ICP患者外周血单个核细胞Th1及Th2细胞变化

目的研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者Th1和Th2型细胞免疫反应的变化,从免疫学角度探讨ICP发病机制。方法采用流式细胞术,分别检测了20例重度ICP患者与20例正常晚期妊娠妇女的外周血单个核细胞和T细胞中Th1和Th2细胞所占的比例。结果重度ICP组外周血单个核细胞中IFN-γ+细胞比例为17.82%±3.43%,明显高于正常晚期妊娠组12.66%±2.34%(P<0.01),而IL-4所占的比例为1.17%±0.26%,低于正常晚期妊娠组1.37%±0.30%,差异有显著性(P<0.05);重度ICP组PB-MC中细胞因子Th1/Th2比率为16.00±4.66,显著高于正常晚期妊娠组9.89±2.82(P<0.01);重度ICP组外周血中T细胞分泌的Th1细胞比例为14.37%±1.38%,明显高于正常晚期妊娠组10.66%±1.18%(P<0.01),而Th2细胞比例1.05%±0.19%,低于正常晚期妊娠组1.24%±0.29%,差异有显著性(P<0.01);重度ICP组T细胞Th1/Th2比率为13.99±2.46,显著高于正常晚期妊娠组8.94±1.84(P<0.01)。结论重度ICP患者与正常晚期妊娠妇女比较,其体内表现为Th1型免疫反应增强,而Th2型免疫反应减弱。体内Th1/Th2细胞平衡紊乱可能与妊娠期肝内胆汁淤积症发生相关。

NS-398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂NS-398对卵巢癌细胞恶性生物学特性的影响。方法以卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,根据NS-398的处理分为对照组、实验组。利用MTS法和免疫组化法检测Ki-67蛋白表达,从而监测NS-398对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和侵袭实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化,采用RT-PCR法检测基质金属蛋白酶(MMP)mRNA的表达情况;采用实时荧光定量PCR及Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关分子表达情况。结果 1 MTS增殖实验表明NS-398对SKOV3细胞增殖作用无影响,免疫组化结果与之一致;2划痕实验和侵袭实验分别显示,NS-398显著下调SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果表明NS-398抑制MMP的mRNA表达;3 Western blot结果表明NS-398上调SKOV3细胞E-cadherin的表达,下调Vimentin、Slug、Snail的表达。结论 COX2抑制剂通过阻止MMP的表达和EMT的发生,从而下调SKOV3细胞的迁移、侵袭能力。

骨髓间充质干细胞条件培养液对小鼠卵母细胞的孤雌激活作用

目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠MII卵母细胞的孤雌激活作用及胚胎发育能力。方法分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM)。通过促排技术获取小鼠MII卵母细胞,分别采用CM、7%乙醇、IVF方法激活,体视显微镜下观察原核形成及囊胚形成率。在CM激活后不同时间点,利用α/β-tubulin抗体标记纺锤体,激光共聚焦显微镜下观察有/无细胞松弛素B(CB)存在时纺锤体的运动变化。结果 CM可以激活小鼠MII卵母细胞,最佳刺激时间为40min,激活率达到95.4%,囊胚形成率为62%,与7%乙醇组比较无显著差异,但明显低于IVF组(95.4%vs.100%;62%vs.88%,P<0.01)。CB可以抑制纺锤体的旋转,阻止第二极体的排出,促进二倍体孤雌胚形成,提高囊胚形成率(62%vs.9%,P<0.01)。结论 CM能有效激活小鼠MII卵母细胞并促进孤雌发育。

SCID鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的研究人原代宫颈癌组织在SCID鼠体内成瘤性及生物学特性。方法接种人宫颈癌组织于SCID鼠皮下,以建立人宫颈癌SCID鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长,组织学特性,检测肿瘤组织,外周血和肝、脾等脏器HPVDNA表达情况。结果成瘤率为100%,移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查一致,HPVDNA呈阳性,亚型与所种植人宫颈癌组织HPV亚型一致,而外周血与肝、脾等脏器HPVDNA呈阴性。结论初步建立SCID鼠人宫颈癌组织模型,其较好的模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步探讨宫颈癌的发病机制及鉴定治疗的新方法提供了一个理想的动物模型。

小鼠同种异体移植卵巢组织的功能及形态学差异

目的:研究同种异体移植卵巢组织在昆明种小鼠(KM小鼠)和重症免疫缺陷鼠(SCID鼠)体内存活、卵泡发育及内分泌功能。方法:分别将同种异体卵巢组织移植到两种去势小鼠肾被膜下,通过阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期变化;移植后1、2个月取移植物和子宫进行形态学观察,并测定血清中雌、孕激素水平。结果:两种小鼠在卵巢移植后均恢复了动情周期,血清中雌、孕激素水平明显高于去势组。术后2个月内,SCID鼠体内移植物存活良好,可见各级卵泡和黄体,但Oct-4阳性细胞逐渐减少;KM小鼠体内移植物则渐进性炎症细胞浸润,最终发生坏死或纤维化。结论:免疫排斥影响移植卵巢的卵泡发育和内分泌功能的发挥;同种异体卵巢在SCID鼠体内存活良好,具有内分泌功能、卵泡发育并可能排卵。

HPV病毒载量与分型检测在评价子宫颈病变中的价值

[目的]探讨HPV病毒载量、分型及多重感染与子宫颈病变程度的相关性.[方法] 对256例患者采用二代杂交捕获技术（Hybrid capture Ⅱ, HC-Ⅱ）检测高危型HPV（High-risk HPV, HR-HPV）病毒载量,快速导流杂交基因芯片技术（Flow-through hybridization and gene chip, HybriMax）进行HPV分型检测,结合组织病理检查分级,实验分为无子宫颈上皮内病变（negative for intraepithelial lesion or malignancy, NLM）组143例、子宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）Ⅰ级组28例、CINⅡ/Ⅲ级组49例和子宫颈癌组36例,分析各组HPV病毒载量、分型及多重感染在评价子宫颈病变中的价值.[结果] HC-Ⅱ检测NLM 组、CIN Ⅰ级组、CINⅡ/Ⅲ级组和子宫颈癌组的HR-HPV感染率分别为27.97%、64.29%、87.75%、100%,与HybriMax方法比较差异无显著性（P〉0.05）;NLM组HR-HPV感染率明显低于CIN Ⅰ级组、CINⅡ/Ⅲ级组和宫颈癌组（P〈0.01）;随着子宫颈病变程度增加,HR-HPV病毒载量也逐渐增加,显示出良好的相关性（r=0.683,P〈0.01）;HPV多重感染率各组间差异无显著性（P〉0.05）,且与子宫颈病变程度亦无相关性（r=-0.062,P〉0.05）.[结论]子宫颈病变程度与HR-HPV病毒载量密切相关,与不同亚型HPV多重感染无关.

提高组织学与胚胎学教学效能的方法探索

通过教学探索和实践,发现在组织学与胚胎学教学过程中紧密结合临床,增加实践机会,凸显课程的重要性和实用性,并注重教学艺术,可以激发学生的积极性和主动性,从而提高教学效能。

ICP患者蜕膜NK细胞表型及杀伤活性的研究

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者蜕膜自然杀伤(NK)细胞的数量、表型特征及杀伤活性,探讨其在ICP发病中的作用。方法选取确定ICP患者15例,正常晚期妊娠妇女15例,用流式细胞仪检测两组蜕膜组织中NK细胞数量及表型,用LDH法测定NK细胞杀伤活性。结果①正常晚期妊娠蜕膜组织中CD56+CD3-NK细胞占蜕膜单个核细胞(DMC)7.82%±3.3%,ICP患者蜕膜中CD56+CD3-NK细胞含量为38.15%±5.1%(P<0.05);②正常晚期妊娠蜕膜组织中CD56+CD16-、CD56+CD16+NK亚群含量明显低于ICP组,差异有显著性(P<0.05);③ICP组蜕膜组织中NK细胞杀伤活性高于正常晚期妊娠蜕膜组,差异有显著性(P<0.05)。结论NK细胞是妊娠晚期蜕膜组织中的主要淋巴细胞,其亚群失衡及功能异常可能是ICP发病的重要原因。

卵巢上皮的干细胞特性

卵巢上皮（OSE）是被覆在卵巢表面的单层扁平或立方细胞，被视为与腹膜的间皮层相连续的盆腔间皮，其详细生物学特性在许多方面仍是未知。与大多数的正常上皮不同，它是一个分化程度相对较低的不定向的细胞层，表达间充质和上皮的典型标记物，在环境因素的作用下可以分化成多种细胞类型。

Piwil2基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化

目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细胞周期分析和裸鼠成瘤实验,观察Piwil2基因表达对NIH3T3细胞的生物学特性的影响。结果建立了稳定过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株。与对照组空白载体细胞系相比,过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞增殖和集落形成能力增强;细胞周期G0/G1期减少、S期明显升高;接种裸鼠后形成的肿瘤体积显著大于对照组。结论 Piwil2基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。

染料木素对子宫内膜异位症裸鼠模型体内病灶组织生长的抑制作用

目的研究染料木素对子宫内膜异位症(EM)裸鼠模型体内病灶组织生长及黏着斑激酶(FAK)活性的影响,探讨其作为EM治疗药物的可能性及其作用机制。方法建立EM裸鼠模型,随机分为染料木素低(0.5 mg/kg)、中(1.5 mg/kg)、高(4.5 mg/kg)三个剂量组、雌激素受体拮抗剂他莫昔芬(4.5 mg/kg)对照组、溶剂对照组和空白对照组,每组5只;隔日注射1次,连续给药2周;每周测量1次病灶直径。并采用化学发光分析法测量各组裸鼠体内雌激素含量,采用免疫印迹法比较各组病灶组织FAK及其下游信号蛋白AKT的表达及其磷酸化水平变化情况。结果和空白对照和溶剂对照相比,染料木素各剂量组均能显著抑制EM裸鼠模型体内病灶的生长(P<0.05),并呈现剂量依赖性的作用特点,其中大剂量组与他莫昔芬对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。分析其作用机制,发现染料木素对EM模型体内雌激素水平没有影响,但能够下调FAK及其下游AKT蛋白的磷酸化水平,而对照药他莫昔芬无此作用。结论染料木素可以有效阻抑EM病灶组织生长,抑制FAK及其下游AKT蛋白活化可能是其作用机制之一。

维甲酸受体β2在宫颈癌靶向治疗中的作用机制

宫颈癌是女性生殖系统常见的癌症之一。手术治疗是早期宫颈癌的主要治疗方法，但对于常伴有复发或转移的晚期宫颈癌，手术常不能根治，而且晚期宫颈癌对化疗或放疗具有抵抗性．通常预后不良。

丙戊酸钠联合全反式维甲酸促进子宫颈癌细胞衰老的发生

目的研究丙戊酸钠(VPA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导子宫颈癌细胞衰老作用,并探讨其分子机制。方法实验分为对照组、VPA组、ATRA组、VPA+ATRA组,采用3 mmol/L VPA、1μmol/L ATRA单独或联合作用于人子宫颈癌He La及Si Ha细胞,对照组仅加溶媒;采用Cell Titer96AQueous法检测细胞增殖;β-半乳糖苷酶化学染色法检测细胞衰老;Q-PCR和Western blot法分别检测衰老相关基因P16、P63、h TERT的mRNA和蛋白表达变化。结果 VPA对He La及Si Ha细胞均有生长抑制作用,与ATRA联合抑制效果明显优于单独用药(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色显示,VPA+ATRA组衰老细胞比例显著增加,与对照组及VPA组、ATRA组比较,差异有统计学意义(P<0.05);QPCR和Western blot法结果显示,VPA单独和联合ATRA可上调P16、P63的表达,降低h TERT的表达,且联合用药优于单独用药及对照组(P<0.05)。结论 VPA联合ATRA可抑制子宫颈癌细胞增殖,上调P16和P63的表达,下调h TERT的表达,可能是其诱导细胞衰老的分子机制。

新生鼠卵巢中卵泡膜干细胞的分离培养及鉴定

目的分离、培养、鉴定小鼠卵巢组织中的卵泡膜干细胞。方法取2～4 d新生鼠卵巢组织,胶原酶、胰蛋白酶联合消化获得单个细胞悬液,GSM-K无血清培养基培养细胞观察细胞球形成;RT-PCR法检测膜基因Ptch1和透明带基因Zp1、Zp2、Zp3的表达,免疫荧光法检测干细胞标记物碱性磷酸酶(AKP)、Oct4、膜细胞标记物Gli3与颗粒细胞标记物FSHR的表达;体外诱导分化,RT-PCR法检测分化标记物Gli2,油红O染色后观察。结果 GSM-K中培养2 d形成细胞球;Ptch1、AKP、Oct4和Gli3表达阳性,不表达Zp1、Zp2、Zp3和FSHR;诱导分化后,Gli2表达,油红O染色阳性。结论新生鼠卵巢组织中存在卵泡膜干细胞,且具有分化潜能。

piRNA与PIWI蛋白家族功能的研究进展

生物体中的RNA可以分为编码RNA和非编码RNA两大类,非编码RNA中存在许多小分子RNA,它们组成了细胞中的RNA调控网络。近年来在哺乳动物的睾丸内发现了一种新型的非编码小分子RNA-piRNA,这种小分子RNA与Argonaute家族中的PIWI蛋白成员相结合才能发挥调控作用。两者共同参与基因表达和调控、蛋白质翻译、配子发生等生物学过程,对生物的生长发育产生了深远的影响。该文对piRNA和PIWI蛋白的结构、特性以及相互作用进行综述。

MAPK及其相关分子在卵母细胞减数分裂中作用的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,广泛分布在雌性和雄性动物的生殖细胞中,可在多种不同的信号转导途径中充当一种共同的信号转导成分,且在细胞周期调控中发挥重要的作用。

PDLIM2基因在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨PDLIM2 mRNA在膀胱尿路上皮癌组织与正常膀胱组织中的表达及其临床意义,研究PDLIM2基因在预测膀胱癌术后复发、进展以及预后判断中的价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测80例膀胱尿路上皮癌组织、10例膀胱黏膜正常组织中PDLIM2 mRNA的表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 膀胱癌组织中PDLIM2 mRNA表达量明显低于正常膀胱组织（P＜0.05）,仅是正常组织中表达量的49.8％,其表达水平与膀胱癌的分化程度、病理分期、肿瘤数目、大小相关,随肿瘤分级、分期、数目、直径的增加而减少（P＜0.05）,与性别、年龄无相关（P＞0.05）.单因素分析表明肿瘤分级、分期、数目及PDLIM2 mRNA表达量是膀胱癌患者术后复发或进展的预后因素.Logistic回归分析表明PDLIM2 mRNA表达是评估膀胱癌患者无病生存预后的独立预测因子[相对危险度（RR）=0.982,95％可信区间（CI）=0.967 ～0.997,P＜0.05],PDLIM2表达低的膀胱癌患者较PDLIM2高表达的患者更容易出现复发或进展.多因素分析发现膀胱肿瘤的分级、数目与PDLIM2 mRNA表达明显相关（P＜0.05）.结论 PDLIM2 mRNA的表达与膀胱癌的发生、发展密切相关,可能是预测膀胱癌术后复发或进展的潜在肿瘤标志物.

骨髓间充质干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟的研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响。方法:分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM)。收集小鼠生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞,根据有无完整颗粒细胞层包裹颗粒细胞-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC)分为2类,分别在4种培养基(CM、DMEM、α-MEM、HTF)中培养不同时间,观察卵母细胞核成熟情况,荧光标记后激光共聚焦检测皮质颗粒(cortical granules,CG)分布和含量变化;体外受精后观察受精率和囊胚形成率。结果:2类COC卵母细胞的成熟率CM组明显高于DMEM组、α-MEM组、HTF组(P<0.01);体外受精率和囊胚形成率CM组明显高于DMEM组、HTF组(P<0.01),与α-MEM组和体内成熟组间差异无统计学意义(P>0.05);CM组卵母细胞内CG分布和含量变化与核成熟同步。结论:CM能使小鼠卵母细胞核、质同步成熟,提高了成熟率和卵母细胞质量。

FSH和LH联合上调卵巢上皮性癌细胞侵袭能力的机制研究

卵巢上皮性癌（卵巢癌）的病死率居妇科恶性肿瘤之首,约90％的卵巢癌被认为起源于正常卵巢表面上皮（ovarian surface epithelium,OSE）或内衬OSE的包涵囊肿.但卵巢癌发生发展的确切机制尚不明确.卵巢癌病情隐匿,易出现侵袭和转移,70％的患者确诊时已处于晚期.目前认为,妇女绝经后或卵巢功能不全者存在高促性腺激素状态,FSH和LH持续刺激可导致细胞过度增殖,最终可引发卵巢癌.

干细胞微环境促进体外培养的卵巢组织内卵泡发育成熟

目的:研究骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)-软琼脂培养体系对小鼠卵巢组织片中卵泡发育的作用。方法:分离、培养、FACS鉴定小鼠MSC;建立MSC-软琼脂"小岛"培养体系,500μm厚小鼠卵巢组织片嵌入支架上培养。培养液内加入1.5IU/mlPMSG,每2天半量换液1次,放射免疫法动态检测雌二醇(E2)和孕酮(P)含量。第6天加入1.5IU/mlhCG,17h后体视显微镜下获取窦卵泡内颗粒细胞-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC),体外受精后观察受精率和囊胚形成率。结果:卵巢组织在MSC-软琼脂培养体系中存活良好,卵泡直径、颗粒细胞数量和层数不断增加,E2水平稳定上升。加入hCG17h后,卵泡进一步成熟,有窦腔形成,P水平急剧上升。获取的卵母细胞体外受精率明显低于体内成熟组(62.5%vs89%,P<0.01),但是囊胚形成率两者间比较差异无统计学意义(82.4%vs87.5%,P>0.05)。结论:MSC-软琼脂培养体系有利于卵泡发育、成熟,获得的卵母细胞功能良好。