ICOS/ICOSL在类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞的表达及临床意义

目的:检测初发类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血淋巴细胞表面共刺激分子ICOS和ICOSL的表达,并探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术和RT-PCR的方法,检测85例初发RA患者和50例健康对照(Healthy control,HC)外周血CD4+T细胞表面ICOS及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达,比较15例初诊RA患者治疗前后ICOS和ICOSL表达水平变化,分析其临床意义。结果:RA患者外周血中ICOS/ICOSL的mRNA的表达水平显著高于HC。RA患者外周血CD4+T细胞表面ICOS表达显著增高[(7.08±4.72)%vs(3.01±1.39)%,P<0.0001]。RA患者外周血中CD14+单核细胞[(5.77±3.45)%vs(3.64±1.43)%,P<0.05]和CD19+B细胞[(5.78±4.52)%vs(3.97±1.63)%,P<0.05]表面ICOSL的表达均高于HC。活动期的RA患者外周血单核细胞和B细胞表面的ICOSL表达高于非活动期患者[(5.45±3.50)%vs(4.04±1.55)%,P=0.036]、[(6.59±5.74)%vs(5.63±4.30)%,P=0.016],治疗后CD4+T细胞表面ICOS的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达均显著下降[(3.33±0.31)%vs(5.56±1.11)%,P=0.076]、[(5.12±1.23)%vs(9.99±2.02)%,P=0.045]、[(3.74±0.57)%vs(8.62±1.77)%,P=0.011]。结论:RA患者外周血单个核细胞表面ICOS和ICOSL异常高表达,且与疾病活动度和临床疗效密切相关。提示ICOS/ICOSL信号通路可能参与RA免疫病理进程。

OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义。结果与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65%±3.51%vs 5.68%±1.68%,P<0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异。pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76%±3.60%vs 3.15%±1.89%,P<0.01)和CD19+B细胞(4.69%±2.40%vs 2.76%±1.33%,P<0.01)中均高于健康志愿者。活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者。治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降。结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关。

原发性干燥综合征患者血清可溶性程序性死亡配体1的表达及临床意义

目的：检测原发性干燥综合征（primary Sjogren＆#39;s syndrome, pSS）患者血清可溶性程序性死亡配体1（sPD-L1）分子的表达，并探讨其临床意义。方法收集61例pSS患者外周血标本，采用ELISA法检测pSS患者及健康对照血清sPD-L1的表达，比较13例初诊pSS患者治疗前后血清sPD-L1表达水平变化，分析其临床意义。结果与健康对照相比，pSS患者血清sPD-L1表达显著升高（0.705±0.051 ng/mL vs 0.366±0.021 ng/mL，P＜0.0001）；pSS患者血清sPD-L1表达水平与ANA滴度、RF、ESR、抗ds-DNA呈正相关（P＜0.05）；活动期的pSS患者血清sPD-L1的表达高于非活动期患者（0.788±0.086 ng/mL vs 0.559±0.042 ng/mL，P=0.022）；伴发多系统损伤pSS患者血清sPD-L1的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者（0.863±0.114 ng/mL vs 0.630±0.114 ng/mL，P=0.022）。治疗后sPD-L1分子的表达无显著变化。结论 pSS患者血清sPD-L1异常高表达，且与疾病活动度、组织损伤密切相关。提示sPD-L1信号可能参与pSS免疫病理进程。

1型糖尿病患者的B细胞及B细胞亚群中程序性死亡受体配体1的表达

目的探讨1型糖尿病(T1DM)患者循环B细胞中程序性死亡受体配体1(PD-L1)的表达情况。方法采集健康对照者(n=25)和T1DM患者(n=25)的外周血标本。流式细胞术检测B细胞及其表面PD-L1的表达。结果T1DM患者B细胞亚群频率与健康对照者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照者相比,T1DM患者CD19^(+)细胞、CD19^(+)CD27^(+)细胞和CD19^(+)CD27^(+)细胞上PD-L1的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。健康对照者与T1DM患者的PD-L1在B10细胞、边缘区B细胞(MZB)和滤泡B细胞(FoB)上的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。T1DM患者的PD-L1在过渡性T2-边缘区前体B细胞(T2-MZP)上的表达低于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD-L1在T1DM发病中可能起保护作用。PD-L1高表达的B细胞可能为自身免疫性糖尿病患者的治疗提供新策略。

T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子-3及其配体在类风湿关节炎患者外周血中的表达及临床意义

目的检测RA患者外周血淋巴细胞表面T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子-3（TIM3）以及血浆中可溶性半乳糖凝集素9（Galetcin9）的表达，探讨其临床意义。方法流式细胞术检测39例RA患者、20例OA患者和25名健康志愿者外周血CD4＋ T、CD8＋ T细胞和NK细胞表面TIM3表达；ELISA法检测血浆可溶性Galetcin9的表达，分析其临床意义。采用Levene方差齐性检验，正态分布数据组间比较采用t检验和Pearson相关分析，非正态分布数据组间采用Mann-Whitney U检验和Spearman相关分析。结果与健康志愿者相比，RA患者外周血CD4＋ T细胞表面TIM3表达升高[（14.7±3.2）%和（5.1±0.8）%，t=2.339，P=0.022 7]，而与疾病对照组差异无统计学意义[（14.7±3.2）%和（5.8±0.4）%，t=1.928，P=0.0589]，其上TIM3表达与血清中RF的含量和对应DAS28评分有明显相关性（r=0.3258，P=0.0430；r=0.4075，P=0.0100）。CD8＋ T细胞表面TIM3的表达均高于疾病对照组和健康对照组[（21.1±3.4）%和（8.3±1.5）%，t=2.531，P=0.014 2；（21.1±3.4）%和（10.7±1.0）%，t=2.314，P=0.024 0]，且与血清中RF的含量和对应DAS28评分有明显相关性（r=0.451 5，P=0.003 9；r=0.524 1，P=0.000 6）。CD56＋NK细胞上TIM3的表达与OA疾病对照组和健康对照组差异均无统计学意义[（56.4±3.4）%和（50.6±3.8）%，t=1.047，P=0.299 8；（56.4±3.4）%和（56.1±3.4）%，t=0.048，P=0.961 9]，且与血清中RF的含量和对应DAS28评分无明显相关性。RA患者血浆中可溶性Galectin9的表达浓度高于疾病对照组[（4.24±0.22）ng/ml）和（3.15±0.18）ng/ml，t=3.187，P=0.002 4]和健康对照组[（4.24±0.22）ng/ml和（2.55±0.14）ng/ml，t=5.567，P〈0.01]，且与RF含量和对应DAS28评分具有相关性（r=0.4792，P=0.0020；r=0.3530，P=0.0275），与CRP无相关性（r=0.1763，P=0.2831）。结论RA患者外周血淋巴细胞表面TIM3和血浆可溶性Galetcin9异常高表达，且与RA的病情活动度密切相关，提示TIM3/Galetcin9信号通路可能在RA发病中起重要作用。

诱导共刺激分子和诱导共刺激分子配体在系统性红斑狼疮患者外周血中表达的变化及临床意义

目的 检测SLE患者外周血淋巴细胞表面诱导共刺激分子（ICOS）和诱导共刺激分子配体（ICOSL）的表达,以及血浆中可溶性ICOSL的表达,探讨其临床意义.方法 流式细胞术检测45例SLE患者和39名健康志愿者外周血CD4＋、CD8＋T细胞表面ICOS及CD14＋单核细胞、CD19＋B细胞表面ICOSL的表达;ELISA检测血浆可溶性ICOSL的表达,分析临床意义.采用Levene方差齐性检验,组间比较采用t检验,两变量间相关性采用Pearson相关分析.结果 与健康志愿者相比,SLE患者外周血CD4＋、CD8＋T细胞表面ICOS的表达均显著升高[（19.1±1.7）％与（14.0±1.5）％,t=2.156,P=0.035]、[（10.0±1.0）％与（6.4±1.0）％,t=2.587,P=0.012].CD14＋单核细胞上ICOSL的表达高于健康志愿者个体[（2.94±0.88）％与（0.89±0.21）％,t=2.152,P=0.04],且与患者血浆C3、C4水平呈正相关（r=0.401,P=0.031;r=0.44,P=0.017）.活动期组SLE患者血浆sICOSL的浓度显著高于非活动期组[（362±25） ng/ml与（278±15） ng/ml,t=2.356,P=0.025],且与CD14＋单核细胞和CD19＋B细胞表面ICOSL的表达均呈负相关（r=-0.4243,P=0.022;r=-0.4099,P=0.025）.MMPI可显著抑制sICOSL产生.结论 SLE患者外周血淋巴细胞表面ICOS和ICOSL,以及血浆sICOSL异常表达,且与疾病活动度密切相关.提示ICOS/ICOSL信号通路可能参与SLE免疫病理进程.

转染小鼠可诱导共刺激分子配体基因细胞株的构建及其对T细胞体外活化与增殖的促进作用

目的构建转染小鼠可诱导共刺激分子配体（ICOSL）基因的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）细胞株（CHO／ICOSL），探讨其对T细胞体外增殖与活化的促进作用。方法从小鼠脾脏细胞中抽提总RNA，采用RT—PCR的方法获得小鼠ICOSL基因，经EcoRI、BamHI双酶切后装入EGFP—plRES2真核表达载体中并测序鉴定，用脂质体转染技术将重组载体EGFP—plRES2／ICOSL转染CHO细胞，经G418加压筛选，流式细胞术和RT—PCR分析其在CHO细胞中的表达。以转染空载体CHO细胞（CHO／Mock）作为对照，将CHO／ICOSL细胞与T细胞体外共培养，通过检测活化T细胞上CD25、CD69的表达及T细胞增殖实验对小鼠／COSL转基因细胞的生物学功能进行初步研究。结果CHO／ICOSL基因转染细胞能稳定地高表达小鼠ICOSL分子。与CHO／Mock相比，CHO／ICOSL基因转染细胞能够显著促进T细胞的体外活化与增殖（P〈0．05）。结论成功构建稳定表达小鼠／COSL的基因转染细胞株，该细胞株能显著促进T细胞的体外活化与增殖，为进一步深入研究该分子生物学功能奠定了基础。