生物化学小班化教学与创新型医学人才培养

在医学生物化学的教学中,探索实施小班化教学模式,通过多种教学方式的运用,激发学生的自主学习热情;以培养学生团队协作和创新能力为导向,激发创新思维,以科研促教学;搭建开放性实验平台,优化评价体系,推动转化式学习,以培养高素质的研究型临床医学人才。

黏蛋白型O-聚糖在人类肿瘤中的结构异常及生物学功能

黏蛋白是细胞表面的或分泌的、具有高度O-糖基化修饰的糖蛋白.在黏蛋白中,O-聚糖(O-glycan)是通过N-乙酰氨基半乳糖与丝氨酸或苏氨酸之间形成α连接,该结构即被称为黏蛋白型O-聚糖.黏蛋白型O-聚糖是由多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)家族催化起始合成的,近年来,该酶的催化机制及结构特点已成为糖基转移酶研究的热点.在肿瘤中常常伴随着黏蛋白型O-聚糖结构上和数量上的改变,形成肿瘤特异聚糖结构(cancer-associated glycans),如肿瘤Tn和T抗原等.肿瘤特异聚糖使肿瘤细胞的抗原性和黏附能力发生改变,促进肿瘤细胞的恶性增生与转移.而这些肿瘤特异聚糖结构,也为肿瘤的诊断与抗肿瘤药物或疫苗开发提供了理论基础.

人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究

目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能。方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G418选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法鉴定转基因细胞;MTT法分析转基因细胞对T细胞的体外增殖作用;流式细胞仪分析T细胞表面活化分子标记CD4CD25、CD8CD25的表达。结果:成功克隆和构建了能稳定表达人CD133-2分子的转基因细胞CD133-2/L929,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,下调T细胞表面分子CD4CD25和CD8CD25的表达。结论:稳定表达CD133-2蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究奠定了物质基础。

ppGalNAcT2反义RNA对胃癌细胞SGC7901生物学特性的影响

目的:研究人胃癌细胞SGC7901中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)基因表达与肿瘤转移相关基因MMP2,TGF-β1表达的相关性,以及对细胞增殖和形态生物学特性的影响。方法:用两个已构建好的反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过共聚焦显微镜,RT-PCR检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后,胃癌细胞SGC7901中TGF-β1,MMP2表达水平,细胞增殖以及形态的变化。结果:反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞的形态发生改变,分裂增殖减慢。结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1,MMP2基因在mRNA表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响。结论:pp-GalNAc-T2可能在肿瘤的增殖、浸润和转移中发挥作用。

阻断型抗人CD258(LIGHT)单克隆抗体的研制及生物学特性的鉴定

目的分析CD258(LIGHT)/单纯疱疹病毒侵入介体(HVEM)介导的信号通路对T细胞的协同刺激作用与机制。方法以基因转染细胞L929/LIGHT为免疫原免疫小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脱氧核苷(HAT)选择性培养基培养杂交瘤细胞。流式细胞术分析筛选阳性克隆,经过4次亚克隆化培养,获得1株小鼠抗人LIGHT单克隆抗体(m Ab),检测其是否识别特异性抗原位点,体外外周血单个核细胞(PBMC)与LIGHT m Ab共培养。结果反复筛选并亚克隆获得一株鼠抗人LIGHT单克隆抗体7A8,亚类为Ig G2b,轻链为κ型。流式细胞术分析该m Ab特异性识别细胞表面的LIGHT分子。LIGHT m Ab与转基因细胞的结合率受到HVEM-Ig融合蛋白干预而有所降低。PBMC与LIGHT转基因细胞体外共培养实验证实,该m Ab阻断淋巴细胞活化和增殖,进一步减少细胞因子分泌。结论成功获得一株特异性识别人LIGHT分子的单克隆抗体7A8,与HVEM-Ig融合蛋白结合L929/LIGHT的抗原表位不完全相同,是一株有阻断效应的功能型抗体。

浅论医学特色生物化学及分子生物学实验教学改革与建设

论述医学特色生物化学及分子生物学实验教学改革与建设、实验教学改革的必要性,并提出实验教学改革的内容及具体目标。

细胞表面α2,3唾液酸结构与胃癌细胞AGS增殖、迁移的关系及相关基因表达的初步研究

目的 检测6个α2,3唾液酸转移酶基因在胃癌细胞AGS的表达,以及AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构对增殖、迁移能力的影响.方法 通过RT-PCR分别检测6个基因在胃癌细胞AGS mRNA水平的表达情况.以不同活性浓度的α2,3唾液酸酶处理AGS细胞,通过MTT法检测其生长曲线的改变,通过划痕试验检测其迁移能力的改变.结果 在胃癌细胞AGS中,α2,3唾液酸转移酶家族的6个成员有两个在mRNA水平表达.分别是ST3Gall和ST3Ga14;α2,3唾液酸酶处理后,AGS生长周期缩短,迁移能力显著增强.结论 AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构可能通过影响细胞之间的识别、改变信号通路,延长AGS细胞的生长周期,抑制其迁移能力.

小鼠多肽：N一乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究

目的探讨小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性，揭示其进化规律。为多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族各成员间结构相似但功能不同的特征提供一定的依据。方法采用生物信息学软件和网上数据库对核酸、蛋白质序列进行同源比较，结构域分析和进化树绘制。结果小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性，系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族，结构相似，但其进化方式属于趋异性进化。

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原对磷酸钙成骨矿化体系的作用

该文以磷酸钙盐的生物矿化作用为着眼点，通过模拟生物体内生物矿化的实际环境，测定不同时间内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ种不同类型胶原对磷酸钙矿化作用的影响，由以上实验可得出两个结论：1．矿化胶原的最佳原材料应为Ⅲ或I型胶原；2．胶原移植物已失去了成骨矿化活性，可以安全地移植于皮下缺损组织。

ppGalNAc-T2对胃癌细胞株SGC-7901生物学性能的影响

目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)对胃癌细胞株SGC-7901细胞性能的影响。方法构建ppGalNAc-T2RNA干扰真核载体(pSilenCircle-SiT2)、正义真核表达载体(pEGFP-C1-T2)及空载体(pEGFP-C1),分别转染胃癌细胞株SGC-7901细胞。MTT法检测上述各组转染后细胞对SGC-7901细胞增殖的影响;细胞黏附和穿膜实验分别检测其黏附力和迁移力的变化;同时采用RT-PCR和Westernblot检测MMP2、MMP14、TGF-β1等与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果转染正义真核表达载体的SGC-7901细胞,随着ppGalNAc-T2表达量的增加,细胞的生长增殖受到抑制,并对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力降低,但其侵袭迁移能力变化不明显;而转染ppGalNAc-T2RNA干扰载体的SGC-7901细胞,细胞生长最快。ppGalNAc-T2与肿瘤细胞相关因子TGF-β1、MMP2的mRNA表达水平成负相关,但对MMP14无明显影响,Westernblot检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致。结论ppGalNAc-T2可影响胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖、黏附能力,并影响与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。

一株特异性识别4IgB7-H3单克隆抗体的研制及其生物学特性的初步分析

研制特异性识别人4IgB7-H3的鼠单克隆抗体,并对其生物学特性和4IgB7-H3分子的表达特性进行初步分析。以高表达人4IgB7-H3的293T细胞为免疫原,常规免疫小鼠、细胞融合和筛选。L929/4IgB7-H3细胞为抗体筛选阳性细胞,L929/2IgB7-H3为抗体筛选阴性细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次亚克隆化,获得l株能稳定分泌特异性识别人4IgB7-H3的鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞株9C3。经位点竞争实验对该抗体抗原表位的识别特异性进行了鉴定。继而利用该单抗,采用流式细胞术检测4IgB7-H3在肿瘤细胞株和免疫细胞上的表达特性。结果表明,蛋白水平上4IgB7-H3非常有限地表达在一些肿瘤细胞株,人外周血单核细胞以及上调性表达在成熟的树突状细胞。而2IgB7-H3分子广泛地表达在各种肿瘤细胞株、持续性表达在单核细胞和分化不同阶段的DC。这与先前研究所揭示的4IgB7-H3在mRNA水平的表达远高于2IgB7-H3不相一致,提示2IgB7-H3分子可能是B7-H3发挥生物学功能的主要形式。鉴此,4IgB7-H3单克隆抗体9C3的成功获得为进一步分析人B7-H3两种剪切体的表达特性及生物学功能提供了新的实验手段。

黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

目的探讨黄芩总黄酮(total flavonoids of scutellariabaicalensis georgi,TFSB)对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用。方法气管内注入博莱霉素制备大鼠肺纤维化模型,给予TFSB灌服28 d,每天1次后,计算肺系数、测定肺组织和血清中肺纤维化部分相关生化指标,观察大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平,Western blot检测平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)与过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)的蛋白表达水平。结果与模型组相比,TFSB各剂量组大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)含量、血清与肺组织匀浆中丙二醛(MDA)含量降低(P<0.05,P<0.01),血清与肺组织匀浆中谷胱甘肽(GSH)含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清总抗氧化能力(T-AOC)升高(P<0.05,P<0.01),TFSB各剂量组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度降低(P<0.01),RT-PCR和Western blot结果显示:TGFβ-1、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达水平降低(P<0.05),PPAR-γ蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 TFSB对博莱霉素致大鼠肺纤维化有一定的防治作用,其机制可能与机体内的抗氧化和下调TGF-β1信号通路有关。

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在SGC7901细胞中同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊(英文)

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)在高尔基体中催化粘蛋白型O-糖基化的第一步.首先进行了人ppGalNAcT2多克隆抗体的制备和鉴定,进一步通过对分离的亚细胞结构进行蛋白质印迹分析,免疫细胞化学后共聚焦显微镜观察此抗体和两个高尔基体标记GS28(顺面高尔基体的分子标志)和TGN38(反面高尔基体的分子标志)来研究ppGalNAcT2在SGC7901细胞株中的亚细胞定位.结果表明:约有60%的ppGalNAcT2信号和GS28共定位,大约36%的ppGalNAcT2信号和TGN38共定位.约有34%的TGN38和ppGalNAcT2信号重叠,而约38%的反面高尔基体标志和ppGalNAcT2重叠.结论是:在SGC7901中,ppGalNAcT2同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊中,实验证实了在高尔基体中进行粘蛋白型O-糖基化的起始反应.

可溶性B7-H3(sB7-H3)在急性白血病中的检测及临床意义

目的:检测sB7-H3在急性白血病病人脑脊液中的不同表达,以及分析该分子的表达与急性白血病的亚型的相关性。方法:采用ELISA的方法来检测sB7-H3在176位白血病病人脑脊液中的表达。依据国际公认的FAB(French-Amer-ican-British)分类系统将急性白血病病人分型。结果:sB7-H3在急性淋系白血病与急性髓系白血病中的表达差异显著(P=0.0381),这与人白血病细胞株的检测结果一致;在急性淋系白血病的亚型中,sB7-H3的表达没有显著性差异;在急性髓系白血病的亚型中,sB7-H3的表达在M3与M5和M4与M5之间存在显著性差异(分别为P=0.024 3和P=0.022 3)。结论:sB7-H3的表达与白血病的分型具有一定的相关性,同时也进一步证实B7-H3参与了人体免疫平衡的调节,可能会为今后急性白血病的临床诊断提供依据。

右侧结肠癌伴Sister Mary Joseph’s结节及腹股沟淋巴结转移——一例报告及文献综述(英文)

Sister Mary Joseph’s结节(Sister Mary Joseph’s nodule,SMJN)是指腹腔内恶性肿瘤导致的脐部转移性结节,1949年由Hamilton Bailey命名以纪念St.Mary’s Hospital的护士Sister Joseph。SMJN并不多见,但个案报道屡屡见诸文献。这种脐部转移可以与腹腔内肿瘤同时出现或异时出现,是预后极差的表现。SMJN最常见原发肿瘤为胃癌及卵巢癌,结肠癌特别是右侧结肠癌引起的SMJN极其罕见。另外右侧结肠癌转移至腹股沟淋巴结未见文献报道。本文报道一例右侧结肠癌同时伴有SMJN及腹股沟淋巴结转移,并对相关文献进行综述。

结直肠癌患者手术前后血小板计数及其变化与预后相关性研究

目的：探讨手术前后血小板（PLT）计数及其变化对结直肠癌患者预后的影响。方法回顾性分析肿瘤外科260例行结直肠癌根治术患者的临床资料，根据手术前后PLT计数分为术前正常PLT组（PLT＜300×10^9/L）和术前高PLT组（PLT≥300×10^9/L），同理分为术后正常PLT组和术后高PLT组，另按照手术前后PLT计数的变化，分为术后PLT升高组、术后PLT降低组，采用log-rank单因素生存分析和COX回归模型进行生存分析。结果单因素生存分析显示术前正常PLT组的生存优于术前高PLT组；而术后高PLT组的生存优于术后正常PLT组，进一步的分析显示术后PLT升高组的生存优于术后PLT降低组，虽然以上三组比较无统计学意义，但两条生存曲线有进一步分离的趋势；多因素分析显示术前PLT≥300×10^9/L（RR：0.553；95%CI：0.318～0.962；P=0.036）和术后PLT＜30×10^9/L（RR：1.824；95%CI：1.006～3.308；P=0.048）都是影响结直肠癌预后的独立危险因素。结论手术前后PLT的异常升高对结直肠癌预后判断作用相反，其机制可能与部分结直肠癌细胞分泌促血小板生长因子有关，而具有该分泌功能的结直肠癌与不良预后相关。

慢病毒介导的RNA干扰ppGalNAc-T2基因表达抑制Jurkat细胞增殖和迁移(英文)

在肿瘤中,黏蛋白O-糖基化有着重要的生物学功能.控制O-糖基化起始合成的是多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族,研究该酶家族对阐明O-糖基化在肿瘤中的作用机制有重要的意义.探讨了靶向干扰ppGalNAc-T2基因表达对白血病Jurkat细胞株增殖及迁移的影响.首先合成ppGalNAc-T2特异shRNA干扰及对照序列,将其连接至慢病毒干扰载体YH1;重组载体经双酶切、测序鉴定正确后与包装质粒共转染293T细胞,获得的病毒颗粒经过滤纯化后感染Jurkat细胞,流式细胞分选仪进行细胞分选以获得ppGalNAc-T2基因稳定干扰表达的Jurkat细胞,然后使用RT-PCR和Western blot方法对各组别细胞中ppGalNAc-T2基因表达情况进行分析,以确定ppGalNAc-T2基因表达被有效干扰;进一步利用MTT实验和Transwell实验分析ppGalNAc-T2基因干扰表达对Jurkat细胞增殖及迁移的影响.结果表明,成功构建了靶向干扰ppGalNAc-T2基因表达的慢病毒载体,感染Jurkat细胞后能稳定干扰ppGalNAc-T2基因表达.MTT和Transwell实验研究发现,下调ppGalNAc-T2基因表达对Jurkat细胞增殖和迁移有抑制作用.

转录因子Ets-1与β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析(英文)

β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8(β3GnT-2,β3GnT-8)共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖([Galβ1→4GlcNAcβ1→3]n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调,但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导HL-60分化过程中,转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6mol/L ATRA诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化,RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达明显增加;进一步采用染色质免疫沉淀(ChIP)结合电泳迁移率变动实验(EMSA)检测证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区.以上结果表明,转录因子Ets-1对人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用.

高校实验室中小型仪器管理的不足与完善

针对高校实验室中小型仪器管理中存在的问题，提出采用信息化技术建立采购、维修、报废系统，结合管理制度上优化提高对中小型仪器的管理效率。

基于高校开放式实验室管理模式的几点想法和建议

为促进高校开放式实验室的良性运转,更好的服务于科研,针对当下开放式实验室的具体管理及运行模式,总结了管理和运行过程中存在的问题并分析产生问题的原因,提出了相应的优化解决方案和整改措施,以期建立更高效的管理模式,实现实验室资源效能最大化,真正发挥开放式实验室资源共享的作用.