中国肤纹表型组的研究现状与对策

1978年至今,我国民族肤纹学调查研究取得了显著成绩,制定了全国肤纹研究的技术标准和项目标准;完成了全部 56 个民族的指纹和手掌纹的调查研究,我国成为世界上唯一完成全部民族指纹掌纹调查的国家。回顾过去的肤纹表型组成果,我们仍有许多肤纹方面的工作要努力做好,其中最主要的就是继续深入开展足纹调查研究。目前,我国已完成 31 个民族的足纹调查研究,还有 25 个民族的足纹调查尚未完成,因此我国仍是肤纹研究不全的国家。表型组肤纹研究仍有诸多任务需要完成,期望研究者的持续努力能使我国表型组肤纹学的研究占据并巩固国际领先地位。

基于多组学分析高盐饮食诱导的大鼠高血压靶器官损伤机制

通过高盐饮食的方式构建了高血压大鼠模型,基于高通量测序技术探索了高血压靶器官(心室和心房、肾皮质和髓质、结肠)的潜在损伤机制以及高盐饮食对肠道微生物群的影响。结果表明,喂食12周高盐饮食后大鼠血压显著升高,在对高血压靶器官的转录组数据分析中发现了一系列失调的差异转录因子,16S rRNA测序结果显示大鼠肠道菌群的组成发生了改变,通过功能分析发现了这种变化与微生物组代谢功能失调密切相关。通过共表达分析,进一步探讨了基因组和微生物组之间的串扰在高血压发展中的潜在机制。综上,本研究提供了在治疗高盐饮食诱导的高血压心-肾-肠损伤相关的候选关键基因和肠道微生物群,多组学分析可能是了解基因表达模式和疾病发展的关键方法。

长期低剂量诱导法培养人体抗砷细胞株的研究

目的培养人体具有抗砷特性的细胞株,为人体抗砷基因研究奠定基础。方法采用人体脐静脉内皮细胞(ECV鄄304),在含有低剂量亚砷酸钠(NaAsO2)的培养基中长期培养,并设同步对照细胞组;利用噻唑兰(MTT)检测法计算细胞生存率及半数致死量(LD50)作为反映细胞对砷耐受性改变的指标。结果短期诱导,细胞未表现出砷耐受性提高,经过12周NaAsO2诱导后,48h急性砷毒性实验中,实验组细胞对急性染砷表现出明显的耐受性提高,实验组在各浓度下生存率都明显高于同步对照组。实验组LD50为14.3μmol/L,对照组LD50为3.9μmol/L。结论人体细胞与其他生物体一样,在长期低剂量砷诱导下可以具备抗砷的特性。

农杆菌介导法获得小麦转基因植株的研究

从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,以及高敏感受体基因型 Alondra和扬麦 15 8等。实验结果还表明 ,预培养 10～ 15天的幼胚愈伤组织具有较高的瞬时表达率和再生能力 ,是较好的转化受体。对愈伤组织与农杆菌共培养后的筛选程序进行了摸索 ,获得了 70多个 PPT(Phosphinothricin)抗性植株 ,经 PCR等分子检测分析 ,证明部分植株实现了外源基因的成功转化 ,为进一步的研究工作打下了基础。

非均质底水油藏水平井水淹规律研究

应用洛伦兹曲线评价储层的非均质性,通过反解洛伦兹曲线的方法得到具有统一地层传导系数均值的不同非均质程度油藏的渗透率分布,建立了典型底水油藏地质模型。采用数值模拟方法研究了非均质底水油藏水淹规律。结果表明,当变异系数Vk≤0.2时,油藏可被视为均质的;底水沿高渗透条带突进,渗透率剖面与含水剖面、产液剖面具有一致性;无水采收率与变异系数之间呈修正的逻辑斯蒂函数关系;半对数坐标系下含水率随采出程度的变化关系曲线呈S型,且含水率与可采储量采出程度呈函数关系;Vk<0.3时,油藏见水模式为线状见水整体水淹,0.3≤Vk<0.7时,油藏见水模式为点状见水整体水淹,Vk≥0.7时,油藏见水模式为点状见水局部水淹。

用基因表达谱芯片研究人正常肝和肝细胞癌中差异表达的基因

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异性进行了研究比较。将4096条人cDNA用点样仪点在特制玻片上制备成表达谱芯片；利用肝和肝癌组织的mRNA通过逆转录方法，将Cy3和Cy5 2种荧光分别标记到两种组织的cDNA上，制备成cDNA探针，并与表达谱芯片进行杂交及扫描，重复4次实验，通过计算机数据处理判定基因是否在上述2种组织中有表达差异，筛选出差异表达的基因共903条。基因芯片技术可同时定量研究数以千计的基因表达水平，从而鉴定参与肿瘤发生的基因。

沙棘与微生物联合共生体的初步研究

在盆栽实验条件下通过生物接种技术 ,对非豆科固氮树木沙棘进行联合共生体的人工构建 ,定量研究了VA菌根真菌和Frankia对沙棘生长的促进作用 ,并对VA菌根菌与Frankia之间的联合增效作用进行了探讨 .结果表明 ,双接菌VAH +HR16的促生效果最佳 ,接菌植株的株高、地径、鲜重、叶绿素含量和净光合效率分别比对照提高了 42 2 5 %、33 5 2 %、198 5 6 %、43 33%和 17 4 4 %.

信号肽去除的耐热碱性磷酸酯酶FD-TAP在大肠杆菌中的亚克隆和高表达

通过计算机辅助分析 ,发现在耐热碱性磷酸酯酶 (简称FD TAP)的N端存在 2 6个氨基酸的信号肽序列。但一般信号肽切点并非是完全专一的 ,所以利用基因工程手段将FD TAP的N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸 ,得到了N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸的克隆子 pTAPND2 4、pTAPND2 5、pTAPND2 6和 pTAPND2 7。考虑到这样的克隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二级结构可能阻碍基因的表达 ,所以在保证氨基酸序列不变的前提下另外设计了 4个引物 ,得到了二级结构能量大大提高的 4个克隆子pTAPND2 4C、pTAP ND2 5C、pTAPND2 6C和 pTAPND2 7C。结果表明pTAPND2 4、pTAPND2 5和 pTAPND2 7没有表达 ;pTAPND2 6和pTAPND2 4C的表达量较低 ,pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达量较高。通过测定 pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达蛋白TAPND2 5、TAPND2 6和TAPND2 7的比活和热稳定性 ,发现无论比活和热稳定性TAPND2 7明显比TAPND2 5和TAPND2 6高且比野生型FD TAP略高。

基因芯片技术分析斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制

目的 :研究抗癌药斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制。方法 :应用基因芯片技术检测 12 .5 μmol/ L 斑蝥素作用于肝癌 QGY770 3细胞 2 4 h后基因表达谱的变化。结果 :斑蝥素抑制细胞表达参与细胞周期进程基因 (如 p 2 7、ref - 1、DN Apolymerase delta、X RCC9等 )、能量代谢基因 (如 malate dehydrogenase、ADP/ ATP translocase等 )、致瘤活性基因 (如 c- myc、tre等 )以及肿瘤特异表达基因 (如 bladder cancer related protein等 )。相反 ,斑蝥素促进了多种细胞生长抑制基因 (如 BCRA2、BTG2、dual- specificity protein phosphatase等 )以及凋亡相关基因 (如 ATL - derived PMA- responsive peptide等 )的表达。 结论 :斑蝥素改变调控细胞周期进程、细胞增殖。

酵母LAG1同源的人类长寿保障新基因LASS2的克隆和功能研究

目的 分离和克隆肝癌相关基因。方法 我们用高通量功能筛选和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法从人肝cDNA文库中克隆到一个与酵母长寿保障基因LAG1高度同源的人类新基因LASS2 (homosapienslongevityassurancehomologue 2ofyeastLAG1)。结果 LASS2在正常人肝组织和肾组织中高表达 ,其表达谱不同于早先在人中克隆到的另一个与酵母LAG1高度同源的人类长寿保障基因LAG1Hs- 1。放射杂交基因定位显示LASS2位于人类染色体 1q11,酵母双杂交和GST结合实验发现LASS2蛋白能与细胞中的几个膜相关受体或转运体相互作用 ;另外 ,LASS2在体外对人肝癌细胞的克隆形成具有抑制作用 ,提示该基因可能参与细胞的生长调控。结论 LASS2是一个新的肝癌相关基因。

小鼠及家兔对丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗免疫应答的研究

目的探讨ＨＣＶ复合多表位ＤＮＡ疫苗的可行性。方法把ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ克隆到真核表达载体ｐＲＥＰ９（ＲＳＶ启动子）及ｐＣＤＮＡ３（ＣＭＶ启动子）中，构建真核表达载体ｐＲＥＰ９／ＰＣＸ及ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ。将其肌肉注射免疫小鼠及家兔，检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平，并观察免疫小鼠的安全性。结果质粒ｐＲＥＰ９／ＰＣＸ及ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ于免疫后第 ６ｗｋ和第 １０ ｗｋ时，开始可检测到抗 ＧＺ－ＰＣＸ ＩｇＧ，随后抗体滴度逐渐升高，但水平较低，持续时间较短。ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ肌肉注射免疫家兔后，于第８ｗｋ开始出现特异性抗体，至 ３个月后滴度升至 １： ３ ２００，随后也开始下降。免疫小鼠及家兔可诱发针对ＧＺ－ＰＣＸ融合蛋白的迟发型超敏反应，并刺激淋巴细胞转化。免疫后小鼠的体重正常，肝脾脏未见明显肿大，具有良好的安全性。结论ＨＣＶ多表位基因可诱发特异性免疫应答且安全性好，为ＨＣＶ疫苗的研究提供了一定的理论及实验依据。

人参化学成分的药理活性及其含量积累的研究进展

概括了近年来对于人参主要活性成分的药理学和含量积累的研究进展。相对于药理活性来说,含量积累的研究还相当不够。为了科学地进行人参的栽培与品质评价,还须将成分的药理活性与含量变化相联系进行研究,这为人参的更好利用奠定了基础。

华支睾吸虫成虫全长基因表达文库的构建和基因表达谱的建立

目的 获得尽可能多的华支睾吸虫UNIGENE及全长基因 ,建立成虫基因表达谱 ,为华支睾吸虫发育过程中基因表达的规律和功能基因组学研究奠定基础。方法 构建 pBluescriptⅡSK全长cDNA质粒文库 ,先对 5’端进行随机EST大量测序 ,生物信息分析后归并UNIGENE ,并对归并的结果进行了 3’端的序列测定 ,根据 3’端测序结果 ,再次进行UNI GENE归并 ,对能够拼接上的克隆进行了序列拼接。对预测为完整基因且未测通的序列 ,进行了引物设计 ,walking反应测序 ,将得到的UNIGENE用点样法制备基因芯片。结果 获得 5’端有效EST序列 4 0 6 6个 ,测序结果UNIGENE分析 ,归并获得1775个UNIGENE ,5’端预测的全长基因为 377个。共获得测通的cDNA序列 2 77个 ,其中全长基因 198个。目前制备的华支睾成虫基因表达谱芯片含有 1775个基因。结论 所构建的华支睾吸虫成虫全长cDNA文库质量较好 ,采用的技术路线获取全长基因建立基因表达谱的效率较高。

互花米草内生真菌Fusarium sp.F4中的活性代谢物

目的:研究海草Spartina alterniflora中内生真菌Fusarium sp.F4中的活性代谢物。方法:经硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化并通过波谱分析鉴定了6个化合物。结果:6个化合物分别被鉴定为麦角甾醇(Ⅰ)、过氧化麦角甾醇(Ⅱ)、白僵菌素(Ⅲ),T-2毒素(Ⅳ),ilicicolin H(Ⅴ),alcaligin(Ⅵ)。结论:化合物Ⅴ、Ⅵ为首次从该属真菌中发现。全归属了化合物V的氢谱数据。药理实验表明化合物III对结核分枝杆菌毒株(Mycorbacterium tuberculosis H37RV)有显著抑制。

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的细胞免疫反应及抗体生成的动态过程

目的 观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程。方法 口服免疫BALB/c小鼠 ,一个月后 ,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验 (MTT法 )及T细胞亚群的测定 ;不同免疫时间段内 ,收集实验鼠血清 ,ELISA法检测抗体水平的变化。结果 P30乳酸球菌口服免疫组脾淋巴细胞ConA刺激后增殖能力比两对照组显著提高 ,CD+ 4 和CD+ 8的百分数均明显升高 ;第 12周 (即最后一次免疫结束一个月 ) ,P30乳酸球菌口服免疫组检测到特异性抗体IgG。结论 P30乳酸球菌口服疫苗有效地激发了小鼠细胞免疫反应 ,特异性抗体IgG在免疫结束一个月后生成明显。

细菌视紫红质/聚乙烯醇复合膜的制备及相关功能研究

细菌视紫红质(bR)是一种独特的光敏蛋白,具有光致变色和光驱质子泵功能.将bR蛋白包埋于聚乙烯醇(PVA)基质中,制备了bR/PVA复合膜.利用紫外 -可见分光光度计和自制的毫秒级动力学光谱仪,检测了样品的吸收光谱和光循环M中间体在脉冲光激发下随时间的变化;同时,利用凝胶扫描成像仪及相关分析软件考察了样品成膜后的均匀程度.实验表明:bR/PVA复合膜具有良好的均匀性、透明性和力学性能,而且bR蛋白保持了原有的生物活性和光学性质,bR与M中间体之间能达到一种光可控制的双稳态,M中间体的寿命也得到了显著的延长。

三七总皂苷诱导造血细胞基因表达谱的体外实验研究

目的采用cDNA芯片技术分析三七总皂苷(PNS)诱导造血细胞的基因表达谱,探讨上调基因与细胞增殖、分化的相关性。方法选择增殖、分化相关重要的功能基因480个,制备cDNA膜芯片。人造血细胞巨核系CHRF-288、粒系HL-60和红系K562细胞经PNS处理后,分别提取mRNA,经逆转录后用〔α-33P〕dATP标记,与芯片的cDNA杂交。结果PNS诱导表达上调3倍以上的基因按功能分11类,包括甲基和乙酰化转移酶、诱导分化、抑制凋亡、转录调控蛋白、周期蛋白、信号传递介导蛋白和激酶、受体、DNA和RNA聚合酶,以及大鼠肉瘤(RAS)基因家族等。PNS诱导CHRF-288、HL-60和K562细胞后,mRNA表达水平上调3倍以上的基因分别为78条、89条和59条,占检测基因总数的16.3%、18.5%和12.3%。结论PNS诱导上调的基因均与细胞增殖和分化相关,与我们报道的血液病动物模型、造血干/祖细胞、基因转录调控和蛋白激酶等研究结果相符,为PNS的作用提供了基因表达谱方面的有力证据。

人溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的 利用巴斯德毕赤 (Pichia pastoris)酵母真核表达系统 ,构建真核表达载体 p PIC9K与人溶菌酶基因 (humanlysozyme,h L Y)的重组质粒 p PIC9K- h L Y,表达出具有活性的人溶菌酶 .方法 此项研究在本实验室构建的人溶菌酶(h L Y)基因与 p UC19的重组质粒 p UC19- h L Y的基础上 ,通过设计一对引物 ,用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出人溶菌酶全基因片段后 ,将其克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9K中 ,构建重组质粒 p PIC9K- h L Y,经 Bg1 酶切线性化后 ,用电穿孔法将其转入毕赤酵母细胞内 .通过 G418筛选 ,选到的高拷贝转化子经 PCR检测人溶菌基因与毕赤酵母染色体是否稳定整合 ,阳性克隆经甲醇诱导进行表达 .结果 序列测定 ,经 PCR扩增后的人溶菌酶基因与文献发表的序列相比 ,缺失 4个碱基 .我们决定采用重组 PCR法予以纠正 ,经序列测定结果正确 .用 PCR检测 ,人溶菌酶基因与毕赤酵母染色体稳定整合 .用甲醇诱导表达并以 SDS- PAGE分析 ,在 Mr为 15 0 0 0左右出现一条蛋白带 ,表达量约占上清总蛋白的 0 .47.Western Blot证实表达产物具有天然人溶菌酶的抗原性 .用黄色小球菌平板溶圈法鉴定表达产物具有人溶菌酶的活性 .结论 成功的构建了重组质粒 p PIC9K- h L

蝴蝶兰不同花色品种遗传多样性的RAPD分析

利用筛选到的 2 5个特异引物对蝴蝶兰不同花色品种作RAPD分析 ,确定了 12个品种间的遗传距离 ;并根据Neighbor joining遗传距离矩阵构建系统聚类文件 ,将该 12个品种分为两个家族 :第一家族中包含基色为白色的花色品种 ,花蕊颜色略有不同 ;第二家族为具有条纹的花色品种。品种间遗传距离最大为 0 .783 2 ,最小为 0 .10 3 4。