蝉花菌丝对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用机制研究

目的:观察蝉花菌丝对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达及肾小管损伤的影响,探讨蝉花菌丝延缓DN进展的作用机制。方法:链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠高血糖,糖尿病所致肾损伤的大鼠模型(DN)与正常大鼠一起随机分为4组:对照组、蝉花组、DN组、DN+蝉花组,饲养24周。观察DN大鼠肾间质α-SMA、SIRT1表达及纤维化程度,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白、24 h尿蛋白、尿白蛋白肌酐比(UACR)、肌酐清除率(Ccr)、肾脏指数。结果:DN大鼠肾小管SIRT1表达显著下降,α-SMA表达明显上调,肾小管纤维化加速,BUN、尿白蛋白、尿白蛋白排泄率、24 h尿蛋白等均显著增加;蝉花菌丝治疗能显著提高DN大鼠肾小管SIRT1表达,延缓肾小管纤维化进程,降低BUN、尿白蛋白、尿蛋白及尿白蛋白肌酐比;蝉花菌丝对非糖尿病大鼠上述指标无显著影响。结论:蝉花菌丝可改善DN肾小管病理损伤、延缓DN进展,从而发挥肾脏保护作用,其机制可能与上调肾小管SIRT1表达有关。

“益气养阴通络法”通过调控SIRT1延缓糖尿病肾病进展的研究

目的:观察SIRT1在"益气养阴通络法"治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用。方法:将179例确诊为Ⅲ期和Ⅳ期DN患者随机分为基础治疗对照组(76例)和"益气养阴通络法"综合治疗组(103例),评价两组患者临床症状疗效、尿微量白蛋白(Alb)及肌酐清除率(Ccr);并通过免疫组化和免疫荧光法分析SIRT1在人肾组织中的表达情况及在DN患者中的变化情况;进一步通过逆转录病毒沉默原代大鼠肾小管上皮细胞(TEC)SIRT1后,观察TEC在AGE-BAS刺激后的凋亡情况。结果:经过6个月治疗,"益气养阴通络法"综合治疗组中医症状积分改善、微量白蛋白排泄率降低及肌酐清除率升高的患者比率明显高于基础治疗对照组(P<0.01);停药6个月后进行随访,"益气养阴通络法"综合治疗组的远期疗效也优于基础治疗对照组(P<0.01)。免疫组化和免疫荧光显示,SIRT1在人肾组织的足细胞、内皮细胞及小管上皮细胞等均有表达,并且上述表达在DN患者中明显降低;而经"益气养阴通络法"治疗后SIRT1表达明显增强。进一步通过体外实验证实,沉默SIRT1后,cleaved caspase3蛋白表达在AGE-BSA刺激的TEC中明显升高。结论:"益气养阴通络法"在治疗DN过程中有着显著作用,而上述疗效可能是通过上调肾脏固有细胞中SIRT1实现的。

肾病综合征合并急性肾损伤研究进展

肾病综合征是一种由多种病因和病理所引起的以肾小球病变为主的一组临床综合征.表现为大量蛋白尿（≥3.0～3.5g/日）、低白蛋白血症（＜30g/日）,患者全身高度水肿,少尿或无尿,伴有血脂代谢异常.其严重并发症有急性肾损伤（AKI）和感染.AKI会加重患者病情,延迟患者愈后,是肾病综合征四大并发症之一.肾病综合征患者并发急性肾损伤发病率低,但增加治疗难度和病死率.国内外研究表明,其在发病机制、临床病理、早期诊断、防治原则均与其他急性肾损伤存在不同之一.

马兜铃酸肾病发病机制的研究进展

马兜铃酸肾病是一种药物性肾损害疾病。国内外学者对其研究已经十余年,但其发病机制目前尚不十分清楚,存在多种观点和假说。本文参阅了国内外相关文献,着重就该病的发病机制简要综述。

二苯乙烯苷通过上调肾小管上皮细胞Klotho表达治疗糖尿病肾病的研究

目的:观察二苯乙烯苷对糖尿病大鼠肾脏肾小管上皮细胞Klotho表达及肾脏损伤的影响,探讨其对肾脏的保护作用及机制。方法:链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠模型,予20 mg·kg-1·d-1二苯乙烯苷灌胃组24周,之后检测肾功能变化,肾小管Klotho表达水平。以腺病毒转染使大鼠原代肾小管上皮细胞(TEC)过表达Klotho,之后以晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激后观察细胞凋亡及增殖情况。结果:DN组大鼠肾小管Klotho表达下降,肾功能明显降低,尿液HAVCR1及8-Ohd G分泌增多;而二苯乙烯苷治疗能明显抑制上述变化。AGEs刺激可使TEC增殖能力下降,细胞凋亡增多,而上调Klotho表达可纠正上述变化。结论:二苯乙烯苷可延缓DN进展,其机制可能与其上调Klotho表达有关。

二苯乙烯苷通过调控NADPH氧化酶/氧化应激治疗糖尿病肾病的研究

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的影响,基于调控NADPH氧化酶/氧化应激探讨二苯乙烯苷延缓DN进展的作用机制。方法体内实验分为4组:正常组、正常+二苯乙烯苷组、DN组、DN+二苯乙烯苷组,DN组、DN+二苯乙烯苷组采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法建立DN大鼠模型,造模成功后,DN组给予饮用水2 m L/只灌胃,DN+二苯乙烯苷组给予二苯乙烯苷20 mg/kg灌胃。正常组、正常+二苯乙烯苷组给予柠檬酸盐缓冲液腹腔注射,然后正常组给予饮用水2 m L/只灌胃,正常+二苯乙烯苷组给予二苯乙烯苷20 mg/kg灌胃。灌胃24周后检测肾功能,分离肾组织检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,分离肾小管组织用Western-blot法检测cleaved Caspase-3、α-SMA、TGF-β1蛋白表达水平,并对肾小管间质行Masson染色观察肾组织纤维化情况。以晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激大鼠原代肾小管上皮细胞(TEC),二苯乙烯苷干预后观察NADPH氧化酶及氧化应激变化。结果体内实验:DN组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、血肌酐水平均明显高于正常组(P均<0.05),并随着病程的进展肾功能损害明显加剧;DN+二苯乙烯苷组干预后12,18,24周24 h尿蛋白、尿素氮、血肌酐水平均明显低于DN组(P均<0.05)。DN组肾组织ROS和MDA水平及肾小管中cleaved Caspase-3、α-SMA、TGF-β1蛋白表达水平及INT%均明显高于正常组(P均<0.05),DN+二苯乙烯苷组各指标水平均明显低于DN组(P均<0.05)。体外实验:AGEs组ROS水平、MDA水平和NADPH氧化酶活性均明显高于对照组(P均<0.05),AGEs+二苯乙烯苷组ROS水平、MDA水平和NADPH氧化酶活性均明显低于AGEs组(P均<0.05)。结论二苯乙烯苷可延缓DN进展,其作用机制可能与其调控肾小管NADPH氧化酶/抗氧化应激通路有关。

不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白对人肾小管上皮细胞(hrTESc)凋亡的影响。方法提取人类微小病变肾病综合征、膜性肾病综合征、局灶-节段性肾病综合征患者尿蛋白,进行蛋白成分分析、细菌内毒素试验、蛋白溶液的肌酐水平等质量鉴定后,试验组分别按1、2、4、8 g/L尿蛋白浓度刺激hrTECs 48 h,空白组无尿蛋白,Hoechst33258染色法观察hrTECs凋亡情况。结果尿蛋白组分构成:微小病变肾病综合征清蛋白83.8%、转铁蛋白11.9%、IgG 3.4%;膜性肾病综合征清蛋白56.4%、转铁蛋白34.6%、IgG 6.9%;局灶-节段性肾病综合征清蛋白59.9%、转铁蛋白15.3%、IgG 13.8%。尿蛋白浓度1、2、4、8 g/L时,膜性肾病综合征组较微小病变肾病综合征组细胞凋亡率均升高(P<0.05);局灶-节段性肾病综合征组较膜性肾病综合征组和微小病变肾病综合征组细胞凋亡率均升高(P<0.05)。3组尿蛋白浓度1、2、4、8 g/L时较空白时,2、4、8 g/L时较1 g/L时,4、8 g/L时较2g/L时,8 g/L时较4 g/L时细胞凋亡率均升高(P<0.05)。结论 hrTECs的异常凋亡与尿蛋白具有浓度依赖关系,同时可能与尿蛋白中IgG成分密切相关,而尿清蛋白可能不是最重要的致病因子。

原发性肾病综合征患者急性肾损伤标志物的检测及其意义

目的:通过检测尿中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因子(KIM-1)、白细胞介素-18(IL-18)及血胱抑素C(Cys C)水平,探讨其在判断原发性肾病综合征(PNS)病情中的价值。方法:采用ELISA法检测18例正常人和82例经肾脏病理确诊为PNS患者的尿NGAL、KIM-1、IL-18水平,并采用全自动生化分析仪检测其血清Cys C水平,分析其与PNS病理类型、肾小管-间质损伤程度及临床各指标的相关性。结果:(1)患者尿NGAL、KIM-1、IL-18和血清Cys C水平均显著高于正常人(P<0.05),且在微小病变型(MCD)、膜性肾病(MN)、局灶-节段性肾小球硬化症(FSGS)三种病理类型肾病综合征患者尿中有依次增高趋势;(2)伴有肾小管-间质损伤的尿NGAL、KIM-1、IL-18和血Cys C水平较未伴肾小管-间质损伤的明显升高(P<0.05),且其水平随着损伤程度的加剧而逐渐升高。(3)尿NGAL与血肌酐(Scr)水平呈密切正相关,尿KIM-1与肾小管-间质损伤程度呈密切正相关,血Cys C则与24 h尿蛋白定量呈密切正相关,尿IL-18与血清白蛋白(Alb)水平呈密切负相关。结论:尿NGAL、KIM-1、IL-18及血Cys C水平均可从一定程度反映PNS患者肾脏损伤及其严重程度。

粤西地区328例肾功能代偿期IgA肾病患者并发高尿酸血症的影响因素分析

目的分析粤西地区肾功能代偿期Ig A肾病患者并发高尿酸血症的影响因素。方法回顾性分析328例肾功能代偿期Ig A肾病患者的临床资料,分析高尿酸血症的影响因素。结果纳入Ig A肾病患者高尿酸血症发生率38.4%(126/328),单因素回归分析显示,年龄、血肌酐、血尿素氮、血清甘油三酯、血清总胆固醇、肾小球球性硬化评分、肾小球损伤积分、肾小管-间质损伤评分、肾小血管损伤评分和Lee氏分级可能与肾功能代偿期Ig A肾病患者并发高尿酸血症有关(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高甘油三酯血症、肾小血管损伤评分>2分与Ig A肾病患者并发高尿酸血症有关(P均<0.05)。结论高甘油三酯血症和肾小血管损伤评分>2分是粤西地区肾功能代偿期Ig A肾病患者并发高尿病血症的独立危险因素。

苯那普利对糖尿病肾病患者尿液内皮素-1排泌的影响及其意义

目的 探讨苯那普利 (benazepril)对糖尿病肾病 (DN)患者肾脏产生及尿液排泌内皮素 - 1(Et- 1)的影响。方法 通过放射免疫方法测定 5 4例糖尿病 (DM)患者血浆 Et- 1浓度 (PEt)及 2 4小时尿 Et- 1排泌量 (UEt V) ,其中 39例糖尿病肾病 (DN)患者观察苯那普利治疗前后 PEt及 UEt V的变化。结果 糖尿病患者 UEt V、PEt均显著增加 (P<0 .0 5 ) ;DN患者较无肾病之糖尿病 (DNM) UEt V更高 (P<0 .0 5 ) ;伴糖尿病视网膜病变及高血压较之不伴有 DN的患者UEt V更高 (P<0 .0 5 ) ;苯那普利治疗两个月后 ,DN患者 UEt V较治疗前显著下降 (P<0 .0 1) ;UEt V与尿白蛋白排泄率及血糖化血红蛋白无相关 ;UEt V与尿 β2 微球蛋白 (β2 MG)及糖尿病病程正相关。结论 DN患者肾脏受损产生 Et- 1致尿液排泌 Et- 1增多 ,苯那普利可能抑制肾脏产生 Et- 1致尿液排泌 Et- 1减少 ,因而对 DN患者肾脏起着一定保护作用 ,为今后进一步探索临床治疗 DN提供一个可行的途径。

“慢性肾衰基本方”对肾小管-间质纤维化防治作用的实验研究

目的:研究“慢性肾衰基本方”的拮抗肾小管-间质纤维化(TIF)作用。方法:5/6肾切除大鼠模型给药4周,检测动物血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平;应用HE染色及PASM染色结合半定量计分法评估肾小管-间质损伤程度;应用免疫组化染色结合数码医学图象分析系统定量评判肾小管-间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白18(CK-18)、胶原I(Col-I)和纤连蛋白(FN)的表达量。结果:CRF模型未治疗组BUN、Scr水平显著较假手术组升高,肾小管-间质严重纤维化,α-SMA表达量显著上调而CK-18表达量显著下调,Col-I和FN表达量也显著上调。经"慢性肾衰基本方"治疗后CRF大鼠BUN、Scr水平显著下降,TIF指数降低,肾小管上皮细胞表达CK-18回升,Col-I、FN及α-SMA表达也有不同程度回降。结论:“慢性肾衰基本方”可通过抑制肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞、抑制肾小管-间质ECM合成而防治TIF。

方格星虫提取物对膜性肾病模型的治疗作用及机制初探

目的:初步探讨方格星虫粗提物(SNP)对膜性肾病(MN)的治疗作用及其可能机制。方法:50只SD大鼠随机分为模型组和对照组,模型组大鼠腹腔一次注入抗FxlA血清建立被动性Heymann肾炎模型,模型建立1周后依24 h尿蛋白排泄量(24 h UPE)随机将Heymann肾炎大鼠分为SNP治疗组和未治疗组,治疗组用SNP灌胃治疗。考马斯亮蓝法每周测定24 h UPE。治疗4周结束后处死大鼠取双肾,光镜、电镜观察肾脏病理改变,RT-PCR法检测肾组织nephrin mRNA和podocin mRNA的表达量。结果:SNP治疗4周后大鼠24 h UPE较未治疗组降低(P<0.05);模型组大鼠肾小球基底膜增厚,上皮下电子致密物沉积,足细胞足突融合等病理改变,SNP治疗组大鼠上述病变较未治疗组减轻,经测定,足细胞足突融合率较未治疗组显著降低(P<0.01);SNP治疗组nephrin mRNA和podocin mRNA表达量较未治疗组升高(P<0.05)。结论:SNP可通过上调膜性肾病大鼠足细胞nephrin和podocin基因表达水平,一定程度上减轻足细胞足突融合,进而减少尿蛋白滤过,可能对人类膜性肾病具有辅助治疗作用。

基于蛋白尿的慢性肾脏疾病防治研究

众所周知,蛋白尿是大多数肾脏疾病的共同表现。对于绝大多数肾小球疾病而言,蛋白尿不仅是肾小球滤过膜严重受损的证据和结果,同时又是肾小管-间质损伤的罪魁祸首,它贯穿慢性肾脏疾病的发生、发展以至向终末期肾衰竭进展的整个过程,并起举足轻重的作用。

膜性肾病尿蛋白对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨膜性肾病尿蛋白对人肾小管上皮细胞凋亡存在剂量依赖关系。方法提取膜性肾病患者尿蛋白,进行蛋白成分分析、细菌内毒素试验、蛋白溶液的肌酐水平等质量鉴定后,试验组分别按1.0、2.0、4.0、8.0 mg/ml蛋白浓度刺激人肾小管上皮细胞48 h,空白组无蛋白,Ho-echst33258染色法观察人肾小管上皮细胞凋亡情况。结果膜性肾病尿蛋白由56.4%白蛋白、34.6%转铁蛋白、6.9%IgG组成。肌酐水平、内毒素均低于人体正常范围的下限。Hoechst33258染色法分析发现试验组与空白组之间,较大浓度尿蛋白组与较小浓度尿蛋白组之间人肾小管上皮细胞凋亡指数有显著差异(P<0.05)。结论肾小管上皮细胞凋亡程度与膜性肾病尿蛋白存在浓度依赖关系。

狼疮肾炎患者肾组织和外周血IL-18BP表达和分泌的研究

目的探讨白细胞介素18结合蛋白(IL-18BP)在狼疮性肾炎(LN)疾病发展中的作用。方法收取在该院已确诊但未治疗的LN患者30例,正常对照18例,免疫组织化学法检测肾组织IL-18BP的表达,并采用图像分析系统进行半定量分析;ELISA法检测外周血IL-18BP水平,并对LN患者肾组织和外周血IL-18BP表达和分泌量进行相关性分析。结果 LN患者肾组织IL-18BP表达量显著高于正常对照组(P<0.01),LN患者血清IL-18BP水平也高于正常对照组(P<0.05);IL-18BP在LN肾组织中的表达与其血清水平呈明显正相关(P<0.01)。结论 IL-18BP的高表达和高分泌可能对IL-18的过度分泌具有一定的拮抗作用,从而对LN发展起着一定的保护作用。

“慢性肾衰基本方”抗肾小球硬化的实验研究

目的:探讨"慢性肾衰基本方"对5/6肾切除慢性肾衰竭大鼠模型肾小球硬化的拮抗作用。方法:应用"慢性肾衰基本方"处理构建成功的5/6肾切除大鼠模型4周;应用全自动生化分析仪及血细胞分析仪检测实验动物血清钙(Ca2+)、磷(P3-)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平以及血红蛋白(Hb)浓度,HE染色及PASM染色结合图像分析评估系膜/肾小球面积比值,免疫组化染色结合数码医学图像分析系统定量评判肾小球α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达量。结果:"慢性肾衰基本方"治疗组血清BUN、Scr、P3-水平和系膜/肾小球面积比值显著低于模型对照组,而血清Ca2+水平和Hb浓度则显著高于对照组,肾衰竭大鼠系膜/肾小球面积比值和肾小球α-SMA的表达量呈正相关。结论:"慢性肾衰基本方"可减轻肾小球硬化,保护残余肾功能,其机制可能与抑制肾小球固有细胞转分化有关。