妇，其中男性因素约占一半。精子发生障碍是男性不育的主要病因，主要表现为无精子症或少弱精子症。大量研究已经确定Y染色体及Yq微缺失与男性不育的相关性。X染色体因其在男性仅有单拷贝而在精子生成过程中表达特殊，对精子发生障碍有重要意义。对畸精子症和弱精子症患者的研究表明，位于常染色体的4个基因（SPATA16，PICK1，CATSPER和AURKC）可能与精子发生障碍有关。虽然经全球范围的努力，预期在不久的将来可提供新的基因检测技术来检测精子发生障碍的遗传学原因，但目前可用于精子发生障碍的基因测试仍然有限。

钙黏蛋白1在少弱精子症精子中的表达

目的:通过检测钙黏蛋白1(CIB1)在少弱精子症患者精子中的表达,探讨其与少弱精子症发病机制的关系。方法:收集25例少弱精子症患者精液标本,其中少弱精子组13例和弱精子组12例,另同期收集正常对照组19例。分别采用半定量PCR(RT-PCR)及荧光定量PCR(qRT-PCR)方法和Western印迹检测,并比较各组精子中CIB1和周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的mRNA及蛋白表达量。结果:1RT-PCR和qRT-PCR检测表明:在少弱精子组、弱精子组和正常对照组的CIB1mRNA的相对表达量均呈上升趋势,而CDK1 mRNA的相对表达量均呈下降趋势,CIB1 mRNA与CDK1 mRNA在3组间两两比较,除qRT-PCR检测中少弱精子组与弱精子组差异无统计学意义(P>0.05),其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。2CIB1蛋白的相对表达量在少弱精子组、弱精子组和正常对照组中呈上升趋势,3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01);而CDK1蛋白的相对表达量呈下降趋势,其中少弱精子组与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CIB1可能通过CDK1通路参与少弱精子症的发病机制。

外科手术重建生殖管道和辅助生殖技术治疗梗阻性无精子症的疗效对比

目的对梗阻性无精子症(OA)患者行外科手术重建生殖管道或辅助生殖技术治疗并进行疗效分析。方法选取78例OA不育患者,按随机数字表法分为A、B组:A组行外科手术治疗,术后仍不孕患者根据精液精子浓度分为体外受精组(A-IVF)和单精子显微注射组(A-ICSI);B组行经皮附睾穿刺取精(PESA)或睾丸精子抽取术卵胞浆内单精子注射(TESA-ICSI)治疗。比较2组临床妊娠结局以及实验室各项指标:获卵数、受精情况、D3胚胎情况以及D5囊胚情况,分析其原因。结果 A组39例(含A-IVF 5例,A-ICSI 19例)患者采取输精管-输精管吻合术及输精管-附睾管显微吻合术,术后1月复查精液可见精子者为31例,复通率为79.49%,复查精液发现精液浓度正常者7例(22.58%),少精患者24例(77.42%),其中包含重度少精者20例(64.52%);39例中,20例临床妊娠(51.28%)。B组39例患者直接经PESA或TESA-ICSI,其中21例临床妊娠(53.85%)。经比较,2组临床妊娠率差别无统计学意义(P<0.05)。A-IVF和A-ICSI 2组的受精率分别为80.77%及79.42%,明显高于B组受精率72.79%(P<0.05)。但A-IVF和A-ICSI 2组的平均D3优质胚胎数、囊胚形成数、移植胚胎数和临床妊娠率与B组比较无显著性差异(P>0.05)。结论外科手术重建生殖管道和附睾或睾丸取精行辅助生殖技术治疗OA患者均能取得一定的疗效;不同类型的OA患者应选择合理的治疗方式。

化疗药物建立小鼠无精子症模型的实验研究

目的制作小鼠无精子症模型,观察其对支持细胞的影响,为进一步的精原干细胞移植提供受体。方法将4~5周龄ICR小鼠分为4组:环磷酰胺组注射环磷酰胺(200 mg/kg)、白消安组注射白消安(40 mg/kg)、复合组注射环磷酰胺(120 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)以及对照组注射0.9%生理盐水。注射后第35天、45天和60天取双侧附睾制作精子悬液,涂片后固定计数,制作并观察睾丸组织学切片(HE)。结果与对照组比较,各给药精子数量显著减少(P<0.05);HE染色:各给药组生精小管内细胞排列疏松,细胞层数减少,各生精小管间隙扩大,间质细胞减少,其中白消安组与复合组于给药后第35天、45天睾丸生精小管内精子及精子细胞消失,第60天时部分生精小管内可偶见精子细胞及精子。结论利用化疗药物采用腹腔内单次注射可以建立小鼠无精子症模型,且操作简捷、周期短、费用低、效果好,可以做精原干细胞移植受体。

特发性不育患者外周血和睾丸组织中无精子因子基因表达的比较研究

目的探讨男性特发性不育患者外周血和睾丸组织中无精子因子（AZF）基因表达的临床意义。方法特发性不育患者62例，其中严重少精子症29例，无精子症33例。抽取患者外周血样本检测，8对引物为sY84和sY86（AZFa区），sY127和sY134（AZFb区），sY254和sY255（AZFc区）及内对照SRY（sY14）和ZFY。PCR检测包括MixA：SRY（sY14）-ZFY-sY84-sY134-sY255和MixB：SRY（sY14）-ZFY-sY86-sY127-sY254；穿刺获得患者睾丸标本，Trizol方法提取总RNA，反转录为cDNA。PCR检测包括SRY（sY14）-DFFRY—RBM—DAZ-β-actin。结果外周血PCR结果显示：62例患者中AZF基因微缺失12例（19．4％），其中无精子症组9例，严重少精子症组3例。睾丸组织RT—PCR结果显示：62例均可见SRY阳性表达；RBMmRNA无表达2例，RBM和DAZmRNA无表达1例，DAZmRNA无表达12例，其中3例外周血细胞内DAz基因正常。结论特发性不育患者睾丸组织存在AZF基因表达缺失，睾丸组织RT-PCR检测有助于确定患者病因，结合外周血PCR检测有助于指导睾丸精子穿刺-胞浆内单精子注射治疗。

Y染色体AZF微缺失和染色体异常与无、少精子症不育患者的临床研究

目的探讨Y染色体AZF微缺失和染色体核型异常在无精子症、少精子症不育患者中的临床意义。方法回顾性分析2012年7月到2016年12月来本院诊治的175例无精子症和少精子症患者,采用多重聚合酶链反应进行Y染色体无精子因子(AZF)微缺失检测;制备外周血染色体并进行核型分析。结果在175例不育男性患者中检出20例不同程度AZF基因微缺失,缺失率为11.4%(20/175),AZF区缺失高频发生于AZFc+d区和AZFc区,占总缺失的55%(11/20)和25%(5/20)。检出7例47,XXY,6例染色体异常,5例常染色体多态,6例Y染色体多态。结论染色体异常与Y染色体微缺失是无精子症、少精子症患者的重要病因,对男性不育患者进行Y染色体AZF微缺失筛查很有必要,为男性不育临床诊断和治疗提供科学依据。