浅谈高校仪器共享平台实验技术人员综合素质培养和提升

大型仪器共享平台是高等院校提高教学、科研水平的重要实验场所,支撑相关学科的建设和人才培养,共享平台对外开放效益与平台技术人员的综合素质密不可分。为使平台运转良好,拥有一支具有优良的职业素养、扎实的专业技能、不竭的创新素质的实验队伍至关重要。该文通过提出并分析平台技术人员的现状与问题,结合实际,初步探索出提升其综合素质的方式方法,并归纳出切合实际的技术人员的激励措施,对于稳定实验技术人员队伍具有重要意义。

基于第二课堂的大学生创新能力培养途径的探索

第二课堂是提升大学生综合素质与实践能力的重要渠道,是高校科技创新人才培养不可缺少的育人课堂,也是全面落实素质教育的基本途径。本实验室为开展大学生第二课堂途径进行了多方位的积极探索,总结了第二课堂在大学生综合素质提升、能力培养和教学相长中的独特作用。

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺caspase 9和caspase 3的表达

目的探讨凋亡相关基因caspase 9和caspase 3在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺中的表达及其意义。方法采用TUNEL法检测胸腺凋亡细胞;用免疫组化法检测正常对照组大鼠和EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3蛋白表达。结果正常对照组和EAMG组大鼠胸腺中细胞凋亡指数(IA)分别为(38.70±8.82)%,(27.73±5.76)%;EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3的表达明显下降,较正常对照组比较差异有统计学意义,且胸腺中caspase 9和caspase 3的表达与细胞IA在正常对照组和EAMG组分别呈显著正相关。结论胸腺细胞凋亡障碍可能是EAMG的发病机制之一;caspase 9和caspase 3蛋白表达在介导EAMG大鼠胸腺细胞凋亡障碍的过程中可能具有重要作用。

鼻黏膜耐受对实验性重症肌无力大鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的探讨鼻黏膜耐受处理对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法将实验大鼠随机分为正常对照组、EAMG组和耐受组,将EAMG组及耐受组大鼠采用Rα97-116肽段多点皮下注射法制备成EAMG大鼠模型后,再将耐受组大鼠经鼻腔滴注Rα97-116(V108A)行免疫耐受处理,10d后评估疗效(临床症状、体质量、抗体滴度等),并采用TUNEL法计数对照组、EAMG组及耐受组大鼠胸腺细胞的凋亡程度,用免疫组化法检测3组大鼠胸腺淋巴细胞内Caspase-3的表达,并分析其阳性细胞染色强度。结果 EAMG组大鼠胸腺细胞的凋亡数较对照组显著减少,鼻黏膜耐受处理能明显促进EAMG大鼠胸腺细胞的凋亡,并改善EAMG大鼠的肌无力症状,增加其体重及降低AchR抗体滴度。EAMG组胸腺中Caspase-3阳性细胞表达较对照组明显下调,耐受组其表达则明显增加,3组之间有显著的统计学意义(F=58.26,P<0.01)。结论 Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受能明显减轻EAMG大鼠肌无力症状,缓解胸腺细胞凋亡异常。

IGF-1对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠脑细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)急性期新生小鼠脑细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的影响。方法采用改良Rice方法制备新生小鼠HIBD动物模型。7日龄C57/BL新生小鼠91只随机分为正常对照组(n=7)、假手术组(n=22)、缺氧缺血组(HI组,n=22)、假手术+IGF-1组(n=18)、HI+IGF-1组(n=22)。假手术+IGF-1组、HI+IGF-1组在术后即刻予腹腔注射IGF-1(50μg/kg),假手术组、HI组注射等体积生理盐水,各组于术后0、3、6、12、24、48 h取大脑皮质、海马、丘脑,制成单细胞悬液以罗丹明123(Rho123)标记后使用流式细胞仪测定脑细胞线粒体膜电位。结果①皮质、海马、丘脑分别在术后3、6、12 h出现肿胀、凋亡,HI后48 h神经元肿胀、变性最明显,具有凋亡特征神经细胞达高峰;②正常对照组、假手术组、假手术+IGF-1组皮质、海马、丘脑各部位在不同时点平均荧光强度差异无统计学意义;③IGF-1对大脑皮质损伤修复有两个间期,对丘脑修复延迟且作用时间短;④HI组脑细胞平均荧光强度的升高最先出现在皮质(术后3 h),其次为海马(术后6 h),最后在丘脑(术后12 h),HI+IGF-1组各部位脑细胞平均荧光强度低于HI组(P<0.01)。结论IGF-1可以减轻HIBD后脑水肿,减少神经细胞凋亡;推测IGF-1的神经保护作用可能与减轻HIBD急性期新生小鼠各部位脑细胞线粒体膜电位的降低、改善线粒体功能有关。

NK细胞活化受体及配体在急性白血病患者外周血中的表达和脱离

本研究旨在从NK细胞活化性受体NKG2D及其相应配体——MICA/B、ULBP-1、2、3的表达和血清中脱离情况来探讨急性白血病患者NK细胞免疫防御功能损伤的可能机制。选择30例初发未治疗的急性白血病患者作为观察对象,10例健康者作为对照,应用流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B,ULBP-1、2、3表达水平,用ELISA法检测血清可溶性MICA、MICB(sMICA,sMICB)及可溶性ULBP1-3(sULBP1-3)水平。结果表明,急性白血病患者NK细胞NKG2D的表达低于正常对照组;急性白血病患者白血病细胞表面不表达或弱表达MICA/B、ULBP1-3;急性白血病患者血清中游离的sMICA和sMICB水平均高于对照组,差异有统计学意义(p<0.01),血清sULBP1-3水平与对照组无明显差异。结论:急性白血病细胞表面MICA和MICB的脱离及ULBP表达缺乏可能是急性白血病细胞发生免疫逃逸的机制之一。

葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤的影响及其机制

目的探讨葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤的保护作用及其机制。方法雄性SD大鼠30只,随机均等分为假手术组、模型组、葛根素预处理组。采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉血供,60 min后拔出栓线造成局部脑缺血再灌注损伤。葛根素预处理组在缺血前1 h腹腔注射葛根素(100 mg/kg)。脑缺血再灌注后第5天,HE染色法观察海马CA1区神经元的组织形态学变化,免疫组化法检测海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的表达。结果 HE染色结果显示,与模型组相比较,葛根素预处理明显减少脑缺血再灌注引起的海马CA1区神经元损伤(P<0.05);免疫组化结果显示,与模型组相比,葛根素预处理使海马CA1区Caspase-3、Caspase-9的表达明显降低(P<0.05)。结论缺血前1 h葛根素预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元损伤有保护作用,其主要机制可能与抑制凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达有关。

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。

被动吸烟对子鼠海马神经元内钙／钙调蛋白激酶的影响

本文通过建立实验组孕鼠被动吸烟模型,21d后剖腹产,取子鼠脑组织,采用HE染色、Nissl染色、免疫组化染色和计算机图像分析等方法,探讨子鼠海马神经元内钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化。结果显示:CaMKⅡ免疫阳性产物分布于子鼠大脑海马神经元胞质内,胞核呈阴性。对照组和实验组子鼠海马神经元内CaMKⅡ平均光密度分别为0.310±0.057和0.192±0.029(P<0.05)。上述结果证实:孕鼠妊娠期被动吸烟使子鼠海马神经元内CaMKⅡ表达减少,可能对子鼠学习记忆能力有一定影响。

晚期糖化终产物受体在小鼠急性肝损伤中的表达及意义

目的探讨晚期糖化终产物受体(RAGE)在刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤中的表达及意义。方法将72只昆明种小鼠随机分为对照(NS)组、ConA组,分别于注射后2、6、12、18、24、48 h眼球取血并留取肝脏标本,用赖氏法检测血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力;HE染色法检查肝组织病理学改变;RT-PCR技术检测肝组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、RAGE、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-lβ)mRNA的表达;免疫组化法检测肝组织HMGB1蛋白的表达;Westernblot法检测肝组织RAGE蛋白的表达;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-lβ含量。结果成功构建ConA诱导小鼠肝损伤模型;注射ConA 2 h肝组织中HMGB1 mRNA表达即增加,至18 h达峰值(P<0.01);HMGB1蛋白表达明显聚集于坏死区域;肝组织RAGE mRNA于12 h表达上调;RAGE蛋白的表达于24 h达到峰值,与NS组相比差异有统计学意义(P<0.01);肝组织TNF-αmRNA表达分别在6、24 h出现2个峰值,血清TNF-α含量在注射ConA 2 h达峰值(455.25 ng/L),随后逐渐减低,至48 h与NS组相比无明显差异;注射ConA各时间点小鼠肝组织与血清中IL-1β水平均显著高于NS组(P<0.01)。结论在ConA诱导小鼠急性肝损伤模型中,损伤肝组织RAGE的表达显著增加,这可能与诱导肝组织损伤中炎症因子的进一步产生有关。

甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶乙酰胆碱、munc-18的影响

目的观察甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠额叶内乙酰胆碱含量以及munc-18表达的影响,探讨甲减脑额叶损伤及恢复的可能分子机制。方法采用给予含0.05%丙基硫氧嘧啶的饮用水6周建立大鼠甲减模型。自第5周起,给予多奈哌齐、甲状腺素或甲状腺素联合多奈哌齐治疗2周,采用放射免疫法检测血清甲状腺激素水平,碱性羟胺比色法测定额叶内乙酰胆碱含量,免疫组化法检测额叶内munc-18的分布与表达。结果甲减组、多奈哌齐治疗组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)水平显著减低、促甲状腺激素(TSH)水平明显增加(P<0.01),甲状腺素治疗组、联合治疗组T3、T4、TSH水平与正常对照组相比差异无统计学意义;甲减组大鼠额叶内乙酰胆碱含量下降(P<0.05),多奈哌齐治疗组、甲状腺素治疗组、联合治疗组乙酰胆碱含量均恢复至正常水平,其中联合治疗组有进一步恢复趋势;甲减组、多奈哌齐治疗组大鼠munc-18在额叶内Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层表达下降(P<0.05)。其中,以Ⅲ/Ⅴ层下降最为显著(P<0.01),甲状腺素治疗组munc-18表达仍下降(P<0.05),联合治疗组额叶内munc-18表达正常。结论多奈哌齐可以改善甲状腺功能减退引起的额叶内乙酰胆碱含量改变;甲状腺素联合多奈哌齐治疗有利于成年期甲状腺功能减退造成的额叶内胆碱含量改变和突触蛋白损伤的恢复。

甲状腺激素对成年大鼠额叶内synaptotagmin 1表达的影响

目的研究不同甲状腺激素水平对SD大鼠额叶内突触结合蛋白1(syt1)表达的影响。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)复制成年期大鼠甲状腺功能减退(甲减)模型,左旋甲状腺素复制甲状腺功能亢进(甲亢)模型,放射免疫法测定血清甲状腺激素T3、T4水平,免疫组化SP法分析甲减组、甲亢组及正常对照组大鼠额叶分子层(Ⅰ层)、外颗粒层(Ⅱ层)、外锥体细胞层(Ⅲ层)、内颗粒层(Ⅳ层)和内锥体细胞层(Ⅴ层)syt1蛋白的表达情况。结果甲减组大鼠血清T3、T4显著低于正常对照组(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层syt1免疫反应产物明显少于正常对照组(P<0.05);甲亢组大鼠血清T3、T4显著高于对照组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ层syt1免疫反应产物也比正常对照组减少(P<0.05),仅在第Ⅳ层与正常对照组比较无统计学意义。结论甲状腺激素水平的降低和增高可导致成年期大鼠额叶内syt1蛋白表达减少,其减少的原因可能是不同的。

饥饿和再进食对小鼠下丘脑中obestatin表达的影响

目的观察饥饿和再进食对小鼠下丘脑弓状核中obestatin表达的影响,探讨下丘脑弓状核中obestatin在摄食调节中的作用。方法 50只♂昆明小鼠随机分为5组:A组为饥饿0h,B组为饥饿24h,C组为饥饿48h,D组为饥饿72h,E组为饥饿72h后再进食4h。采用免疫组化法检测饥饿不同时段和再进食后下丘脑弓状核中obestatin表达的变化。结果 B、C、D、E组弓状核obestatin表达水平均明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。与D组比较,E组弓状核obestatin表达略升高,差异无统计学意义(P>0.05),A、B、C、D组弓状核obestatin表达呈逐渐降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 obestatin在弓状核中高表达,饥饿可减少obestatin在弓状核中的表达,再进食后无明显变化。提示弓状核中obestatin可能通过其表达的减少参与饥饿状态时摄食行为的调节,而对短期再进食状态时的摄食行为无调节作用。

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。

载脂蛋白E基因敲除及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3及IP3R-1表达的变化

目的观察载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(KO)及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内三磷酸肌醇(IP3)和三磷酸肌醇受体-Ⅰ(IP3R-1)表达的变化。方法将30只C57BL/6J小鼠分为对照组(C组)、ApoE KO组(KO组)、ApoE KO高脂饮食组(KO-HF组)。小鼠造模成功后称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、免疫组织化学染色和计算机图像分析。结果与C组比较,KO、KO-HF组体重、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量明显升高(P<0.05)。HE染色观察到,KO和KO-HF组小鼠海马锥体细胞排列较松散,胞体较小。与C组比较,KO组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低,KO-HF组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低明显(P<0.05)。结论 ApoE KO及高脂饮食可导致小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1表达降低,这两种蛋白可能参与了ApoE异常,由此引发阿尔茨海默病的病理发生发展过程。

高脂饮食对小鼠睾丸超微结构的影响

目的探讨高脂饮食对Apo E基因敲除小鼠睾丸超微结构的影响。方法将12只C57BL/6J雄性小鼠分为对照组和实验组:对照组为野生型小鼠,给予普通饮食;实验组为Apo E基因敲除小鼠,给予高脂饮食。饲养12周后,取睾丸组织制片,应用透射电镜观察其超微结构变化。结果与对照组比较,实验组超微结构变化主要表现为:①生精细胞出现退行性改变:线粒体肿胀空泡变性,粗面内质网扩张,核糖体脱颗粒,胞内出现电子密度较高的异常结构;②支持细胞线粒体肿胀空泡化,核膜外侧出现致密沉淀物,胞内出现较大空泡;③生精小管基膜厚薄不均,成波浪式皱褶;④睾丸间质细胞内线粒体和脂滴明显减少,线粒体呈空泡状,粗面内质网扩张;⑤毛细血管内皮细胞内线粒体空泡变性,粗面内质网上核糖体脱颗粒。结论高脂饮食可导致小鼠睾丸超微结构发生病理学改变,可能对小鼠睾丸功能有一定影响。

胃和弓状核中obestatin在摄食行为调节中的作用

目的观察摄食行为改变对小鼠胃和下丘脑弓状核中obestatin表达的影响,探讨obestatin在摄食行为调节中的作用。方法 50只雄性昆明种小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,分别为饥饿0、24、48、72 h及饥饿72 h后再进食4 h。分别于饥饿不同时段和饥饿后再进食时观察各组小鼠体重的变化;采用免疫组化法检测各组小鼠胃组织和弓状核中obestatin表达水平的变化。结果与A组相比,B、C、D组小鼠体重均明显降低(P<0.01),E组小鼠体重增加(P<0.05)。与A组比较,余4组胃和弓状核obestatin表达均明显降低(P<0.05),B、C、D、E组差异无统计学意义。线性相关分析表明弓状核obestatin表达与处死时体重、胃组织obestatin呈正相关,与体重变化呈负相关。结论饥饿和饥饿后再进食状态胃组织和弓状核中obestatin表达有变化,提示obestatin可能参与了摄食行为的调节。

骨肉瘤组织中endocan、VEGF的表达及意义

目的探讨人骨肉瘤组织中endocan、血管内皮生长因子(VEGF)的表达状况及其与临床病理资料之间的相关性。方法应用SP法对34例经手术切除和病理证实的骨肉瘤组织中endocan、VEGF蛋白的表达进行检测。结果Endocan在骨瘤组织胞质中呈阳性表达,肿瘤周围的血管内皮细胞呈阳性表达。对照组表达无明显表达。分别记录各组的平均光密度(MOD),采用独立样本的t检验分析,两组之间差异有统计学意义。比较endocan、VEGF的MOD值,经Pearson相关统计分析,两组之间差异有统计学意义。En-docan、VEGF的MOD值与患者年龄及性别无相关性,与患者病程及肺转移有明显相关性;endocan、VEGF的MOD与肿瘤的类型有相关性。结论Endocan在骨肉瘤组织中有明显的表达,其表达与骨肉瘤的生长、转移有关,提示检测en-docan的表达对骨肉瘤的预后判断可能有一定的指导意义。

脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成

目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。

肺癌中LKB1蛋白表达的研究

目的研究肿瘤抑制基因LKB1蛋白在肺癌中的表达。方法应用免疫组化方法检测肿瘤抑制基因LKB1蛋白在34例肺癌组织中的表达并结合肺癌的临床病理学特征进行分析。27例非肿瘤患者肺组织作对照。结果实验组34例LKB1蛋白阳性表达的平均光密度值为(0.273±0.056),对照组27例平均光密度值为(0.369±0.022),正常对照组表达强度显著高于实验组,两者比较差异有统计学意义(t=5.177,P=0.000);在肺癌中,LKB1蛋白的表达与肿瘤的恶性程度有显著的相关性(t=2.364,P=0.033),并且和淋巴结阳性与否关系密切(t=2.181,P=0.047)。结论 LKB1蛋白的表达下降可能在肺癌的发生、发展、转移中起重要作用,有可能成为肺癌诊断的参考指标和基因治疗的重要靶点。