基于慢病毒载体系统构建重组JSRV-NM假病毒

目的采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代VSV-G病毒的包膜质粒pMD.G,转染293T细胞,复制、包装并产出重组的JSRV-NM假病毒。用real-time PCR检测WPRE表达来测定假病毒的滴度,用接种24孔板的293T细胞检测假病毒感染力。结果成功重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV-NM假病毒,可超速离心浓缩成高滴度(1×108TU/mL)的病毒,Lv-JSRV-NM包膜与Lv-VSV-G包膜按感染复数(MOI)=3的比例感染Hela细胞具有相同的感染能力。结论基于慢病毒质粒构建的JSRV-NM假病毒,能够在293T细胞中复制和扩增,产出的假病毒具有稳定性、感染力和安全性,符合二级生物实验室安全的要求。

复方甘露醇注射液细菌内毒素的检测

将医用甘露醇注射液作1:3稀释,采用鲎试剂抑制或增强试验,检测细菌内毒素,并与家兔法进行对比。结果表明,该注射液经过一定稀释后,对测定无干扰。该法适合医院对甘露醇注射液中细菌内毒素的检测。

CD155依赖m^(6)A修饰调控宫颈癌细胞的恶性行为

目的:探究CD155在宫颈癌中的作用和依赖m^(6)A修饰的调控机制。方法:应用数据库预测宫颈癌细胞中CD155(PVR)的表达情况,CD155对患者预后的影响,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定宫颈癌细胞HeLa和宫颈永生细胞S12中CD155的表达水平。分别运用MTT、平板克隆、迁移侵袭等实验评估CD155对宫颈癌细胞HeLa生长、增殖、迁移和侵袭的影响。应用Western印迹法测定E-钙黏蛋白(E-cad)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平并评价CD155对EMT的影响。MeRIP-RT-qPCR检测CD155是否受m^(6)A调控,Western印迹法和qRT-PCR测定METTL3是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平。放线菌素D处理细胞后检测METTL3对CD155RNA半衰期的作用,利用预测网站m^(6)ATaget预测CD155RNA甲基化位点的识别者(Reader),运用Western印迹法和qRT-PCR分析YTHDF1是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平,放线菌素D处理细胞后检测YTHDF1对CD155RNA半衰期的作用,RIP-RT-qPCR实验进一步确定YTHDF1和YTHDF1-mut对CD155RNA下拉能力。结果:CD155在宫颈癌组织和细胞中表达较高,体内高表达CD155的患者生存率较低。相比S12细胞,HeLa细胞中CD155的表达增加(t=3.749,P<0.05)。CD155的高表达促进了体外宫颈癌细胞的生长(t=3.152,P<0.05)、增殖(t=3.706,P<0.05)、迁移(t=5.422,P<0.01)和侵袭(t=3.599,P<0.05),抑制E-cad的表达促进了Vimentin的表达。MeRIP-RT-qPCR结果显示CD155RNA受m^(6)A调控,METTL3促进了CD155蛋白和RNA(t=6.725,P<0.05)的表达,敲降METTL3之后CD155RNA半衰期降低(t=5.622、6.063、5.857,均P<0.05)。敲降YTHDF1之后CD155的蛋白水平降低,CD155RNA半衰期降低(t=10.93、5.602、4.359,均P<0.05)。在YTHDF1高表达的细胞中,CD155RNA被有效免疫沉淀(t=4.686,P<0.01),但在YTHDF1-mut转染的细胞中,免疫沉淀结果显示下拉的CD155RNA水平明显降低(t=4.462,P<0.05)。结论:CD155RNA在m^(6)A修饰的情况下,被YTHDF1特异性识别,进而稳定性增强和翻译增加,CD155表达增加促进了宫颈癌细胞的恶性行为。

加亚嘉西科逆转录病毒研究进展

从加亚嘉西科逆转录病毒（JSRV）的基因组、JSRV的致瘤信号传导途径、JSRV与宿主共进化方面综述了JSRV的研究进展。JSRV引起的羊肺腺瘤（SPA）与人的细支气管肺泡癌（BAc）极相似，通过对SPA的研究，不仅为BAC早期诊断及预防该病提出新方法，而且为揭示BAC的分子发病机制及探索其基因治疗提供新思路。