人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究

目的探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果组织块培养法成功培养出FLS。RA患者FLS细胞4～7d细胞数量明显增加,8～12d细胞可以长满瓶底。第3代以后细胞均质性最好,3～7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化。软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16d后FLS细胞可以长满瓶底。FCM分析RA第4代FLSCD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%。RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32)pg/ml,IL-1β为(4.67±0.82)pg/ml。结论组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性。

急性冠状动脉综合征与幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌 (HP)及其不同毒力菌株感染与急性冠脉综合征 (ACS)发病的关系。方法 :应用免疫印迹法 (IBT)检测了 6 1例ACS患者及 5 7例对照者的血清特异性IgG抗体 (HP -IgG)、抗体亚型及血脂水平。结果 :ACS组血清HP -IgG阳性率为 86 .9% ,显著高于对照组的 6 8.4 % (OR :1.87,95 %CI∶1.0 7～ 3.2 8,χ2 =5 .85 ,P =0 .0 16 ) ;对HP -IgG阳性者的分型显示 :含有细胞毒素相关基因A(CagA)的强毒力Ⅰ型菌株与不含CagA的低毒力Ⅱ型菌株在ACS组与对照组间显著差异 (P <0 .0 5 )。HP -IgG阳性组血清TCH ,TC ,HDL及LDL与阴性组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :HP感染与ACS发病显著相关 ,但强毒力的Ⅰ型菌株感染并未增加ACS发病的危险性。HP致ACS并非通过血脂改变而实现。

CYP2C19基因多态性与氯吡格雷治疗后心血管事件发生!关系的研究

目的:探讨中国南方汉族人群中CYP2C19基因多态性与氯吡格雷治疗后心血管事件发生的关系。方法:选取我院拟行冠脉介入术治疗的中国南方汉族冠心病患者161例,均口服氯吡格雷,采用聚PCR RFLP法进行CYP2C19基因型检测。根据氯吡格雷的药物代谢动力学特征把携带野生型基因(*1/*1)归为快代谢型,突变杂合型(*1/*2、*1/*3)为中间代谢型,突变纯合型(*2/*2、*2/*3、*3/*3)为慢代谢型。观察患者在服用氯吡格雷等药物治疗12个月内各种心脑血管事件和出血事件的发生情况。结果:所有患者中CYP2C19基因慢代谢型的比例为9.93%;3组患者间的基本资料比较未见明显差异;心血管事件在CYP2C19基因突变型患者中占7.23%,与野生型基因患者相比有统计学差异(P<0.05)。结论:CYP2C19基因突变与PCI术后氯吡格雷治疗患者的心血管事件发生有关。

光动力治疗兔角膜新生血管的研究

目的:观察光动力学治疗(photodynamictherapy,PDT)缝线法诱导的兔角膜新生血管(cornealneo-vascularization,CNV)的效果和安全性。方法:取新西兰白兔5只10眼,用5-0号的丝线在角膜上缝线诱导角膜新生血管的生长,注射光敏剂Photofrin48h后行DIOMED630PDT激光照射。裂隙灯显微镜观察角膜NV生长情况,并且计算其面积、生长长度,照射后28d处死实验兔,取其眼球做组织病理学检查。结果:角膜缝线后3d开始有新生血管长入,3wk后长到缝线的尖端。激光照射后2d开始角膜新生血管变得模糊不清,2wk后角膜新生血管近完全消失。组织病理学检查见角膜,视网膜以及虹膜、睫状体、脉络膜等组织正常。结论:光动力治疗角膜新生血管有效、安全。

鼻咽癌组织中己糖激酶2的表达及临床意义

目的探讨己糖激酶2(HK-Ⅱ)在鼻咽癌组织中的表达水平及其临床意义。方法选择鼻咽癌患者活检组织25例作为观察组,另取同期慢性鼻咽部炎症患者活检组织为对照组,采用逆转录聚合酶链反应检测两组HK-ⅡmRNA的表达,采用免疫印迹法检测两组HK-Ⅱ蛋白表达。结果观察组HK-ⅡmRNA和蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05)。鼻咽癌组织中HK-ⅡmRNA和蛋白的表达与淋巴结转移有关,且有淋巴结转移者表达高于无淋巴结转移者(P<0.05);与年龄和性别无关(P>0.05)。结论 HK-Ⅱ的高度表达与鼻咽癌的发生、发展有关,可作为鼻咽癌靶向治疗的重要分子标志物。

基因芯片技术对血管紧张素转换酶、血管紧张素原及内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病关系的研究

目的:评估血管紧张素转换酶(ACE)基因、血管紧张素原基因(AGT)及内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)多态性与冠心病的关系,并分析ACE、AGT和eNOS基因多态性在冠心病的发生和发展中是否存在协同作用。方法:选择冠心病患者133人及对照者154人,用基因芯片技术检测ACE、AGT和eNOS基因多态性,并对比其基因型及等位基因频率。结果:冠心病组ACE DD,AGT TT和eNOS TT基因型频率与对照组相比有显著性差异,分别为OR=2.17,P<0.01,OR=2.63,P<0.001,OR=8.50,P<0.05。ACE、AGT和eNOS基因多态性与冠心病明显相关。同时携带ACE DD和AGTTT基因型或AGT TT和eNOS TT基因型者与冠心病明显相关(OR=3.47,P<0.01,OR=1.05,P<0.01)。结论:ACE、AGT和eNOS基因多态性可能是中国人冠心病的危险因素。基因芯片技术为研究多种易感基因与冠心病的相关性提供了一项高效、敏感的方法。

鼻咽癌患者P^(16)/MTS_1抑癌基因失活研究

目的：以原发性鼻咽癌（NPC）患者为研究对象，检测鼻咽癌组织中P16／MTSI抑癌基因失活情况；研究鼻咽癌发生发展规律。方法：采用PCR、多重PCR、限制性内切酶解一PCR方法对34例鼻咽癌患者和34例非肿瘤（腺样体增殖及慢性炎症）患者，进行P基因纯会缺失和异常甲基化检测。结果：34例NPC患者纯缺失率为8．82％（3／34），异常甲基化率为38．24％（13／34），34例非肿瘤患者纯缺失未检出（0／34），异常甲基化率为8．82％（3／34）。结论：本研究鼻咽癌患者P16／MTSI抑癌基因总失活率为47．06％（16／34），表明P16基因失活在鼻咽癌患者中是较为常见的基因变化。鼻咽癌患者中甲基化异常是P16基因失活的另一重要途径，值得引起重视。

急性冠脉综合征合并糖尿病患者经皮冠脉介入术后替格瑞洛与氯吡格雷的疗效比较

目的通过对糖尿病合并冠心病急性冠脉综合征行经皮冠脉介入术患者进行研究,比较替格瑞洛与氯吡格雷的疗效和安全性。方法选取我院拟行冠脉介入术治疗的糖尿病合并冠心病急性冠脉综合征患者120例,随机分为替格瑞洛组与氯吡格雷组。分别服用替格瑞洛180 mg负荷剂量之后90 mg每日2次与氯吡格雷300 mg负荷剂量之后75 mg每日1次维持,所有患者同时加服阿司匹林。入选患者均于服药前采集静脉血,测定血小板聚集率,并于7 d后再次抽血测定ADP诱导的血小板聚集率。观察患者在服药治疗6个月内各种心脑血管事件(包括心源性死亡、再发心肌梗死、支架内血栓形成、靶病变血管的再次重建、脑卒中)和并发症的发生情况。结果替格瑞洛组患者血小板聚集率明显低于氯吡格雷组(P<0.05),出现不良心血管事件概率2组差异无统计学意义(P>0.05),2组间的出血事件发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论替格瑞洛治疗糖尿病合并冠心病冠脉介入术后患者能有效降低血小板聚集率,减少心血管事件发生,安全性较高。

CYP2C19基因多态性对老年冠心病PCI术后抗血小板治疗的影响

目的探讨中国南方汉族人中CYP2C19基因多态性与冠心病(CHD)氯吡格雷治疗后血小板活性的关系。方法选取拟行冠脉介入术治疗的中国南方汉族老年CHD患者193例,均给予氯吡格雷300 mg负荷剂量,75 mg qd维持剂量。通过流式细胞仪检测血小板聚集率,采用聚PCR RFLP法基因型进行CYP2C19基因型检测。根据不同的基因型人群间氯吡格雷的药物代谢动力学特征把携带野生型基因(*1/*1)归为快代谢型,突变杂合型(*1/*2、*1/*3)为中间代谢型、突变纯合型(*2/*2、*2/*3、*3/*3)为慢代谢型。观察患者在服用氯吡格雷等药物治疗后7 d及14 d血小板聚集率的情况。结果野生型与中间代谢型、慢代谢型组间血小板聚集程度比较差异有统计学意义(P<0.05)。中间代谢型、慢代谢型>7 d组血小板活性降低程度显著优于<7 d组,患者CYP2C19基因慢代谢型的比例为9.84%;心血管事件占8.08%,与野生型基因患者相比有差异(P<0.05)。结论 CYP2C19基因突变与CHD PCI术后氯吡格雷治疗血小板活性有关。

血浆置换联合血液滤过对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血清IL-17和IL-6的影响

目的探讨血浆置换联合血液滤过对乙型肝炎相关肝衰竭血清白细胞介素(IL)-17、IL-6的影响。方法 30例乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者在内科治疗的基础上采用血浆置换联合血液滤过单次治疗。用ELISA检测各组血清IL-17、IL-6浓度,同时记录血清ALT、TBil等值并进行统计分析。结果肝衰竭组患者血清IL-17、IL-6水平分别为(123.5±23.0)pg/ml、(110.0±18.5)pg/ml,高于慢性乙型肝炎患者(48.5±6.3)pg/ml、(27.8±5.9)pg/ml和正常对照组(34.7±3.3)pg/ml、(12.1±5.1)pg/ml,P均<0.001;治疗后血清IL-17、IL-6水平分别为(84.7±21.4)pg/ml、(75.8±16.6)pg/ml,较治疗前下降(t=35.1,P<0.001;t=33.4,P<0.001);与好转组相比,人工肝对恶化组血清IL-17、IL-6清除效率降低(t=3.8,P<0.05;t=3.9,P<0.05);人工肝对血清IL-17、IL-6清除效率均与MELD评分呈负相关(r=-0.53、P=0.003;r=-0.43,P=0.015)。结论血浆置换联合血液滤过能有效降低肝衰竭患者血清IL-17、IL-6水平,其对IL-17、IL-6的清除效率可能与患者预后有关。

Tregs及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者中的变化及意义

目的:检测CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者急性期外周血及耳积液中的变化。方法:采用BD CBA Flex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测10例正常对照组外周血、37例(37耳)急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎患者(患者组)外周血及耳积液中3种细胞因子水平及外周血Tregs细胞的比例。结果:患者组Tregs细胞的百分比明显高于正常对照组[(12.82±4.56)%vs.(6.695±1.09)%,P<0.05]患者组外周血IL-6、IL-10、TNF浓度与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05),患者耳积液中3种细胞因子的浓度均明显高于患者及正常对照组外周血(P<0.05)。结论:急性分泌性中耳炎患者Tregs细胞高表达,耳积液中3种细胞因子浓度明显升高。

克氏综合征患者性激素水平分析

目的分析血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平变化规律对快速筛查诊断克氏综合征(KS)患者的应用价值。方法染色体核型分析KS患者22例为实验组,正常核型男性不育患者20例为对照组。所有患者均为雄性激素治疗前进行精液分析及血清性激素水平检测。结果实验组FSH和LH两项指标同时增高占100%,对照组占5%。以FSH和LH两项同时升高为筛查KS患者的诊断指标,其敏感性可达100%,特异性可达97.5%。实验组81.8%的患者血清睾酮水平降低。结论 FSH和LH两项指标同时升高是KS患者血清性激素变化的主要特征,FSH和LH两项同时升高可作为筛查诊断KS患者的指标。

血管紧张素转换酶、内皮型一氧化氮合酶和载脂蛋白E基因多态性与冠心病的相关性

【目的】研究血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的关系。【方法】应用基因芯片技术分析133例冠心病患者和122例对照者ACE、eNOS和ApoE基因多态性,对比两组基因型及等位基因频率。【结果】冠心病组ACEDD基因型频率比对照组显著升高,28.6%vs13.1%,P<0.01,ACE基因多态性与冠心病危险性相关。两组eNOS和ApoE基因型频率差异无统计学意义(P>0.05),eNOS和ApoE基因多态性与冠心病危险性无明显相关。【结论】ACE基因多态性可能是中国人冠心病的危险因素,基因芯片技术可能是研究多种易感基因与冠心病相关性的一种高效、敏感的方法。

流式细胞术微球阵列法检测多种细胞因子在分泌性中耳炎患者中的表达

目的检测急性分泌性中耳炎(acute secretory otitis media,SOM)患者外周血及中耳积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ的表达水平,以期综合分析免疫因素在其发病中的作用。方法采用BD CBA Flex SetIL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、γ-干扰素试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测37例急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎外周血、耳积液,8例鼻咽癌患者放疗后分泌性中耳炎耳积液和10例正常人血清样本中6种细胞因子水平。结果急性上呼吸道感染诱发的中耳积液中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ表达水平显著高于外周血(P<0.05);其中IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ水平明显高于放疗后耳积液水平(P<0.05)。急性分泌性中耳炎外周血上述六种因子较正常对照组外周血差异无统计学意义(P>0.05)。结论中耳粘膜参与了急性分泌性中耳炎患者局部的免疫反应,在其发病中可能起到一定作用。

积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达

目的:研究外源性TGF-β对肝星状细胞系(HSC-T6)的激活作用,以及积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的药理作用.方法:用LDH和MTT实验测定积雪草酸对HSC-T6细胞的细胞毒性和细胞增殖的影响.检测HSC-T6细胞受不同剂量和不同时间TGF-β刺激后表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量和时间.以不同剂量的积雪草酸作用于TGF-β活化的HSC-T6细胞,提取细胞总蛋白,以Western Blot方法检测积雪草酸对TGF-β活化的HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.结果:TGF-β刺激HSC-T6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量为1ng/mL,最佳时间24h.10～30μmol/L积雪草酸可以抑制TGF-β诱导的HSC细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.结论:外源性TGF-β可激活HSC-T6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白;积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.

Smad7抑制肝星状细胞胶原蛋白表达

目的探讨Smad7对TGF-β1刺激肝星状细胞系HSC-T6细胞的Ⅰ型胶原蛋(ColⅠ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法以pTRE-Smad7-M2-flag和pTet-on共转染HSC-T6细胞,筛选出稳定表达标记蛋白(M2-flag)的细胞克隆,确定强力霉素诱导Smad7表达的最佳使用剂量。分组比较Smad7对TGF-β1刺激的ColⅠ和α-SMA蛋白表达的影响,以及Smad7对Smad2/3磷酸化的调节作用。结果强力霉素诱导Smad7表达的最佳使用剂量为2mg/L。强力霉素诱导过表达的Smad7可抑制TGF-β1刺激HSC-T6细胞的ColⅠ和α-SMA蛋白的表达。与单纯使用TGF-β1刺激HSC-T6细胞组比较,Smad7表达可下调HSC-T6细胞的Smad2/3的磷酸化水平。结论过表达的Smad7可下调TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的Smad2/3磷酸化,抑制TGF-β1刺激HSC-T6细胞的ColⅠ和α-SMA蛋白的表达,达到抑制肝纤维化的形成。

全胰腺切除联合自体胰岛移植治疗慢性胰腺炎1例报道并文献复习

目的探讨全胰腺切除联合自体胰岛移植(TP-IAT)治疗慢性胰腺炎的临床疗效。方法佛山市第一人民医院对1例合并多发假性囊肿、胰腺结石的难治性慢性胰腺炎患者行TP-IAT治疗,并对其随访3个月的临床资料进行总结与分析。结果患者TP-IAT术后恢复顺利,无发生出血、严重低血糖等并发症,腹痛完全缓解,未服用镇痛药物。随访期间患者使用外源性胰岛素,空腹血糖控制理想,胰岛细胞功能部分恢复。结论 TP-IAT既能缓解慢性胰腺炎的临床症状,也能预防术后糖尿病的发生,是治疗难治性慢性胰腺炎的有效手段。

2054例中期妊娠产前诊断染色体核型分析

目的探讨胎儿染色体异常与妊娠中期产前诊断常用指征的关系。方法对符合产前诊断指征的中期妊娠孕妇进行知情同意羊水或脐血穿刺,非原位细胞培养和中期染色体核型G显带分析。结果 2 054例羊水和脐血染色体核型分析标本中发现异常核型70例,总体异常核型检出率3.4%。其中染色体数目异常占47.1%,结构异常占30.0%,嵌合体占22.9%。异常核型种类前5位依次为21三体、易位、嵌合体、18三体和缺失,分别占比29.2%,20%、20%、9.2%、6.2%。唐氏筛查高风险而进入产前诊断的孕妇中染色体异常检出率为3.7%(39/1 054),高龄孕妇胎儿异常染色体检出率为1.4%(10/706),超声提示胎儿异常伴有染色体异常胎儿检出率8.1%(15/186)。结论在唐氏筛查高风险各指征中高龄孕妇胎儿异常染色体检出率最低,高龄孕妇应考虑在合并其他产前诊断指征时进入产前诊断。

儿童幽门螺杆菌感染与白细胞介素-8含量的关系

目的 白细胞介素 8(IL 8)作为趋化因子 ,可引起粒细胞在局部组织聚集 ,介导炎症反应。该文探讨小儿幽门螺杆菌 (Hp)感染与胃粘膜及血清IL 8含量的关系。 方法 5 3例患儿进行胃镜检查 ,采集胃粘膜标本用快速尿素酶试验及病理组织学方法检测胃粘膜Hp ,同时用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法 (ELISA)测定其胃粘膜及血清中IL 8的含量。结果 5 3例患儿中 2 9例Hp阳性 ,2 4例阴性 ;Hp感染患儿胃粘膜中IL 8含量显著高于非Hp感染患儿 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而血清IL 8含量在Hp感染组与非Hp感染组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,经根治Hp治疗后 ,Hp感染患儿胃粘膜中IL 8含量下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而血清IL 8含量无显著变化 (P >0 .0 5 )。结论 Hp感染可以诱导胃粘膜炎症细胞合成IL 8,IL 8在Hp相关性胃十二指肠疾病的发病机制中起着重要作用。

ACE、eNOS G894T多态性与厄贝沙坦降压疗效的关系

[目的]探讨高血压病患者血管紧张素转换酶插入/缺失多态性和内皮型一氧化氮合酶G894T基因多态性是否与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(厄贝沙坦)降压疗效相关。[方法]符合WHO/ISH高血压诊断标准的轻、中度高血压患者130例,服用厄贝沙坦单药治疗4周,在临床观察疗效的同时,用基因芯片技术对患者ACEI/D、eNOSG894T基因型进行分析。[结果]含ACED等位基因的患者服用厄贝沙坦后,收缩压下降幅度明显大于I型基因型患者,两者之间差异有统计学意义(P﹤0.05);eNOSG894T各基因型之间血压下降幅度差异均无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]ACEI/D基因多态性与厄贝沙坦类药物的降压疗效有一定相关性。